| 标准编号 | SN/T 1840-2006 (SN/T1840-2006) | | 中文名称 | 植物病毒免疫电镜检测方法 | | 英文名称 | Method for detection of plant viruses by immuno-electron microscopy | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020 | | 字数估计 | 6,683 | | 发布日期 | 2006-11-10 | | 实施日期 | 2007-05-16 | | 标准依据 | Chinese industry standards for record 2007 of 3 (total of 87) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了植物检疫中对植物病毒的免疫电镜检测方法。本标准适用于植物种子、苗木等繁殖材料哈植物产品中植物病毒的免疫电镜检测。 | SN/T 1840-2006
Method for detection of plant viruses by immuno-electron microscopy
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１８４０-２００６
植物病毒免疫电镜检测方法
２００６-１１-１０发布
２００７-０５-１６实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准负责起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈枝楠、郑耘、邓琼、王伍、顾光昊。
本标准系首次发布
的检验检疫行业标准。
SN／T１８４０-２００６
植物病毒免疫电镜检测方法
１ 范围
本标准规定了植物检疫中对植物病毒的免疫电镜检测方法。
本标准适用于植物种子、苗木等繁殖材料和植物产品中植物病毒的免疫电镜检测。
２ 原理
免疫电镜（Ｉｍｍｕｎｏ-ｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＩＥＭ）是免疫学原理与电镜负染技术相结合的方法。通过
包被在铜网上的抗体从含有病毒的植物组织粗提液中特异地、高效地捕捉病毒粒体，经乙酸铀染色，在
透射电子显微镜下可以清晰观察到病毒粒体形态结构及其外部的抗体晕圈，为在超微结构水平下对植
物病毒进行鉴定提供了抗原形状和血清学特性的信息。
３ 仪器设备和用具
３．１ 微量榨汁机。
３．２ 高速冷冻离心机。
３．３ 植物光照培养箱（温度可调范围０℃～５０℃）。
３．４ 电子分析天平（感量：０．００１ｇ）。
３．５ ｐＨ计（测量精度：±０．０５ｐＨ）。
３．６ 透射电子显微镜（放大倍数：２０万倍）。
３．７ 研钵、离心管（１．５ｍＬ）、铜网（４００目）、滴管、尖头小镊子、Ｗｈａｔｍａｎ滤纸、塑料培养皿、洁净玻璃
片、Ｐａｒａｆｉｌｍ。
４ 试剂及溶液
４．１ 样品提取缓冲液
将５０ｍＬ０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ碱溶液与１７．２ｍＬ的０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸（ＨＣｌ）混合，再加入蔗糖１３．６８ｇ
和氯化钠（ＮａＣｌ）０．８８ｇ，用灭菌蒸馏水定容至１００ｍＬ，配制成０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ（ｐＨ８．４）样品提取
缓冲液。
将５０ｍＬ０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ碱溶液与４４．７ｍＬ的０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸（ＨＣｌ）混合，用灭菌蒸馏水定容至
１００ｍＬ，配制成浓度为０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ缓冲液（ｐＨ７．２）。
４．３ 磷酸缓冲液
将浓度为１ｍｏｌ／Ｌ的磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）溶液５７．７ｍＬ和浓度为１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠
（ＮａＨ２ＰＯ４）溶液４２．３ｍＬ均匀混合，加入灭菌蒸馏水定容至１０００ｍＬ，配制成０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液
母液（ｐＨ７．０）。使用时，将上述母液用灭菌蒸馏水稀释５倍，配制成０．０２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．０），
备用。
将聚乙烯醇缩甲醛溶于三氯甲烷，配成０．２５％溶液，贮存于冰箱内备用。制膜时取一块洁净的玻
璃片插入溶液中，取出倾斜放置，待三氯甲烷挥发后，在玻璃片上形成一层薄膜，用镊尖沿玻璃边缘划破
薄膜，再将玻璃片倾斜浸入灭菌蒸馏水......
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