| 标准编号 | WS/T 647-2019 (WS/T647-2019) | | 中文名称 | 溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂卫生要求 | | 英文名称 | Hygienic requirement for lysostaphin and lysozyme disinfectants | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C59 | | 国际标准分类 | 11.080 | | 字数估计 | 13,17 | | 发布日期 | 2019 | | 实施日期 | 2019-07-01 | | 发布机构 | 卫生健康委员会 | WS/T 647-2019
Hygienic requirement for lysostaphin and lysozyme disinfectants
ICS 11.080
C 59
WS
中华人民共和国卫生行业标准
溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂卫生要求
2019-01-30发布
2019-07-01 实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
目次
前言...1
1 范围...2
2 规范性引用文件...2
3 术语和定义...2
4 原料要求...3
5 技术要求...3
6 应用范围...4
7 使用方法...4
8 运输、贮存和包装...5
9 标签、标志和说明书...5
10 检验方法...5
附录 A（规范性附录）溶葡萄球菌酶酶活性测定...7
附录 B（规范性附录）溶菌酶酶活性测定...9
附录 C（资料性附录）溶葡萄球菌酶色源底物制备...11
前言
本部分按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本部分起草单位：上海市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、
复旦大学。
本部分主要起草人：田靓、朱仁义、袁政安、沈伟、沈瑾、邱侠、陆婉英、黄青山、李国栋、陆晔、
赵晓蔚、黄晋江、吴宏宇。
溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂卫生要求
1 范围
本标准规定了溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂的原料要求、技术要求、应用范围、使用方法、运输贮
存和包装、标签标志和说明书、检验方法。
本部分适用于以溶葡萄球菌酶和（或）溶菌酶为主要杀菌成分的酶类消毒剂。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志
GB 27950 手消毒剂卫生要求
GB 27951 皮肤消毒剂卫生要求
GB 27954 黏膜消毒剂卫生要求
中华人民共和国药典（2015年版）
消毒技术规范（2002年版）卫生部 （卫法监发〔2002〕282号）
消毒产品标签说明书管理规范 卫生部（卫监督发﹝2005﹞426号）
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
酶类消毒剂 enzyme disinfectant
以酶为主要杀菌成分的消毒剂。
3.2
溶葡萄球菌酶 lysostaphin
能水解细菌细胞壁肽聚糖中的甘氨酸肽键，使细菌死亡的酶。
3.3
溶菌酶 lysozyme
能水解细菌中黏多糖的酶。亦称胞壁质酶、N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。
3.4
酶活性单位 enzyme activity unit
酶活性的度量单位。1个酶活性单位指在特定条件下，在单位时间内转化单位底物（或转化底物中
单位有关基团）的酶量。
4 原料要求
4.1 溶葡萄球菌酶
白色或微黄色粉末，无臭、易溶于水；按干燥品计算，酶活性单位应≥100 U/mg。
4.2 溶菌酶
符合国家药品标准中溶菌酶的要求。
4.3 生产用水
符合《中华人民共和国药典（2015年版）》中纯化水的要求。
4.4 其他原料
为食品级或化学纯或符合药典规定的原料，符合国家有关规定，不得使用工业级。
4.5 禁用物质
不应含有抗生素、抗真菌药物、激素以及国家规定的其他禁用物质。
5 技术要求
5.1 外观
不分层、无沉淀和悬浮物、无异味。
5.2 理化指标
5.2.1 pH值
pH值为5.0～8.0。
5.2.2 有效含量
消毒剂中溶葡萄球菌酶的活性范围为0.5 U/mL～20 U/mL，溶菌酶的活性范围为10000 U/mL～
200000 U/mL。
产品有效成分含量在设定值或标示中心值的80%～150%之内。
5.2.3 稳定性
≥12个月。
5.3 杀灭微生物指标
作用浓度和时间按产品标签说明书的要求，杀灭微生物指标应符合表1要求。
用于手消毒应符合GB 27950的要求；用于皮肤消毒应符合GB 27951的要求；用于黏膜消毒应符合
GB 27954的要求。
表1 杀灭微生物指标
项目
杀灭对数值
悬液法 载体法
大肠杆菌（8099） ≥5.00 ≥3.00
金黄色葡萄球菌（ATCC 6538） ≥5.00 ≥3.00
铜绿假单胞菌（ATCC 15442） ≥5.00 ≥3.00
白色念珠菌（ATCC 10231） ≥4.00 ≥3.00
自然菌（现场试验 a） ≥1.00
a用于手消毒做手现场试验，用于皮肤或黏膜消毒做皮肤现场试验。
6 应用范围
适用于手、皮肤和黏膜的消毒。
按产品说明书并有实验依据的产品可增加其他应用范围。
7 使用方法
7.1 手消毒
7.1.1 卫生手消毒
取适量消毒剂于手心，双手互搓使均匀涂布每个部位，作用时间符合GB 27950的要求。
7.1.2 外科手消毒
外科洗手后，取适量消毒剂均匀涂布于双手、前臂和上臂下1/3的皮肤，作用时间符合GB 27950的
要求。
7.2 皮肤消毒
7.2.1 完整皮肤
取消毒剂原液，或将消毒剂原液用符合《中华人民共和国药典（2015年版）》的纯化水或无菌水稀
释至说明书规定浓度，均匀喷雾或用医用棉拭子擦拭皮肤表面，作用时间应符合GB 27951的要求。
7.2.2 破损皮肤
从原包装倒出后一次性使用。取消毒剂原液，或将消毒剂原液用符合《中华人民共和国药典（2015
年版）》的无菌水稀释至说明书规定浓度，冲洗破损皮肤表面，作用时间应符合GB 27951的要求。
7.3 黏膜消毒
7.3.1 口腔黏膜
从原包装倒出后一次性使用。用消毒剂原液，或将消毒剂原液用符合《中华人民共和国药典（2015
年版）》的纯化水或无菌水稀释至说明书规定浓度，均匀喷雾或用医用棉拭子擦拭或含漱，作用时间按
照说明书，最长作用时间5 min。
7.3.2 阴道和外生殖器黏膜
从原包装倒出后一次性使用。用消毒剂原液，或将消毒剂原液用符合《中华人民共和国药典（2015
年版）》的纯化水或无菌水稀释至说明书规定浓度，用医用棉拭子擦拭或灌洗或冲洗，作用时间按照说
明书，最长作用时间5 min。
8 运输、贮存和包装
8.1 运输
运输产品时应避免日晒、雨淋。不可与有异味或影响产品质量的物品混装运输。
8.2 贮存
室温或阴凉处保存，避光、密闭、干燥，不可与有异味或影响产品质量的物品同处贮存。
8.3 包装
产品的包装无毒和清洁，包装材质符合相应材料的化妆品包装要求。产品的包装密封，能保证产品
的稳定性以及在储存运输、使用过程中的安全性。包装储运图示标志应符合GB ∕T l91要求。
9 标识要求
9.1 标签和说明书
符合《消毒产品标签说明书管理规范》
9.2 注意事项
说明书至少包括以下内容：
--避免接触拮抗物。不能与阴离子表面活性剂、Ba2+、Ca2+、Mg2+等同时使用。
--置于儿童不易触及处。
--对蛋白质过敏者慎用。
10 检验方法
10.1 外观
用肉眼观察其色泽、形态，用嗅觉鉴别其气味。
10.2 pH值测定
按《消毒技术规范（2002年版）》规定方法测定。
10.3 有效含量测定
10.3.1 溶葡萄球菌酶活性测定
按照附录A规定方法测定。
10.3.2 溶菌酶活性测定
按照附录B规定方法测定。
10.4 稳定性测定
按《消毒技术规范（2002年版）》的方法，用微生物法进行稳定性实验。有效期< 24个月，用自然
留样法测定；有效期为24个月，根据产品性能，选用37 ℃存放90 d的方法，或用自然留样法测定。
在有效期内，有效成分含量不得低于标示量的下限值。
10.5 杀灭微生物试验
按《消毒技术规范（2002年版》有关规定测定。宜采用悬液法；若选用载体法时，应采用非吸附性
材料（金属、玻璃、猪皮等）做载体。
A A
附 录 A
（规范性附录）
溶葡萄球菌酶酶活性测定
A.1 原理
以偶联活性艳蓝染料KNR的金黄色葡萄球菌细胞壁肽聚糖（KNR-PG）为色源底物，根据酶作用过
程中定量地释放带有KNR染料基团的小分子可溶性片段产物，在除去未反应的不溶性底物后，对上清
液进行比色测定溶葡萄球菌酶酶活性。
在pH 10.0的1.2 mL反应体系下，37℃温度下，在波长595 nm处，每分钟使KNR-PG溶液吸光度值增
加0.35的酶量为1个溶葡萄球菌酶酶活性单位。
A.2 试剂
A.2.1 溶葡萄球菌酶标准品溶液：按照溶葡萄球菌酶活性单位定义，对溶葡萄球菌酶冻干粉进行标定。
需要时，用Tris-HCl缓冲液溶解，配制成0.9 U/mL的标准品溶液，-20 ℃贮存，每次试验用1支，避免
反复冻融。
A.2.2 甘氨酸：分析纯。
A.2.3 氢氧化钠：分析纯。
A.2.4 三羟甲基氨基甲烷（Tris）：分析纯。
A.2.5 95%乙醇：分析纯。
A.2.6 甘氨酸-氢氧化钠缓冲液：0.2 mol/L，pH 10.0。
A.2.7 三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris-HCl缓冲液）：0.05 mol/L，pH 7.5。
A.2.8 色源底物KNR-PG溶液：按照附录C方法制备色源底物KNR-PG，用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液以1:
5质量体积比例均匀悬浮。
A.3 试验步骤
A.3.1 标准曲线的制备
取洁净干燥的微量离心管6只，标号，按表A.1顺序每管中加入对应量的溶葡萄球菌酶标准品溶液
（A.2.1），再加入不同量的0.2 mol/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（A.2.6）。然后按序号加入色源底物KNR-PG
溶液（A.2.8）130μL，每管加入底物后迅速在旋涡混合仪上混匀。将加好溶液的微量离心管迅速移入37 ℃
的恒温水浴锅中定时反应20 min。从水浴中取出微量离心管，每管中加入300 µL95%乙醇终止反应，10000
r/min离心10 min，离心结束后，取上清液于595 nm处，以0号管为空白测定吸光度。根据测得的吸光度
值及相对应的标准品溶葡萄球菌酶酶活性（U/mL），求得线性回归曲线：
C0=（A-B）/K（A.1）
式中：
C0--标准品溶葡萄球菌酶酶活性（U/mL）；
A--吸光度；
B--截距；
K--标准曲线的斜率。
表A.1 标准曲线制备
管号
0 1 2 3 4 5
溶葡萄球菌酶标准品溶液/µL 0 20 40 60 80 100
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液/µL 770 750 730 710 690 670
底物/µL 130 130 130 130 130 130
95%乙醇/µL 300 300 300 300 300 300
溶葡萄球菌酶标准品溶液终浓度/U/mL 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
A.3.2 样品的测定
待测样品的测定方法同标准曲线，取50 µL用于测定。平行测定3次，计算平均值。
A.4 结果计算
根据标准曲线，计算未知溶液中溶葡萄球菌酶酶活性，见下式：
C = C0×V反/V样×N（A.2）
式中：
C--样品溶葡萄球菌酶酶活性（U/mL）；
C0--标准品溶葡萄球菌酶酶活性（U/mL）；
V反--反应体系体积，为0.9 mL；
V样--样品加入体积，为0.05 mL；
N--样品稀释倍数。
附 录 B
（规范性附录）
溶菌酶酶活性测定
B.1 原理
溶菌酶通过溶解革兰阳性菌细胞壁使细菌溶解，菌液在可见光范围内的吸光度降低，以溶壁微球菌
为底物，用分光光度法，以450 nm波长处菌液单位时间内吸光度降低程度测定溶菌酶酶活性。
在室温25 ℃、pH为6.2时，在波长450 nm处，每分钟引起吸收度下降0.001为1个溶菌酶酶活性单位。
B.2 试剂
B.2.1 磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钠10.4 g与磷酸氢二钠7.86 g及乙二胺四乙酸二钠0.37 g，加水溶解
至1000 mL，调节pH至6.2。
B.2.2 溶壁微球菌[Micrococcuslysodeik，CGMCC1.0634]。
B.3 试验步骤
B.3.1 样品溶液制备
量取样品，用磷酸盐缓冲液稀释成约1000 U/mL的溶液，稀释所用倍数记为N。
B.3.2 底物悬浮液的制备
临用前配制。称取溶壁微球菌15 mg～20 mg，加磷酸盐缓冲液0.5 mL～1 mL，在研钵内研磨3 min，
再加磷酸盐缓冲液适量，使总体积约为50 mL，悬浮液于25℃±0.1 ℃在450 nm波长处测得的吸收度为
0.70±0.05。
B.3.3 样品测定
量取25℃±0.1 ℃的底物悬浮液3 mL，置比色池中，在450 nm的波长处测定吸收度，作为0 s的读数
A0，然后量取25℃±0.1 ℃的供试品溶液0.15 mL（相当于溶菌酶7.5 μg），加到比色池中，迅速混匀，用
秒表计时，至60 s时再测定吸收度A；同时量取磷酸盐缓冲液0.15mL，同法操作，做为空白试验，测得
0 s的读数A'0及60 s的读数A'。
平行测定3次，计算平均值。
B.4 结果计算
计算未知溶液中溶菌酶酶活性，见下式：
C＝
0.15
A'-A'-A-A 00 ）（）（
×N×10
3（B.1）
式中：
C--样品溶菌酶酶活性（U/mL）；
A0 --样品0s时的吸收度；
A --样品60s时的吸收度；
A'0--空白0s时的吸收度；
A' --空白60s时的吸收度；
N --稀释倍数。
附 录 C
（规范性附录）
溶葡萄球菌酶色源底物制备
C.1 试剂
C.1.1 三氯乙酸（TCA）
10%TCA：取三氯乙酸10 g，溶解于100mL纯水中。
5%TCA：取三氯乙酸5 g，溶解于100mL纯水中。
C.1.2 0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris-HCl）
取三羟甲基氨基甲烷6.0g，加水800mL溶解，用盐酸调节pH至7.5后，用水稀释至1000mL。
C.1.3 0.25mol/L 氢氧化钠溶液
取氢氧化钠10.0g，加水1000mL溶解。
C.1.4 其他试剂
金黄色葡萄球菌、生理盐水、胰蛋白酶、艳蓝染料（KNR染料）、叠氮钠、纯水。
C.2 制备方法
C.2.1 按照《消毒技术规范（2002年版）》有关规定制备金黄色葡萄球菌悬液。
......
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