SN/T 5116-2019 相关标准英文版PDF
| 标准号码 | 价格美元 | 第2步(购买) | 交付天数 | 标准名称 |
| SN/T 5116-2019 | 259 | SN/T 5116-2019 | [PDF]天数 <=3 | 进出口食用动物、饲料孔雀石绿、结晶紫测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | SN/T 5116-2019 (SN/T5116-2019) |
| 中文名称 | 进出口食用动物、饲料孔雀石绿、结晶紫测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 英文名称 | (Import and export of food animals, feed malachite green, crystal violet determination by liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry) |
| 行业 | 商检行业标准 (推荐) |
| 中标分类 | B46 |
| 国际标准分类 | |
| 字数估计 | 12,157 |
| 发布日期 | 2019-09-03 |
| 实施日期 | 2020-03-01 |
| 标准依据 | 海关总署公告2019年第142号 |
| 发布机构 | 海关总署 |
SN/T 5116-2019
(Import and export of food animals, feed malachite green, crystal violet determination by liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry)
ICS ７１．０４０B４６
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SN／T５１１６-２０１９
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CDEF-GF／GFH
２０１９-０９-０３IJ ２０２０-０３-０１KL
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前言
本标准按照GB/T １．１-２００９给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国上海海关、中华人民共和国南京海关、中华人民共和国北京海关。
本标准主要起草人：赵善贞、张晓燕、崔凤云、霍忆慧、姜珊、李静静、程甲、宋蓉蓉、伊雄海、邓晓军、
郭德华。
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进出口食用动物、饲料孔雀石绿、
结晶紫测定
液相色谱-质谱／质谱法
１ 范围
本标准规定了进出口食用动物和饲料中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿、隐色结晶紫的
液相色谱-质谱／质谱测定方法。
本标准适用于鱼、虾、蟹、贝、鱼粉、植物源性饲料、浓缩饲料、配合饲料、饲料添加剂、精料补充料中
孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的测定。
２ 规范性引用文件
下列文件对于文本件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法。
３ 方法提要
试样中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫残留用乙腈提取，中性氧化铝和阳离子交换
固相萃取柱净化，液相色谱-质谱／质谱仪检测，内标法定量。
４ 试剂材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T ６６８２要求。
４．１ 乙腈：色谱级。
４．２ 甲醇：色谱级。
４．３ 二氯甲烷：色谱级。
４．４ 甲酸：色谱级。
４．５ 乙酸铵：色谱级。
４．６ 盐酸羟胺。
４．７ 对甲苯磺酸。
４．８ 氨水：２５～２８％。
４．９ 中性氧化铝柱：１ｇ／３ｍＬ，使用前用５ｍＬ乙腈活化。
４．１０ 阳离子交换柱：６０ｍｇ／３ｍＬ，使用前用３ｍＬ甲醇，３ｍＬ２％甲酸溶液活化。
４．１１ ０．２５ｇ／ｍＬ盐酸羟胺溶液：称取２５ｇ盐酸羟胺，用水溶解并定容至１００ｍＬ。
４．１２ １ｍｏｌ／Ｌ对甲苯磺酸溶液：称取１７．２ｇ对甲苯磺酸，用水溶解并定容至１００ｍＬ。
４．１３ ５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液：精确称取０．４３５ｇ乙酸铵（精确至０．０１ｇ），用水溶解并定容至１Ｌ。
４．１４ ２％甲酸溶液：准确移取２ｍＬ甲酸，用水定容到１００ｍＬ。
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４．１５ 含５％氨水的甲醇溶液：准确移取５ｍＬ氨水，用甲醇定容到１００ｍＬ。
４．１６ ５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液，含０．１％甲酸：精确称取０．４３５ｇ乙酸铵（精确至０．０１ｇ），加入１ｍＬ甲酸，
用水溶解并定容至１Ｌ。
４．１７ 含０．１％甲酸的乙腈；准确移取１ｍＬ甲酸用乙腈定容到１Ｌ。
４．１８ 标准品：孔雀石绿（ＭａｌａｃｈｉｔｅＧｒｅｅｎＣＡＳ号：２４３７-２９-８）、Ｄ５-孔雀石绿（Ｄ５-ＭａｌａｃｈｉｔｅＧｒｅｅｎ）、隐
色孔雀石绿（ＬｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅＧｒｅｅｎＣＡＳ号：１２９-７３-７）、Ｄ６-隐色孔雀石绿（Ｄ６-ＬｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅＧｒｅｅｎ）、
结晶紫（ＣｒｙｓｔａｌＶｉｏｌｅｔＣＡＳ号：５４８-６２-９）、Ｄ６-结晶紫（Ｄ６-ＣｒｙｓｔａｌＶｉｏｌｅｔ）、隐色结晶紫（Ｌｅｕｃｏｃｒｙｓｔａｌ
ＶｉｏｌｅｔＣＡＳ号：６０３-４８-５）、Ｄ６-隐色结晶紫（Ｄ６-ＬｅｕｃｏｃｒｙｓｔａｌＶｉｏｌｅｔ），纯度均大于９８％。
４．１９ 标准工作溶液的配制：分别称取０．０１ｇ（精确到０．００００１ｇ）孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐
色结晶紫标准品，分别用乙腈溶解并定容至１０ｍＬ，各种标准储备溶液浓度为１ｍｇ／ｍＬ；标准储备溶液
于-１８℃冰箱内避光保存，有效期为６个月。分别移取适量上述标准储备溶，用乙腈溶液逐级稀释，配
成１００ｎｇ／ｍＬ的标准工作溶液，于４℃冰箱内避光保存，有效期为１个月。
４．２０ 内标标准工作溶液的配制：分别称取０．０１ｇ（精确到０．００００１ｇ）Ｄ５-孔雀石绿、Ｄ６-隐色孔雀石绿、
Ｄ６-结晶紫、Ｄ６-隐色结晶紫标准品，分别用乙腈溶解并定容至１０ｍＬ，各种内标标准储备溶液浓度为
１ｍｇ／ｍＬ；标准储备溶液于-１８℃冰箱内避光保存，有效期为６个月。分别移取适量上述内标标准储
备溶，用乙腈溶液逐级稀释，配成１００ｎｇ／ｍＬ的内标标准工作溶液，于４℃冰箱内避光保存，有效期为
１个月。
４．２１ 标准曲线的绘制：根据需要吸取一定量的标准工作溶液以及内标标准工作溶液，用空白溶液配制
成标准曲线，临用前现配。
４．２２ 滤膜：０．２２μｍ有机相滤膜。
５ 仪器和设备
５．１ 液相色谱-质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源（ＥＳＩ）。
５．２ 分析天平：精确至０．００００１ｇ和０．０１ｇ。
５．３ 均质器。
５．４ 离心机：转速可达１００００ｒ／ｍｉｎ。。
５．５ 超声波发生装置。
５．６ 旋转蒸发仪。
５．７ 固相萃取装置。
６ 试样制备与保存
取样品中有代表性的部分约５００ｇ，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。
将试样置于-１８℃避光保存。
注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。
７ 前处理步骤
７．１ 鱼、虾、蟹、贝样品的提取、净化
７．１．１ 提取
称取５ｇ样品（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ塑料离心管中，加入２０μＬ内标标准工作液，加入１０ｍＬ乙
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腈，匀浆２ｍｉｎ（１００００ｒ／ｍｉｎ），超声提取１０ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ（３０００ｒ／ｍｉｎ），取上清液，再加入１０ｍＬ乙
腈，重复提取一次，用乙腈定容到２５ｍＬ待净化。
７．１．２ 净化
取５ｍＬ提取液至中性氧化铝柱上，用４ｍＬ乙腈淋洗固相萃取柱，收集流出液，４５℃氮吹至
０．５ｍＬ左右，残液用乙腈定容至１ｍＬ，加入１ｍＬ乙酸铵溶液混匀，过０．２２μｍ微孔滤膜，上机分析。
７．２ 其他样品的提取、净化
７．２．１ 提取
称取２ｇ样品（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ塑料离心管中，加入２０μＬ内标标准工作液，依次加入１ｍＬ盐酸羟胺溶液，２ ｍＬ 对甲苯磺酸溶液、２ ｍＬ 乙酸铵缓冲溶液、４０ ｍＬ 乙腈溶液，匀浆２ ｍｉｎ
（１００００ｒ／ｍｉｎ），超声提取１０ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ（３０００ｒ／ｍｉｎ），将上清液转移到２５０ｍＬ分液漏斗中，残
渣用２０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并上清液。分液漏斗中加入３０ｍＬ二氯甲烷，３５ｍＬ水，振摇２ｍｉｎ，
静置分层，收集有机相层于梨形瓶中，再用２０ｍＬ二氯甲烷萃取一次，合并有机层，４５℃旋转蒸发至近
干，用６ｍＬ乙腈分三次（每次２ｍＬ）溶解上述提取物。
７．２．２ 净化
将中性氧化铝柱串接在阳离子交换柱上方，取３ｍＬ提取液至中性氧化铝柱上，依次过柱，用２ｍＬ
甲醇淋洗，弃去中性氧化铝柱，依次用３ｍＬ２％的甲酸溶液，３ｍＬ甲醇淋洗阳离子交换柱，弃去流出
液。用１０ｍＬ含５％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮吹至干，１ｍＬ乙腈∶水１∶９（ｖ／ｖ）定容，过
０．２２μｍ滤膜，上机分析。
８ 测定
８．１ 液相色谱条件
８．１．１ 色谱柱：Ｃ１８４．６ｍｍ×５０ｍｍ，粒径１．８μｍ，或性能相当者；
８．１．２ 流动相：Ａ：５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵＋０．１％甲酸，Ｂ：乙腈＋０．１％甲酸；
８．１．３ 流速：４００μＬ／ｍｉｎ；梯度洗脱程序见表１；８．１．４ 进样量：２０μＬ；８．１．５ 柱温：常温。
表１ 梯度洗脱程序表
时间（ｍｉｎ） ５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵含０．１％甲酸（流动相Ａ）
含０．１％甲酸的乙腈
（流动相Ｂ）
０．０ ９５ ５
１．５ ４０ ６０
３．０ ０ １００
１０．０ ０ １００
１０．５ ９５ ５
１５．０ ９５ ５
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８．２ 质谱条件
８．２．１ 离子源：电喷雾ＥＳＩ正离子模式；
８．２．２ 扫描方式：多反应监测 ＭＲＭ；
８．２．３ 其他参考质谱条件见附录Ａ。
８．３ 定量测定
根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准曲线工作液应有
５个浓度水平。基质标准工作液和待测液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的响应值均
应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的参考保留
时间参见附录Ａ。标准溶液中待测物的多反应监测色谱图参见附录Ｂ。
８．４ 定性测定
按照液相色谱-质谱／质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准
品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工
作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表２规定的范围，则可判断样品中存在对应的被
测物。
表２ 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 ＞５０％ ＞２０％至５０％ ＞１０％至２０％ ≤１０％
允许的相对偏差 ±２０％ ±２５％ ±３０％ ±５０％
８．５ 空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。
８．６ 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的残留含
量，计算结果需扣除空白值：
式中：
X ---试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犮 ---标准工作液待测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；
A狊---标准工作液中待测组分的峰面积；
A ---测试液中待测组分的峰面积；
犞 ---样品总稀释体积，单位为ｍＬ；
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９ 测定低限、回收率
９．１ 测定低限（LOQ）
本方法对鱼、虾、蟹、贝中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的测定低限为０．５μｇ／ｋｇ。本方法对鱼粉、植物源性饲料、配合饲料、浓缩饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫
的测定低限为１μｇ／ｋｇ。本方法对饲料添加剂、精料补充料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的测定低限为
１０μｇ／ｋｇ。
９．２ 回收率
采用本方法对鱼、虾、蟹、贝、鱼粉、植物源性饲料、浓缩饲料、配合饲料、饲料添加剂、精料补充料等
基质进行添加回收试验，孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫中的回收率资料参见附录Ｃ。
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附 录 A
（资料性附录）
串联四级杆质谱仪参数（１）
质谱仪参数：
ａ） 电喷雾电压（ＩＳ）：正模式：５５００Ｖ。
ｂ） 雾化气压力（ＧＳＩ）；３８０ｋＰａ（５０Ｐｓｉ）。
ｃ） 气帘气压力（ＣＵＲ）：１７２ｋＰａ（２５Ｐｓｉ）。
ｄ） 辅助气流速（ＧＳ２）：３１０ｋＰａ（４５Ｐｓｉ）。
ｅ） 离子源温度（ＴＥＭ）：５００℃。
ｆ） 监测离子对、碰撞电压（ＣＥ）、去簇电压（ＤＰ）如表Ａ．１所示。
表A．１ 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的定性、定量离子对、碰撞能量（CE）、
去簇电压（DP）参考值、以及保留时间
化合物 定性离子对（ｍ／ｚ）
去簇电压
（ＤＰ）（Ｖ）
砰撞气能量
（ＣＥ）（Ｖ）
参考保留时间
（ｍｉｎ）
孔雀石绿 ３２９．４／３１３．３３２９．４／２０８．２
９６
１０９
４９
４７ ２．８８
隐色孔雀石绿 ３３１．２／２３９．２３３１．２／３１５．３
１０４
１１３
３９
３７ ４．６５
结晶紫 ３７２．４／３５６．３３７２．４／３２８．３
１０８
１１１
５０
５０ ３．２２
隐色结晶紫 ３７４．３／３５８．４３７４．３／２３８．３
１０４
１１５
３９
４４ ４．５０
Ｄ５-孔雀石绿 ３３４．４／３１８．３ １１０ ５０ ２．８６
Ｄ６-隐色孔雀石绿 ３３７．４／２４０．３ １０４ ４５ ４．６１
Ｄ６-结晶紫 ３７８．４／３６２．２ １１５ ５１ ３．２１
Ｄ６-隐色结晶紫 ３８０．４／３６４．５ １３０ ４５ ４．４１
（１） 非商业性声明：附录Ａ所列参考质谱条件是在ＡＢＡＰＩ５５００质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为
提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。
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附 录 B
（资料性附录）
孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的多反应监测（MRM）色谱图
图B．１ 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的多反应监测（MRM）色谱图
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附 录 C
（资料性附录）
食用动物和饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的添加回收率范围
表C．１ 食用动物和饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的添加回收率范围
基质
化合物
孔雀石绿 隐色孔雀石绿 结晶紫 隐色结晶紫
添加浓度
（μｇ／ｋｇ）
回收率
范围
添加浓度
（μｇ／ｋｇ）
回收率
范围
添加浓度
（μｇ／ｋｇ）
回收率
范围
添加浓度
（μｇ／ｋｇ）
回收率
范围
０．５ ８４．６～１１５ ０．５ ８６．４～１１７ ０．５ ８４．２～１１２ ０．５ ８４．４～１１６
１ ９０．２～１１２ １ ９０．６～１１９ １ ９１．２～１１２ １ ９１．６～１１２
２ １００～１１２ ２ ９７．５～１１２ ２ ９７．５～１１０ ２ ９７．５～１１１
５ ９８．０～１１２ ５ ９８．２～１０３ ５ ９８．４～１０５ ５ ９８．８～１０５
０．５ ８４．２～１１６ ０．５ ８４．６～１１２ ０．５ ８４．２～１１５ ０．５ ８２．６～１１６
１ ８７．７～１１３ １ ８８．２～１１２ １ ８９．４～１０９ １ ９０．２～１１０
２ ９１．５～１０３ ２ ９４．０～１１１ ２ ９２．５～１０７ ２ ９２．０～１０６
５ ９７．４～１０５ ５ ９４．０～１０２ ５ ９８．８～１０４ ５ ９７．２～１０７
０．５ ８３．４～１０６ ０．５ ８４．２～１１２ ０．５ ８０．６～１０８ ０．５ ８４．２～１１５
１ ８９．９～１１２ １ ９０．２～１０９ １ ９１．１～１１２ １ ９２．３～１１２
２ ９７．５～１１２ ２ ９３．５～１０６ ２ ９６．０～１０７ ２ ９７．０～１０７
５ ９７．８～１０４ ５ ９８．８～１０３ ５ ９７．８～１０２ ５ ９６．２～１０３
０．５ ８６．８～１１７ ０．５ ８８．６～１１２ ０．５ ８４．２～１１２ ０．５ ８４．２～１０８
１ ９６．１～１１２ １ ９５．４～１１５ １ ９２．１～１１０ １ ９５．４～１１２
２ ９６．５～１０８ ２ ９５．５～１０６ ２ ８９．５～１０２ ２ ９４．５～１１１
５ ９８．２～１０４ ５ ９８．０～１０４ ５ ９７．４～１０５ ５ ９７．２～１０３
鱼粉
１ ８７．５～１１４ １ ８７．１～１１２ １ ８８．４～１１２ １ ８８．１～１１１
２ ９２．５～１１１ ２ ９２．０～１０８ ２ ９２．０～１０８ ２ ９４．０～１１１
１０ ９９．６～１０３ １０ ９８．８～１０３ １０ ９８．４～１０２ １０ ９８．６～１００
植物源
性饲料
１ ８５．０～１１１ １ ８４．３～１１１ １ ８４．３～１１２ １ ８９．５～１１１
２ ９０．０～１０７ ２ ９１．５～１１１ ２ ８７．０～１０６ ２ ８９．５～１００
１０ ９９．１～１０４ １０ ９９．１～１０２ １０ ９９．１～１０２ １０ ９９．４～１１１
配合饲料
１ ８４．５～１１３ １ ８７．９～１１２ １ ８８．４～１１２ １ ８８．１～１１１
２ ８９．０～１１１ ２ ９２．０～１１１ ２ ９４．０～１１３ ２ ９１．５～１１１
１０ ９８．０～１０３ １０ ９８．０～１０３ １０ ９７．２～１０２ １０ ９７．３～１０３
SN／T５１１６-２０１９???? ? ????、????、??
表C．１（续）
基质
化合物
孔雀石绿 隐色孔雀石绿 结晶紫 隐色结晶紫
添......