| 标准编号 | WS/T 634-2018 (WS/T634-2018) | | 中文名称 | 肠道原虫检测 碘液染色涂片法 | | 英文名称 | Detection of intestinal protozoa - Iodine staining smear method | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C61 | | 字数估计 | 14,180 | | 发布日期 | 2018-09-26 | | 实施日期 | 2019-04-01 | | 标准依据 | 国卫通(2018)21号 | | 发布机构 | 卫生健康委员会 |
WS/T 634-2018: 肠道原虫检测 碘液染色涂片法
WS/T 634-2018 英文名称: Detection of intestinal protozoa - Iodine staining smear method
ICS 11.020
C 61
WS
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
肠道原虫检测 碘液染色涂片法
1 范围
本标准规定了检测肠道原虫的碘液染色涂片法。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对肠道原虫的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
WS 287 细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准
WS/T 487 隐孢子虫病的诊断
3 术语和定义
WS 287及WS/T 487界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
肠道原虫 intestinal protozoa
寄生在人体肠道的单细胞真核生物,常见的肠道原虫有阿米巴、鞭毛虫、孢子虫、纤毛虫和人芽囊原虫等。
3.2
包囊 cyst
原虫不活动、不摄取营养的阶段。
3.3
碘液 iodine solution
碘和碘化钾的水溶液,用于检查原虫的包囊。
4 仪器设备
4.1 生物显微镜(物镜 10×、40×、100×,目镜 10×)。
4.2 电子天平(称量范围 0 g~100 g,精度 0.1 g)。
4.3 测微尺(目镜测微尺 0.1 mm、物镜测微尺 0.01 mm)。
5 试剂材料
5.1 试剂
碘液(配制方法参见附录A)。
5.2 材料
5.2.1 粪便采样盒(洁净、广口、有盖)。
5.2.2 载玻片。
5.2.3 盖玻片(18 mm×18 mm)。
5.2.4 竹签。
5.2.5 镊子(医用无齿镊,12.5 cm,弯头)。
5.2.6 量筒(100 mL)。
5.2.7 容量瓶(100 mL)。
5.2.8 棕色试剂瓶(100 mL,有盖,磨砂口)。
6 检测步骤
6.1 样本准备
将5 g~10 g新鲜粪便置于粪便采样盒内,在粪便采样盒上标识编号、患者姓名、采集日期,样本
应在24 h内进行检测,如未能及时检测,应在4℃条件下冷藏保存,时间不超过72 h。
6.2 样本检测
于载玻片近中央处,滴1滴配制好的碘液。用竹签挑取绿豆大小粪便,放于碘液中搅匀,涂成直径
1 cm左右、较为均匀的粪膜,厚度以透过粪膜略能辨认其下面报纸的字迹为宜。覆以盖玻片,
置显微镜下检查(参见附录B)。
6.3 镜下观察
使用物镜40×进行观察,按照自左到右、从上到下的顺序查找肠道原虫包囊或卵囊(参见附录B和附录C)。
6.4 结果判定
观察全部涂片发现包囊或卵囊为阳性,未发现包囊或卵囊判定为阴性。以包囊或卵囊大小、形状、
核的数目、核周染色质粒形状和分布、核仁形状和位置、有无纤丝及纤丝排列形状、糖原块和拟染色体
等形态特征判定虫种(参见附录D和附录E)。
附 录 B
(资料性附录)
肠道原虫检测
B.1 粪便检查
于载玻片近中央处,滴1滴配制好的碘液,用竹签挑取绿豆大小新鲜粪便,放于碘液中搅匀,涂成
直径1 cm左右、较为均匀的粪膜,粪膜厚度以透过粪膜略能辨认其下面报纸的字迹为宜。覆以盖玻片,
置显微镜下检查。先用物镜10×找到视野,再用物镜40×进行观察,必要时可用物镜100×观察包囊或
卵囊镜下结构特征,用测微尺测量包囊或卵囊大小。按照自左到右、从上到下的顺序查找肠道原虫包囊
或卵囊。观察全部涂片发现包囊或卵囊为阳性,未发现原虫包囊或卵囊判定结果为阴性。以包囊或卵囊
大小、形状、核的数目、核周染色质粒形状和分布、核仁形状和位置、有无纤丝及纤丝排列形状、糖原
块和拟染色体等形态特征判定虫种。
为避免造成漏检,应隔天采集粪便,连续3次以上。对于一些慢性患者,粪检应持续1周~3周,多次
检查,以确保无漏诊病人。常见肠道原虫的包囊或卵囊多见于慢性腹泻患者及成形粪便,而滋养体多见
于稀便或带有脓血的粪便,滋养体检测常用生理盐水直接涂片法。
盛粪便的容器要干净,并防止污染及干燥,粪便不可混杂尿液等,在粪便采样盒上标识编号、患者
姓名、采集日期,24 h内进行检测。
检测过程中工作人员应做好安全防护,避免粪便污染环境。用具每次使用后要清洗干净并彻底消毒,
废弃物应按医疗废物处置要求处置。
B.2 迈氏唇鞭毛虫
迈氏唇鞭毛虫包囊呈梨形或柠檬状,长度为6.5 μm~10.0 μm,壁薄,有1个细胞核,细胞器包括胞
口纤维(cytostomal fibrils)、动基体和轴丝(axonemes)等。对迈氏唇鞭毛虫,应采集新鲜粪便做碘液染
色,在物镜40×和物镜100×下观察,以提高查找包囊的机会。
B.3 贝氏等孢球虫
贝氏等孢球虫卵囊微小,颜色浅,且虫体在体外容易裂解,很容易漏检。采用2.5%重铬酸钾保存的
粪便标本,可杀灭全部细菌,有利于检出卵囊,并可以长久保存标本。
B.4 隐孢子虫
隐孢子虫卵囊呈圆形或椭圆形,因虫种而异大小不一,在4 μm~6 μm范围内。囊壁光滑、无色,囊
内含有4个子孢子。子孢子月牙状,大小为1.5 μm×0.8 μm,核1个,位于虫体后部。卵囊内含残余体1
个,由成堆颗粒状物和一空泡组成。隐孢子虫卵囊在碘液涂片检测中漏检率较高,常用抗酸染色法进行检测。
急性隐孢子虫病人,其腹泻粪便中含有较多卵囊,一般碘液染色涂片法即可。如检查与病人或家畜
接触过的人群、复查治疗后的病人时,采用浓集法可提高检出率,判断困难时需使用金胺-酚染色、改
良抗酸染色等特殊染色进行鉴别。
B.5 结肠小袋纤毛虫
结肠小袋纤毛虫包囊呈圆形或卵圆形,直径为40 μm~60 μm,呈淡黄色或浅绿色。囊壁厚而透明,
染色后可见胞核。新形成的包囊可清晰见到滋养体在囊内活动。结肠小袋纤毛虫包囊的
排出常呈间歇性,故需反复检查。
附 录 D
(资料性附录)
常见肠道原虫及其包囊或卵囊形态特征
D.1 阿米巴
寄生人体肠内的阿米巴主要有结肠......
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