| 标准编号 | SN/T 5143-2019 (SN/T5143-2019) | | 中文名称 | 出口小麦粉及其制品中氨基脲的测定 液相色谱-质谱/质谱法 | | 英文名称 | Determination of semicarbazide in flour and its products for export -- LC-MS/ MS method | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 10,112 | | 发布日期 | 2019-10-25 | | 实施日期 | 2020-05-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第166号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5143-2019: 出口小麦粉及其制品中氨基脲的测定 液相色谱-质谱/质谱法
SN/T 5143-2019 英文名称: Determination of semicarbazide in flour and its products for export -- LC-MS/MS method
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
出口小麦粉及其制品中氨基脈的测定
液相色谱-质谱/质谱法
中华人民共和国海关总署发布
1 范围
本标准规定了出口小麦粉及其制品中氨基脲的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于小麦粉、煎炸粉、挂面、面包糠、面条、馒头、油炸面制品、蛋黄派、饼干、方便面、面包等小麦粉及其制品中氨基脲的液相色谱-质谱/质谱测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3 方法提要
在酸性条件下，试样中氨基脲与邻硝基苯甲醛反应，衍生产物在中性条件下经HLB柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱检测，内标法定量。
4 试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈：色谱纯。
4.2 甲醇；色谱纯；
4.3 盐酸：优级纯。
4.4 甲酸：纯度98%,色谱纯。
4.5 乙酸乙酯：色谱纯。
4.6 三水磷酸钾。
4.7 氢氧化钠。
4.8 邻硝基苯甲醛。
4.9 0.2 mol/L盐酸溶液：准确量取盐酸(4.3)17mL,加水稀释至1L,混匀备用。
4.10 2.0 mol/L氢氧化钠溶液：准确称取氢氧化钠(4.7)20g,加水稀释至250mL,混匀备用。
4.11 0.3 mol/L磷酸钾溶液：准确称取三水磷酸钾(4.6)79.8g,加水溶解并稀释至1L,混匀备用。
4.12 0.1 mol/L邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5g邻硝基苯甲醛(4.8),加甲醇溶解并稀释至100mL,混匀备用。4℃下避光保存，有效期一周。
4.13 0.1%甲酸溶液：准确量取1.0mL甲酸(4.4),加水定容至1L,混匀备用。
4.14氨基脲盐酸盐(Semicarbazide hydrochloride)标准品：纯度≥95.0%。
4.15氨基脲同位素内标储备溶液(Semicarbazide hydrochloride-[1,2-15N2¹C]):浓度为100 g/mL。
4.16氨基脲标准储备溶液(100μg/mL):准确称取氨基脲盐酸盐14.9 mg,加水50mL溶解，并加甲醇稀释至100 mL。4℃下避光保存，有效期3个月。
4.17 氨基脲标准中间液(1 pg/mL):准确量取氨基脲标准储备液(4.16)1.0 mL,加甲醇稀释至100 mL。4℃下避光保存，有效期1个月。
4.18 氨基脲标准工作液(0.02μg/mL):准确量取氨基脲标准中间液(4.17)2.0 mL,加甲醇稀释至100mL。4℃下避光保存，现配现用。
4.19 氨基脲同位素内标工作液(0.1pg/mL):准确移取氨基脲同位素内标标准溶液(4.15),加甲醇逐
级稀释至0.1 pg/mL。4℃下避光保存，现配现用。
4.2050 mL具塞塑料离心管。
4.21 固相萃取柱：HLB,规格60mg,3mL,或相当者。用前依次用3mL甲醇和3mL水活化。
4.22滤膜：孔径0.22μm,有机系。
4.23 pH试纸：范围5-8。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。
5.2 分析天平：感量0.0001g和0.01g。
5.3 振荡器。
5.4 恒温箱。
5.5 氮吹仪。
5.6 冷冻离心机：4℃,转速10000 r/min。
5.7 涡旋混合器。
6 试样的制备和保存
6.1 小麦粉、煎炸粉等粉状样品
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,充分混匀，装人洁净容器中，密封，并标明标记，备用。
6.2 挂面、面包糠
将取得的全部样品(500g),倒入洁净的混样桶中，充分混匀，用食品粉碎机粉碎，置于洁净容器中，密封，并标明标记，备用。
6.3 面条、馒头、油炸面制品、蛋黄派、饼干、方便面、面包
将试样先剪碎或切成片(试样含夹心、馅或奶油，应先除去该部分),用食品粉碎机粉碎，置于洁净容器中，密封，并标明标记，备用。
7 分析步骤
7.1 水解和衍生化
称取试样约2g(准确至0.01g)于50mL具塞塑料离心管中，加入50μL氨基脲同位素内标工作溶
液(4.19),放置5min,再加入10mL盐酸溶液(4.9),涡旋混匀，加入100μL邻硝基苯甲醛溶液(4.12),涡旋1min,振荡提取30 min后，于37℃恒温反应16 h。
待衍生化后的试样冷却至室温，加入3mL磷酸钾溶液(4.11),用NaOH溶液(4.10)调节pH 7
(±1)后，在4℃下，10000 r/min离心10min,取上清液待净化。
7.2 净化
待净化液(7.1)全部过HLB柱(4.21),用6mL水洗涤，将小柱抽干，用3mL乙酸乙酯洗脱。整个过程控制液体以约2mL/min～3mL/min的速度稳定通过。洗脱液在40℃下氮气吹干，残渣用1mL
甲酸溶液(4.13)溶解，涡旋混匀后，过0.22μm滤膜(4.22),待LC-MS/MS检测。
7.3 标准曲线的制备
取6支50mL具塞塑料离心管，分别加入氨基脲标准工作液(4.18)0μL,25μL、50μL,250 μL、500pL、1000pL,再各加入50μL氨基脲同位素内标工作液(4.19),余下操作同7.1和7.2,制备系列标准溶液。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱参考条件
液相色谱条件如下：
a) 色谱柱：Waters BEH Cis,50mm×2.1 mm,粒径1.7μm,或相当者；
b)柱温：30℃;
c) 进样量：5μL;
d) 流速：0.3 mL/min;
e) 流动相与梯度洗脱条件见表1。
7.4.2 质谱参考条件
质谱条件如下：
a) 离子源：电喷雾离子源(ESI);
b)扫描方式：正离子；
c) 检测方式：多反应监测(MRM);
d)其他条件参见附录A。
7.4.3 定性测定
按照上述条件测定试样与标准溶液，如果试样的质量色谱峰保留时间与标准溶液一致(允许偏差不超过±2.5%);同时试样中定性离子对丰度与其同浓度下标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2规定，则可判断试样中存在氨基脲。在上述仪器条件下，氨基脲衍生物的参考保留时间为
6.3 min,标准溶液的多反应监测(MRM)质量色谱图见附录B。
7.4.4 定量测定
按照上述条件，将标准溶液和试样溶液等体积进行测定，以标准溶液中氨基脲的浓度为横......
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