| 标准编号 | YY/T 0588-2017 (YY/T0588-2017) | | 中文名称 | 流式细胞仪 | | 英文名称 | Flow Cytometer | | 行业 | 医药行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C44 | | 国际标准分类 | 11.100 | | 字数估计 | 10,150 | | 发布日期 | 2017-12-05 | | 实施日期 | 2018-12-01 | | 发布机构 | 国家食品药品监督管理总局 | YY/T 0588-2017
Flow cytometer
ICS 11.100
C44
中华人民共和国医药行业标准
代替YY/T 0588-2005
流 式 细 胞 仪
2017-12-05发布
2018-12-01实施
国家食品药品监督管理总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准在YY/T 0588-2005《流式细胞仪》的基础上修订而成,与YY/T 0588-2005相比,除编辑
性修改外主要技术变化如下:
---修改了规范性引用文件;
---修改了“倍体”定义;
---修改了“荧光灵敏度”名称及要求,改为“荧光检出限”,增加了其他激光器对应通道荧光素的荧
光检出限要求;
---修改了“前向角散射光灵敏度”名称,改为“前向角散射光检出限”;
---修改了“仪器分辨率”要求,去掉半峰宽要求,并规定FSC、FITC、PE的要求,其他荧光素符合
制造商要求(见4.5仪器分辨率要求);
---修改了“表面标志物检测准确性”要求,增加了CD16/CD56和CD19的要求;
---修改了“表面标记物检测的重复性”要求,将CD3、CD4、CD8 阳性百分比结果的变异系数进行
分段要求,并增加测量CD16/CD56及CD19的要求(见4.9表面标记物检测的重复性要求);
---修改了“携带污染率”要求,改为不大于0.5%;
---删除了“仪器功能”;
---增加了GB 4793.9、YY0648安全要求内容(见4.14安全);
---增加了GB/T 18268.1、GB/T 18268.26电磁兼容要求内容(见4.15电磁兼容);
---修改了“荧光检出限”试验方法(见5.2荧光检出限);
---修改了“荧光线性”试验方法(见5.3荧光线性);
---修改了“前向角散射光检出限”试验方法(见5.4前向角散射光检出限);
---修改了“仪器分辨率”试验方法(见5.5仪器分辨率);
---修改了携带污染率试验方法(见5.10携带污染率)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家食品药品监督管理总局提出。
本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC136)归口。
本标准主要起草单位:北京市医疗器械检验所、贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司、碧迪医疗器械
(上海)有限公司、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、艾森生物(杭州)有限公司。
本标准主要起草人:宋伟、刘秋月、李为公、吴煦、吴坚。
本标准代替了YY/T 0588-2005。
流 式 细 胞 仪
1 范围
标志、标签和使用说明、包装、运输和贮存。
本标准适用于临床使用的对单细胞或其他非生物颗粒膜表面以及内部的生物化学及生物物理特性
成分进行定量分析和分选(只限于有分选功能的流式细胞仪)的流式细胞仪。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志
GB 4793.1 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第1部分:通用要求
GB 4793.9 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第9部分:实验室用分析和其他目的自
动和半自动设备的特殊要求
GB/T 14710 医用电气设备环境要求及试验方法
GB/T 18268.1 测量、控制和实验室用的电设备 电磁兼容性要求 第1部分:通用要求
GB/T 18268.26 测量、控制和实验室用的电设备 电磁兼容性要求 第26部分:特殊要求 体
外诊断(IVD)医疗设备
GB/T 29791.3 体外诊断医疗器械 制造商提供的信息(标示) 第3部分:专业用体外诊断仪器
YY0648 测量、控制和试验室用电气设备的安全要求 第2-101部分:体外诊断(IVD)医用设备
的专用要求
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
分辨率 resolution
流式细胞仪在测量时所能达到的最大精度。
3.2
3.3
散射光 scatter
细胞在液流中与激光交会时,向空间360°立体角的所有方向散射光线,称为散射光。
3.4
前向角散射光 forwardscatter,FSC
在入射光正前方检测到的散射光称为前向角散射光,前向角散射光的强弱与细胞的大小有关。
3.5
侧向角散射光 sidescatter,SSC
也称90°散射光。侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,对胞质内较大的颗粒也
会有反应,可获得有关细胞内部精细结构和颗粒性质的信息。
3.6
前向角散射光检出限 FSCsensitivity
流式细胞仪能够检测到的最小颗粒大小,以前向角散射光最小能检测到的颗粒直径表示。
3.7
倍体 polity
生物体细胞(包括动物细胞、植物细胞、微生物)的遗传物质含量。
3.8
携带污染率 carry-over
分析物被仪器由一个检测样品到下一个样品的携带量,从而错误地引起第二个被测样品分析物浓
度的增加。
3.9
标准微球 standardparticle
大小一致和(或)标有强度一致、恒定不变荧光素的微球,用于流式细胞仪的校准。
4 技术要求
4.1 正常工作条件
流式细胞仪的正常工作条件应符合如下要求:
a) 环境温度:按照流式细胞仪说明书的规定;
b) 相对湿度:按照流式细胞仪说明书的规定;
c) 电源电压:交流220V±22V,50Hz±1Hz;
d) 大气压力:按照流式细胞仪说明书的规定;
e) 防止阳光直射,避免热源。
4.2 荧光检出限
流式细胞仪的荧光检出限应符合下列要求:
a) 流式细胞仪对异硫氰酸荧光素(FITC)的荧光检出限应不大于200MESF;
b) 流式细胞仪对藻红蛋白(PE)的荧光检出限应不大于100MESF;
c) 流式细胞仪对其他激光器(例如红激光、紫激光、紫外激光、绿激光)所对应通道荧光素(每种激
光器至少选择一种荧光素)的荧光检出限应符合制造商声称的要求。
4.3 荧光线性
流式细胞仪荧光强度线性相关系数(r)应不低于0.98。
4.4 前向角散射光检出限
流式细胞仪前向角散射光检出限应不大于1μm。
4.5 仪器分辨率
流式细胞仪前向角散射光和荧光信号的荧光通道全峰宽应满足表1要求。
表1 仪器分辨率要求
荧光素 要求(CV)
FSC ≤3.0%
FITC ≤3.0%
PE ≤3.0%
其他荧光素 符合制造商要求
4.6 前向角散射光和侧向角散射光分辨率
4.6.1 应可以将外周血中红细胞和血小板分开。
4.6.2 应可以将外周血白细胞三群(淋巴细胞、单核细胞、粒细胞)分开。
4.7 倍体分析线性
流式细胞仪进行二倍体细胞周期分析时,G2/M与G0/G1 的平均荧光强度比值应在1.95~2.05范
围内。
4.8 表面标志物检测准确性
流式细胞仪检测质控血时,淋巴细胞表面表达的CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和CD19阳性百分比结
果应在给定范围内。
4.9 表面标志物检测的重复性
重复检测样品CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和CD19阳性百分比结果的变异系数(CV)应符合:
a) 阳性百分比大于等于30%时,CV 值应不大于8%;或
b) 阳性百分比小于30%时,CV 值应不大于15%。
4.10 携带污染率
流式细胞仪的携带污染率应不大于0.5%。
4.11 仪器稳定性
环境温度变化不超过设定温度的5%时,在8h内检测前向角散射光(FSC)及所有荧光通道峰值荧
光道数的波动范围应不超过±10%。
4.12 外观
外观应符合下列要求:
a) 仪器外观应整洁,无划痕,文字和标识清晰;
b) 紧固件连接应牢固可靠,不得有松动。
4.13 环境试验
应符合GB/T 14710中气候环境Ⅰ组,机械环境Ⅰ组的要求。
4.14 安全
应符合GB 4793.1、GB 4793.9、YY0648中适用条款的要求。
4.15 电磁兼容
应符合GB/T 18268.1、GB/T 18268.26中适用条款的规定。
5 试验方法
5.1 试验条件
按照4.1的试验条件进行,使用与流式细胞仪适配的试剂、质控品及标准微球,并在试验之前按照
制造商的使用说明对流式细胞仪进行正确的操作和校准。
5.2 荧光检出限
将标准微球充分混匀后上机进行试验,收集不少于10000个标准微球,对试验结果进行直方图分
析,得到各个峰的平均荧光强度;根据标准微球说明书提供的各个峰的等量 MESF数,以及分析得到的
各个峰的平均荧光强度,取常用对数(Lg值)做线性回归,空白微球处的平均荧光强度值对应的 MESF
数的反对数即为荧光检出限。
5.3 荧光线性
将标准微球充分混匀后上机进行试验,收集不少于10000个微球,流式细胞仪运用直方图对试验
结果分析,得到各个峰的平均荧光强度;根据标准微球说明书提供的各个峰的等量 MESF数,以及分析
得到的各个峰的平均荧光强度,以 MESF数(y)和平均荧光强度(x)的线性回归,计算相关系数(r)。
5.4 前向角散射光检出限
将标准微球充分混匀后上机进行检测,检査直方图上显示的峰值信号,及显示峰值信号的标准微球
直径。
5.5 仪器分辨率
将标准微球充分混匀后上机进行试验,计算出各荧光通道标准微球全峰宽的CV 值,结果应符合
4.5的要求。
5.6 前向角散射光和侧向角散射光分辨率
5.6.1 在装有1mL鞘液的试管中加入5μL枸橼酸钠抗凝全血,混匀后,上机检测,检査前向角散射光
和侧向角散射光点图是否可以将血小板和红细胞分开。
5.6.2 取100μLEDTA抗凝全血,溶解红细胞后上机检测,检查前向角散射光和侧向角散射光点图是
否可以将白细胞三群(淋巴细胞、单核细胞、粒细胞)分开。
5.7 倍体分析线性
使用经过荧光染色的标准细胞株或标准细胞核,上机检测G0/G1 期及G2/M 期的平均荧光强度,
计算2个平均荧光强度的比值。
5.8 表面标志物检测准确性
使用已标记好CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和CD19的质控细胞上机测试,重复测定5次,依次记录每
次检测的CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和CD19阳性值的百分比,并分别计算平均值。
5.9 表面标记物检测的重复性
按照5.8的方法进行试验,重复测试10次,按照式(1)分别计算CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和CD19
阳性百分比结果的变异系数(CV)。
CV=
SD
x
×100% (1)
式中:
CV ---变异系数;
SD ---标准差;
x ---测量值的平均值。
5.10 携带污染率
使用浓度为(5000~10000)个/μL的标准微球上机进行测试,至少收集100000个标准微球,连续
测试3次,计算标定区域的颗粒数,分别记为Hi-1、Hi-2、Hi-3;再进行空白数量测试(收集30s),连续
测试3次,计算标定区域的颗粒数,分别记为Li-1、Li-2、Li-3;按照此程序循环3次,再按式(2)计算携
带污染率(Ci),取最大值。所得结果满足4.10的要求。
Ci=
Li-1-Li-3
Hi-3-Li-3
×100% (2)
式中:
Ci---第i次循环的携带污染率值;
i=1~3。
5.11 仪器稳定性
将标准微球充分混匀后上机进行试验,测试完成后,利用直方图分析试验结果,计算标准微球的平
均荧光强度值(FL1);连续开机8h后,在相同流式细胞仪设置和荧光道数的条件下重复前述试验步
骤,得到标准微球的平均荧光强度值(FL2);按式(3)计算FL1、FL2 的偏差值(B)。
B=
FLi1-FLi2
FLi1 ×
100% (3)
式中:
FL1---0h标准微球平均荧光强度值;
FL2---8h后标准微球平均荧光强度值。
5.12 外观
在自然光下以正常视力或矫正视力目视检查,应符合4.12的......
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