路径: 主页 > MISC > 第347页 > WS/T 353-2011 | 标准编号 | WS/T 353-2011 (WS/T353-2011) | | 中文名称 | 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸吡哆醛)参考方法 | | 英文名称 | Reference procedure for the measurement of catalytical activity concentration of aspartate aminotransferase (No pyridoxal-5’-phosphoric acid) | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 37,355 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-01 | | 引用标准 | ISO 15193-2009 | | 采用标准 | JCTLM 《IFCC 37℃酶催化活性浓度测定原级参考方法 第5部分:天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定参考方法》, MOD | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了在临床医学应用中, 测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)的参考方法。本标准主要适用于参考实验室, 作为天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)测定的溯源, 也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源, 可供有关认可单位及质量管理部门应用。 | WS/T 353-2011: 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸吡哆醛)参考方法
WS/T 353-2011 英文名称: Reference procedure for the measurement of catalytical activity concentration of aspartate aminotransferase (No pyridoxal-5’-phosphoric acid)
ICs 11.020
C50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
Ws/T 353 -ˉˉ2011
天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定
(无磷酸吡哆醛)参考方法
1 范围
本标准规定了在临床医学应用中 ,测 定天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)催 化活性浓度 (无磷酸吡哆醛 )的参考方法。
本标准主要适用于参考实验室 ,作为天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度 (无磷酸吡哆醛 )测 定的
溯源 ,也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源 ,可供有关认可单位及质量管理部门应用。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注 日期的引用文件 ,仅所注 日期的版本适用于本
文件。凡是不注 日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单)适用于本文件。
3 术语和缩略语
3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1原始样本
最初从一个系统中取出的一个或几个部分的集合物 ,旨 在提供该系统的信息或作为对该系统做出决定的基础。
注:在 某些情况下,所 提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此时取样系统是这些系统的组成部分。
3.1.2实验室样本
准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样本或原始样本的分样本。
3.1.3分析样本
自实验室样本制备的、可从中取出分析部分的样本 。
注:在取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理。
4 参考方法描述
4.1 测定原理和方法
4.2 检查列表
4.2.1 试剂列表
4.2.2 分光光度计和辅助仪器列表
参考实验室应在表 2登记主要测定仪器 (分光光度计)和 主要辅助仪器 (点式温度计 、天平、pH计、
恒温水浴箱、稀释配液仪、移液器等 )。
4.3 试剂
4.3.1 试剂原料倌息
按表 3填写试剂原料详细信息 。
4.3.2 试剂溶液
4.3.2.1 一般要求
制备溶液时各成分给出的质量是指 100%含量。如果化学物质的含量低于 100%[例 如 y(%)彐,则
应用因子 :凡。n饺nt=100/丿,计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。
溶液的制备应使 用质量 与双蒸水 类似 的高纯度水 (电 导率 (2uS·cm1,pH6~7,硅酸盐<0,1mg·Ll)。
每次称重的扩展 (尼 =2)不确定度 (包括物质纯度的不确定度×正态分布),应≤1.5%。
4.3,2.2 溶液称量 1,17g Tris、4.02g天门冬氨酸 (游离酸)及 0,052g叠氮钠 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶在约 80mL水中 ;
--加 4.2mL~4,4mL5。00mol·Ll的氢氧化钠溶液 ;
--搅拌直到试剂完全溶解 ;
--混合液的 pH值应 比pH靶值低 (约 0.3到 0.9pH单位 );
--在 37℃ 用 2mol·L1氢氧化钠溶液调节 pH到7.65;
--转移至 100mL容量瓶中 ;
--将容量瓶和水平衡至 zO℃;
--加水 (20℃ )至 容量瓶的刻度线。
最终配制的溶液中 Tris浓度为 96.92mmol·Ll、天门冬氨酸(游离酸)浓度为 302.4mmol·L〗 、叠
氮钠浓度为 8.00mmol·L1。 该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 3个月。
注:加水之后天门冬氨酸不溶解 ,必 须先加氢氧化钠溶液 ,以 5m°l· L〗 代替 2m。l· Lˉ 1氢 氧化钠溶液可减少所
需用量 ,精确调整 pH值时需用 2m°l· Lˉl氢氧化钠溶液。
4,3.2.3 溶液 2
称量 1,17g Tris、0,052g叠氮钠 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶在约 80mL水中 ;
--在 37℃ 用 lm°l· Lˉl HCl调pH值到 7.65;
--转移至 100mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 zO℃;
--加水 (20℃ )至容量瓶刻度线。
最终配制的溶液中 Tris浓度为 96.92mmol·Lˉ 、叠氮钠浓度为 8.00mmol·L¨ 。该溶液2℃~8℃稳定性为 3个月。
4,3,2.4 溶液 3
称量 16.1mg NADH二钠盐 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶于 2.00mL溶液 2中 ;
--避光保存 (如 棕色瓶 )。
最终配制的溶液中 NADH二钠盐浓度为 11.34mmol·Ll。 该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 1周 。
4,3.2.5 酶试剂的稀释液
称量 1.zO g牛血清白蛋白、0.90g NaCl,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶于约 80mL水中 ;
--转移至 100mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 ⒛ ℃ ;
--加水 (20℃ )至容量瓶刻度线。
最终配制的溶液中 Naα浓度为 154mmol·Lˉ 1。 该溶液 2℃~8℃稳定性至少 1个月。
4.3.3 温度对缓冲溶液 pH的影响
当温度偏离 37℃ 时 ,调节 pH值的方法 :将 温度计与 pH电极同时浸人混合液中。然后将溶液边
搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的pH值。在校准、控制和调节 pH的过程中 ,搅拌速度要一
致。pH电极应位于被搅拌溶液的中心。
应考虑到在调节 pH的滴定过程中 ,温度是可能改变的因素。为此 ,接近靶值时应重新控制温度 ,
如果需要 ,根据附录 E调整 pH靶值。同样的方法也适用于 pH计的温度补偿调节。
配制溶液 1、 2时 ,需根据不同温度调整 pH值。参阅附录 D来调节溶液的 pH值。
4.4 仪器
分光光度计及辅助仪器主要性能的要求 ,见表 4。
4.6.2.3 分析部分
AST(无磷酸吡哆醛)参考方法测定的样本多为冻干粉或深低温的冰冻样本 ,测 定前需处理为均匀
的液状状态 ,分析部分应取 自该液体样本。实验室需对待测的各种样本经过一定方法处理后 ,
取 出分析部分进行测定。
对每一类型实验室样本应制定详尽的样本处理 soP文件 ,并有记录证实操作达到预期要求。实验
室样本若为冻干粉或干粉 ,应使用质量与双蒸水类似的高纯度水 (电 导率(2uS·cm",pH6~7,硅酸
盐<0.1mg·L1)溶解 ;若为冷冻液体如冰冻血清等 ,应按 SOP文件在严格控制的条件下溶解。
应有处理参考物质的方法和记录。
测定过的样本有贮存待复查、销毁的文......
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