| 标准编号 | SN/T 2853-2011 (SN/T2853-2011) | | 中文名称 | 闭合孢子虫病检疫技术规范 | | 英文名称 | Quarantine protocol for mikrocytos mackini | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B51 | | 国际标准分类 | 65.150 | | 字数估计 | 27,262 | | 发布日期 | 2011-05-31 | | 实施日期 | 2011-12-01 | | 引用标准 | GB/T 6682 | | 采用标准 | OIE《水生动物疾病诊断手册》(2006版), NEQ | | 标准依据 | 国质检认〔2011〕291号;认办科函[2015]247号 | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了用于检测牡蛎闭合孢子虫病的临床诊断方法、组织印迹法、组织切片法、透射电镜法、PCR方法和核酸原位杂交等方法。本标准适用于闭合孢子虫病的流行病学调查、监测、诊断和出入境检验检疫。 | SN/T 2853-2011
Quarantine protocol for mikrocytos mackini
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
闭合孢子虫病检疫技术规范
2011-05-31发布
2011-12-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准是参考采用OIE的《水生动物疾病诊断手册》(2006版)中2.2.5章《闭合孢子虫感染》(in-
完善。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局
和中华人民共和国山东出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:孔繁德、徐淑菲、刘荭、陈信忠、龚艳清、王景明、周斌华、徐彪。
闭合孢子虫病检疫技术规范
1 范围
本标准规定了用于检测牡蛎闭合孢子虫病的临床诊断方法、组织印迹法、组织切片法、透射电镜法、
PCR方法和核酸原位杂交等方法。
本标准适用于牡蛎闭合孢子虫病的流行病学调查、监测、诊断和出入境检验检疫。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 材料和设备
3.1 试剂和材料
除另有规定外,下列所用生化试剂均为分析纯。试剂配制方法见附录 A。实验用水符合
GB/T 6682要求。
3.1.1 组织切片制备和染色试剂:姬姆萨(Giemsa)染液、苏木精-伊红染色液、伊红染液、俾斯麦棕Y、
返蓝液:BCIP/NBT;Davidson’s液、甲醛、戊二醛、涂有氨基烷基硅烷的载玻片、盖玻片、石蜡、Epson
812、DNP-30、DDSA(十二烷基琥珀酸酐)、MNA(六甲酸酐)。
3.1.2 DNA提取试剂:蛋白酶K、酚-三氯甲烷抽提法所需要的相关试剂或其他DNA抽提试剂盒。
3.1.3 PCR试剂:10×PCR缓冲液(不含镁离子)、25mmol/L氯化镁、10mmol/LdNTPs、5U/μL
HotstartTaq聚合酶、DNAMakerDL2000、6×电泳上样缓冲液等,均为商品化试剂盒中成分。琼脂
糖5×电泳缓冲液(TBE)。
3.1.4 有机试剂:甲醇、无水乙醇、丙酮、甘油、异丙醇、二甲苯、氧化丙烯、封片树胶和液氮。
3.1.5 无机试剂:氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮钠、醋酸铀、柠檬酸铅和海水。
3.1.6 引物及探针:包括一对PCR引物和地高辛标记的核酸探针,均根据SSUrDNA的基因序列
(GenBank:AF477623:该虫大小为1457bp片段的序列)设计。
上游引物:5’-AGATGGTTAATGAGCCTCC-3’(19bp,位置318~336)
下游引物:5’-GCGAGGTGCCACAAGGC-3’(17bp,位置847~863)
该对引物扩增产物大小为546bp。
探针:3’端用地高辛标记的探针序列,序列为5’-AGCCCACAGCCTTCAC-3’-地高辛(16......
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