| 标准编号 | WS/T 350-2011 (WS/T350-2011) | | 中文名称 | 血清葡萄糖测定参考方法 | | 英文名称 | Reference procedure of the measurement of glucose in serum | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 27,232 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-01 | | 引用标准 | ISO 15193-2009 | | 采用标准 | JCTLM《CDC人血清葡萄糖已糖激酶参考方法(分光光度法)》, MOD | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了在临床医学应用中, 测定血清葡萄糖浓度的参考方法。本标准主要适用于参考实验室, 作为血清葡萄糖测定的溯源, 也可作为与血清葡萄糖检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源, 可供有关认可单位及质量管理部门应用。 | WS/T 350-2011: 血清葡萄糖测定参考方法
WS/T 350-2011 英文名称: Reference procedure of the measurement of glucose in serum
ICs 11.020
C50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
血清葡萄糖测定参考方法
1 范围
本标准规定 了在临床医学应用 中 ,测 定血清葡萄糖浓度的参考方法 。
本标准主要适用于参考实验室 ,作 为血清葡萄糖测定 的溯源 ,也可作为与血清葡萄糖检验有关的仪
器和试剂生产企业 的溯源 ,可供有关认可单位及质量管理部 门应用 。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少 的。凡是注 日期 的引用文件 ,仅 所注 日期 的版本适用于本
文件 。凡是不注 日期 的引用文件 ,其最新版本 (包括所有 的修改单)适用于本文件 。
3 术语和缩略语
3,1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件 。
3.1.1原始样本
最初从一个 系统中取 出的一个或几个部分 的集合物 ,旨 在提供该 系统 的信 息或作 为对该 系统做 出决定的基础 。
注:在某些情况下 ,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统 ,此 时取样系统是这些系统的组成部分。
3.1.2实验室样本
准备送到实验室或实验室接收的用于测定 的原始样本或原始样本 的分样本 。
3.1.3分析样本
自实验室样本制备 的、可从 中取 出分析部分 的样本 。
注:在取出分析部分之前 ,分析样本可经过各种处理。
4 测定原理
在 己糖激酶催化下 ,葡萄糖和 ATP发生磷 酸化反应 ,生 成葡萄糖-6-磷 酸与 ADP。 葡萄糖-6-磷 酸
在葡萄糖-6-磷 酸脱氢酶催化下脱氢 ,生 成 6-磷 酸葡萄糖酸 ,同 时使 NAD(P)还原成 NAD(P)H。 反应式如下 :
5 测定样品
标准物质、校准品、质控品、血清。
6 测定试剂
6.1 警示与安全注意事项
6.1.1 氢氧化钡 :高毒类物质 ,吸入及接触可引起中毒 ,表 现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、脉缓、进行性肌
麻痹、心律紊乱、血钾明显降低等。接触高温本品溶液可造成皮肤灼伤同时吸收中毒。称量及配制试剂
时应进行有效防护 ,带防护眼镜、橡胶手套 ,穿隔离服。
6.1.2 硫酸锌 :对眼睛有中度刺激性 ,对皮肤无刺激性 ,误服可引起急性 胃肠炎 ,严 重可引起休克至死
亡 ,称量及配制试剂时应进行有效防护 ,带 防护眼镜 、橡胶手套 ,穿隔离服。
6.1.3 乙酸镁 :吸人、摄入或经皮肤吸收后对身体有害。对眼睛、皮肤和黏膜有刺激作用。吸入可致咳
嗽、咯痰。误服可引起胃痛 、呕吐、呼吸困难、紫绀、肾脏受累等 ,称 量及配制试剂时应进行有效防护 ,带
防护眼镜 、橡胶手套 ,穿 隔离服。
6.1.4 安息香酸 :对皮肤有轻度刺激性 ,蒸汽对呼吸道、眼和皮肤产生剌激 ,但 一般情况下接触无明显
危害性 ,称量及配制试剂时应进行有效防护 ,带橡胶手套。
6.2 试剂原料
6.4.2 试剂制备用水
6.4.2.1 纯水
宜使用高纯度的水 (导 电性<2uS·cm1,pH6~7,硅酸盐(0.1mg·Lˉl)制备试剂。
6.4.2.2 无 Co2水
试剂水在敞口的容器中煮沸 15min,密闭冷却至使用前 。
6.4.3 血清葡萄糖试剂
6.4.3.1 0.5%酚 酞指示剂
准确称取 0.125g酚酞 ,放人烧杯内 ,用 zO mL95%乙醇溶解后转移至 25mL容量瓶内,用 95%乙
醇补足至刻度线。密闭玻璃瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 1个月。
6.4.3.2 22g·L"的 znso4溶液
准确称取 22g ZnSo4·7H20,放人烧杯内 ,用 800mL热的无 Co2水(水温大于 50℃ )溶 解后转
移至 1000mL容量瓶内 ,用无 Co2水补足至刻度线。密闭玻璃瓶室温保存 。稳定 1个月。
6.4,3.3 饱和 Ba(oH)2溶液
准确称取 80g Ba(OH)2·8H20,放 人烧杯内 ,用 800mL热的无 CO2水 (水 温大于 50℃ )溶解后
转移至 1000mL容量瓶内 ,用无 C02水补足至刻度线。需至少 24h后使用。采用带有碱石灰帽的玻
璃瓶密闭室温保存 ,碱石灰帽中的碱石灰每两天更换 1次。稳定 1个月。
6.4.3.4 0.11moⅡ·L1Ba(oH)2溶液
6.4.3.4.1 用无 C02水稀释 245mL饱和 Ba(OH)2溶液→ 1000mL。 密闭玻璃瓶室温保存 ,稳定1d。
6.4.3.4.2 0.11m°l· L1Ba(oH)2溶液的检查方法
6.4.4 1g·Lˉ 1安息香酸稀释液
准确称取 2。 Og安息香酸 ,放人烧杯 内,用 1800mL热的试剂水溶解后转移至 2000mL容量瓶
内 ,用试剂水补足至刻度线。密闭试剂瓶室温保存 。稳定 3个月。
6.4,5 1.5%TrisHˉC1原液
准确称取 31.52g Tris-HCl,放人烧杯内,用 1800mL试剂水溶解后转移至 2000mL容量瓶内 ,
用试剂水补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.6 1.2%Tris-Base原液
准确称取 6。 06g Tris-Base,放入烧杯内,用 400mL试剂水溶解后转移至 500mL容量瓶内,用试
剂水补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.7 pH7.5的 Tr0Mg缓冲液
移取 gOO mL TⅡ⒌Hcl原液和⒛O mL Tris-Base原液至烧杯内充分混匀。准确称量 1.1g醋酸镁
溶解于混合好的 Tris溶液中 ,在 25℃测定混合液 pH值。
配酶试剂时要新鲜配制 ,贮存前用 0.45um滤菌膜过滤溶液 ,贮存在无菌带螺旋帽的硼硅酸盐玻
璃瓶中 ,贮存于 2℃ ~8℃冰箱。稳定 2周 。
6.4.8 0.2%Tris-白蛋白原液
准确称取 0,5g牛血清白蛋白,放人烧杯内 ,用 ⒛0mL To⒌Mg缓冲液溶解后转移至 250mL容
量瓶内,用 Tris~Mg缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.9 ATP原 液
准确称取 0,8268g ATP二钠盐 ,放人烧杯内 ,用 ⒛O mL Tris~Mg缓冲液溶解后转移至 250mL
容量瓶内 ,用 Th⒌Mg缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6,4.10 9-NAD+原 液
准确称取 0.9952g阡NAD· ,放人烧杯内 ,用 200mL Tris-Mg缓冲液溶解后转移至 250mL容量
瓶内 ,用 TⅡ⒌Mg缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存 。稳定 2周 。
6.4.ll 己糖激酶原液
采 25℃ 称量法依据 己糖激酶测定 的含量 获得 总活性 为 1250U己 糖激酶,放 人烧杯 内 ,用
200mL T“s-Mg缓冲液溶解后转移至 250mL容量瓶内 ,用 T⒒⒌Mg缓冲液补足至刻度线。密闭试剂
瓶2℃ ~8℃保存 。稳定 2周 。
6,4.12 s-磷酸葡萄糖脱氢酶原液
采用 25℃称量法依据 6-磷酸葡萄糖脱氢酶测定的含量获得总活性为 1250U6磷 酸葡萄糖脱氢
酶 ,放入烧杯内 ,用 200mL Tris~Mg缓冲液溶解后转移至 250mL容量瓶内 ,用 Tris~Mg缓冲液补足至
刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4,13 酶试剂
试剂验证合格后 ,用 Tris~Mg缓冲液稀释 ⒛0mL ATP原液、200mL阡NAD十 原液、总活性 800U
的己糖激酶原液和总活性 800U的 6磷酸葡萄糖脱氢酶原液-1000mL,轻轻颠倒混匀 ,不 要用力振
荡。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存 。稳定 2周 。
6.4.14 60%葡萄糖液
用 1g/L安息香酸稀释 60mL葡萄糖原液→ 100mL。 密闭试剂瓶 2℃~8℃保存。稳定 1周 。
6.5 标准液的制备
6,5.1 葡萄糖标准原液(10g·L1)的 配制
准确称取 5.000g SRM917b,放入清洁干燥经过灭菌处理的烧杯内 ,加 入 300mL安息香酸稀释液
进行溶解 ,溶解后倒人 500mL A级容量瓶中 ,用 安息香酸稀释液多次冲洗烧杯 ,将 烧杯内的葡萄糖溶
液全部转移至容量瓶 ,加安息香酸溶液至 500mL标记线下 1cm处,密 闭 ,把容量瓶放 zO℃±1℃水槽
中 ,水浸至瓶颈处 ,平衡溶液 30min。用安息香酸稀释液补足 ,密 闭颠倒混匀至少 10次 ,每 一次颠倒、
旋转倒置容量瓶 10s。 配制完成后进行分装 ,每 125mL一份 ,放 入带有螺旋盖的硼硅酸盐的瓶中 ,密
闭并标记 ,注 明 日期 ,保存在 4℃ 或 -20℃ 。如无污染 ,标准原液可以长期稳定。建议每 6个月重新配制 。
在一个新批号标准物质使用前 ,应使用新标准原液配制 1个系列新工作标准液 ,与 旧的系列工作标
准液在 同一批测试 ,每一浓度测定双份 ,比较它们 的变异 。
注 1:sRM917b的称量误差应控制在±0.002g以内。分装后的每一瓶标准原液只能用于制备 1套系列标准液。
注 2:葡萄糖标准原液(10酽 L)的 配制也可采用其他国际或国家标准物质。
6.5。 2 工作标准液的配制
将葡萄糖标准原液和安息香酸稀释液在 20℃ ±1℃ 的水浴箱 中平衡 30min,按表 1配制工作标准液 。
表 1 工作标准液配制方法
配制好的工作标准液应贮存于聚乙烯螺旋帽瓶中,4℃稳定期不超过 1个月。
注:工作标准液贮存瓶必须清洁干燥且经过无菌化处理。
7 测定条件
7.1 仪器
7.1.1 紫外可见分光光度计
7.1.1.1 环境条件
温度 :5℃~35℃,湿度 :45%~85%,避光 ,不能直接放在风 口,防震 ,外 围禁放热源 ,放置场所周
围不能有大容量变压器等强磁场 ,周 围环境宜清洁无尘 ,电 压稳定 ,避 免共用电源设备的频繁开关。应
有接地线 ,接地电阻>100Ω ,仪器两侧各应有大于 zO cm空间。
7.1.1,2 数据测定范围
7.1.4.3 校准情况
7.1.4.3.1 pH标准缓冲液的选择与使用应符合下列要求 :
--应使用至少两种标准缓冲液进行校准 ,标准缓冲液应包含 pH6~8的范围 ,即 应包含需调整的测定试剂的 pH值;
--pH标准缓冲液的不确定度应≤ 0。 01pH;
--所用标准缓冲液应能溯源至国际或国家参考物质。
7.1.4.3.2 pH计校准
按标准物质证书制备 pH标准缓冲液 :将 pH标准溶液温度调整至 25℃ ,按 pH计使用说明书进行校准。
7.1.5 电子分析天平
7.1.5.1 环境条件
温度 5℃ ~35℃,湿度 45%~85%。
7.1.5.2 技术指标
应符合下列要求 :
--准确度级别 :特种准确度级 ;
--最大允许误差 :± 0。 0005g。
7.1.5.3 校准情况
每年进行一次校准 ;必要时可增加校准。
7.1.6 电子天平
7.1.6.1 环境条件
温度 5℃~35℃,湿度 45%~85%。
7.1.6.2 技术指标
应符合下列要求 :
--准确度级别 :高准......
|