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| 标准编号 | GB 31658.20-2022 (GB31658.20-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National food safety standards-Determination of residues of amidoalcohol drugs and their metabolites in animal foods-liquid chromatography-tandem mass spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 11,117 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.20-2022: 食品安全国家标准 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB 31658.20-2022 英文名称: (National food safety standards-Determination of residues of amidoalcohol drugs and their metabolites in animal foods-liquid chromatography-tandem mass spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物
残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定
方法.
本文件适用于猪、鸡、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织,以及鸡蛋、牛奶、羊奶中氯霉素、甲砜霉素、
氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺用２％氨化乙酸乙酯溶液提取,正己烷脱脂,
氨化乙酸乙酯反萃取,液相色谱Ｇ串联质谱法测定,内标法定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１２ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１３ 氨水(NH３H２O).
５１４ 乙酸乙酯(C４H８O２).
５１５ 无水硫酸钠(Na２SO４).
５１６ 氯化钠(NaCl).
５１７ 甲酸铵(HCOONH４).
５１８ 正己烷(C６H１４).
５２ 溶液配制
５２１ ２％氨化乙酸乙酯溶液:取氨水２０mL,用乙酸乙酯稀释至１０００mL.
５２２ ４％氯化钠溶液:取氯化钠４g,用水溶解并稀释至１００mL.
５２３ ４％氯化钠饱和的正己烷:取４％氯化钠溶液适量,加入过量的正己烷,混合,静置分层,取上层正
己烷.
５２４ ２０％甲醇溶液:取甲醇２０mL,用水稀释至１００mL.
５２５ １０mmol/L甲酸铵溶液:取甲酸铵０６３g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５３ 标准品
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺,含量均≥９９％,氯霉素ＧD５、甲砜霉素ＧD３、氟苯尼考ＧD３、氟
苯尼考胺ＧD３内标,含量均≥９８％,具体见附录A.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液:取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺标准品各适量(相当于各活性成分约
１０mg),精密称定,分别加甲醇适量使溶解并稀释定容至１００mL容量瓶中,配制成浓度为１００μg/mL的
标准储备液.-１８℃以下保存,有效期１２个月.
５４２ 内标储备液:取氯霉素ＧD５、甲砜霉素ＧD３、氟苯尼考ＧD３、氟苯尼考胺ＧD３内标各适量(相当于各活
性成分约１mg),精密称定,分别加甲醇适量使溶解并稀释定容至１０mL容量瓶中,配制成浓度为
１００μg/mL的内标储备液.-１８℃以下保存,有效期１２个月.
５４３ 混合标准中间液:分别精密量取氯霉素标准储备液０１mL,甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺标准
储备液各０５mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成氯霉素浓度为１μg/mL,甲砜霉素、氟
苯尼考、氟苯尼考胺浓度为５μg/mL混合标准中间液.-１８℃以下保存,有效期３个月.
５４４ 混合内标中间液:分别精密量取氯霉素ＧD５内标储备液０１mL,甲砜霉素ＧD３、氟苯尼考ＧD３、氟
苯尼考胺ＧD３内标储备液各０５mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成氯霉素ＧD５浓度为
１μg/mL,甲砜霉素ＧD３、氟苯尼考ＧD３、氟苯尼考胺ＧD３浓度为５μg/mL混合内标中间液.-１８℃以下保
存,有效期３个月.
５４５ 混合内标工作液:取混合内标中间液,用２０％甲醇溶液稀释成氯霉素ＧD５浓度为１０ng/mL,甲砜
霉素ＧD３、氟苯尼考ＧD３、氟苯尼考胺ＧD３浓度为５０ng/mL混合内标工作液,现配现用.
５５ 材料
尼龙微孔滤膜:０２２μm.
６ 仪器和设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI).
６２ 天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 均质机.
６４ 涡旋混合器.
６５ 多管涡旋振荡器.
６６ 高速冷冻离心机:转速可达８０００r/min.
６７ 氮吹仪.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
７１１ 肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７１２ 奶
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛奶或羊奶,混合均匀.
a) 取混合均匀后的供试样品,作为供试试样;
b) 取混合均匀后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７１３ 鸡蛋
取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋,去壳,并均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７２ 试样的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确至±００５g),置于５０mL离心管中,加混合内标工作液１００μL,涡旋混匀,再加
２％氨化乙酸乙酯溶液１０mL(牛奶、羊奶样品需另加无水硫酸钠３g),涡旋３０s,涡旋振荡１０min,
８０００r/min离心５min.上清液转入另一５０mL离心管中,残渣中加２％氨化乙酸乙酯溶液１０mL,重复
提取一次.合并两次提取液,于５０℃氮气吹干,待净化.
８２ 净化
取待净化残渣,加４％氯化钠溶液３mL,涡旋使溶解,再加４％氯化钠饱和的正己烷５mL,涡旋３０s,
８０００r/min离心５min,弃去上层正己烷层,用４％氯化钠饱和的正己烷重复脱脂一次.加２％氨化乙酸
乙酯溶液５mL,涡旋振荡５min,８０００r/min离心５min,取上层有机相.用２％氨化乙酸乙酯溶液５mL
重复萃取一次,合并有机相,５０℃氮气吹干,加２０％甲醇溶液１０mL,涡旋３０s,过０２２μm滤膜,供液相
色谱Ｇ串联质谱仪测定.
８３ 标准曲线的制备
精密量取混合标准中间液和混合内标工作液适量,用２０％甲醇溶液稀释,配制成氯霉素浓度分别为
０２μg/L、０５μg/L、１μg/L、２μg/L、５μg/L、１０μg/L,甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度分别为
１μg/L、２５μg/L、５μg/L、１０μg/L、２５μg/L、５０μg/L,氯霉素ＧD５浓度均为１μg/L,甲砜霉素ＧD３、氟苯尼
考ＧD３、氟苯尼考胺ＧD３浓度均为５μg/L的系列标准溶液,临用现配,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.以定
量离子峰面积比为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２１mm,１７μm),或相当者;
b) 柱温:３０℃;
c) 进样量:５μL;
d) 流速:０３mL/min;
e) 流动相:A为１０mmol/L甲酸铵溶液;B为乙腈;梯度洗脱程序见表１.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描/负离子扫描;
c) 检测方式:多反应离子监测(MRM);
d) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体;
e) 喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度;
f) 待测物离子源、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量参考值见表２.
８４３ 测定法
８４３１ 定性测定
在同样测试条件下,试料溶液中酰胺醇类药物及其代谢物的保留时间与标准工作液中酰胺醇类药物
及其代谢物的保留时间相对偏差在±２５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的校正标准
溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应符合表３要求.
８４３２ 定量测定
取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以色谱峰面积比定量.标准溶液及试样
溶液中酰胺醇类药物及其代谢物与其相应内标峰面积比均应在仪器检测的线性范围内.对于残留量超出
仪器线性范围的,在提取时根据药物浓度相应增加内标工作液的添加量,使试样溶液稀释后酰胺醇类药物
及其代谢物的浓度在曲线范围之内,对应内标浓......
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