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| 标准编号 | GB 31656.1-2021 (GB31656.1-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of mebendazole and its metabolites residue in fishery products by high performance liquid chromatography | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X20 | | 字数估计 | 7,746 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31656.1-2021: 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及代谢物残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
水产品中甲苯咪唑及代谢物残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
１ 范围
本文件规定了水产品中甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑残留检测的制样和液相色
谱测定方法.
本文件适用于鱼、虾和蟹可食组织中甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑残留量的
检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规则和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的甲苯咪唑及其代谢物,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,阳离子固相萃取柱净化,高效液相
色谱Ｇ紫外检测器测定,外标法定量.
５ 试剂和材料
以下所用试剂,除另有注明外均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
5.1.1 乙腈(CH₃CN):色谱纯。
5.1.2甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.3正己烷(C₆H14):色谱纯。
5.1.4乙酸乙酯(CH₃COOCH₂CH₃):色谱纯。
5.1.5 N,N-二甲基甲酰胺(C₃H₇NO):色谱纯。
5.1.6磷酸(H₃PO)。
5.1.7磷酸二氢铵(NH₄H₃PO,)。
5.1.8三乙胺[(C₂H₅)₃N]。
5.1.9 甲酸(HCOOH)。
5.1.10氨水(NH₃·H₂O)。
5.2标准品
甲苯咪唑(mebendazole,C16H13N₃O₃,CAS号：31431-39-7)、羟基甲苯咪唑(5-hydroxymebendazole,
５.３.２ １％甲酸溶液:取甲酸１mL,加水至１００mL,混匀.
５.３.３ ０.０５mol/L磷酸二氢铵Ｇ三乙胺溶液:取磷酸二氢铵５.８g,加水溶解并稀释至１０００mL,加三乙胺１mL,混匀.
５.３.４ ０.０５mol/L磷酸二氢铵缓冲液:取磷酸二氢铵２.９g,加水４５０mL使溶解,用磷酸调pH至２.０,用水稀释至５００mL.
５.３.５ ５％氨化甲醇溶液:取氨水５mL、甲醇９５mL,混匀;临用前配制.
５.３.６ 溶解液:取N,NＧ二甲基甲酰胺１５０mL,用０.０５mol/L磷酸二氢铵缓冲液稀释至５００mL.
５.４ 标准溶液制备
５.４.１ 标准储备液(１００μg/mL):分别取甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑各１０mg,精密称定,
加甲酸５mL使其溶解,并用甲醇稀释定容至１００mL容量瓶,摇匀,配制成浓度各为１００μg/mL的标准储备液.
-１８℃以下避光保存,有效期６个月.
５.４.２ 混合标准中间液:分别准确量取甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑标准储备液适量,用甲醇稀
释配制成含氨基甲苯咪唑５μg/mL、羟基甲苯咪唑２.５μg/mL和甲苯咪唑２.５μg/mL的混合标准中间液.
-１８℃以下避光保存,有效期３个月.
５.５ 材料
５.５.１ 混合型阳离子固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.
５.５.２ 水相聚砜醚针式滤器:０.４５μm.
６ 仪器和设备
６.１ 高效液相色谱仪,配紫外检测器.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 离心机:６０００r/min.
６.４ 旋转蒸发仪.
６.５ 固相萃取装置.
６.６ 超声波清洗仪.
６.７ 氮吹仪.
６.８ 鸡心瓶:１００mL.
７ 试样的制备与保存
７.１ 试样的制备
按GB/T ３０８９１-２０１４中附录B的要求制样.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的混合标准溶液,作为空白添加试样.
７.２ 试样的保存
-１８℃以下保存,有效期３个月.
８ 测定步骤
８.１ 提取
取试样３g(准确至±０.０３g)于５０mL离心管中,加水２mL,涡旋３０s,使其分散;加乙酸乙酯
１０mL,振荡２min,超声５min,４５００r/min离心１０min,乙酸乙酯转入１００mL鸡心瓶.残渣加乙酸乙
酯１０mL,按上述方法重复提取２次.合并乙酸乙酯至１００mL鸡心瓶中,４０℃旋转蒸发至干.加８０％
甲醇溶液３mL,涡旋混合１min,加正己烷３mL,混合１min,将溶液转入１０mL离心管中,６０００r/min
离心５min,去除正己烷层;下层再加正己烷３mL,重复去脂一次.向下层溶液中加１％甲酸水溶液
３mL,混匀,６０００r/min离心５min,上清液备用.
８.２ 净化
固相萃取柱依次用甲醇、水各３mL活化,将上清液过柱;依次用水、甲醇各４mL淋洗,弃去流出液,
抽干.用５％氨化甲醇溶液５mL洗脱,洗脱液接收至１０mL离心管中,４０℃氮气吹干.加溶解液
１.０mL溶解残余物,涡旋混合１min,用水相针式滤器过滤至进样小瓶中,供高效液相色谱测定.
８.３ 标准工作曲线的制备
精密量取混合标准中间液适量,用溶解液稀释配制成甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑浓度分别为０.０２μg/mL、０.０５μg/mL、０.１μg/mL、０.２５μg/mL、０.５μg/mL和１.０μg/mL,氨基甲苯咪唑浓度为０.０４μg/mL、０.１μg/mL、０.２μg/mL、０.５μg/mL、１.０μg/mL和２μg/mL的系列标准工作液,供高效液相色谱测定.分
别以甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的峰面积为纵坐标,相应浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.此标准工作液现用现配.
８.４ 测定
８.４.１ 液相色谱条件
a) 色谱柱:C１８柱(２５０mm×４.６mm,５μm),或相当者;
b) 流动相:A为乙腈,B为０.０５mol/L磷酸二氢铵Ｇ三乙胺溶液,梯度洗脱条件见表１;
d) 柱温:４０℃;
e) 进样量:３０μL;
f) 检测波长:２８９nm.
８.４.２ 测定法
取系列标准工作液和试样溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.标准溶液和试样液
中甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的响应值均应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱条件
下,标准溶液液相色谱图见附录A.
８.５ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的残留量按公式(１)计算.
１０ 方法灵敏度、准确度和精密度
１０.１ 灵敏度
本方法甲苯咪唑和羟基甲苯咪......
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