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| 标准编号 | GB 31658.21-2022 (GB31658.21-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中左旋咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Levamisole Residues in Animal Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 9,981 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.21-2022: 食品安全国家标准 动物性食品中左旋咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB 31658.21-2022 英文名称: (National Food Safety Standard Determination of Levamisole Residues in Animal Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
动物性食品中左旋咪唑残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中左旋咪唑残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中左旋咪唑残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于猪、禽、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中左旋咪唑残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的左旋咪唑,在碱性条件下用乙酸乙酯提取,０１mol/L盐酸溶液萃取,混合型阳离子交
换固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,外标法定量.
５ 试剂或材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１３ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５１４ 乙酸乙酯(C４H８O２).
５１５ 无水硫酸钠(Na２SO４).
５１６ 碳酸氢钠(NaHCO３).
５１７ 碳酸钠(Na２CO３).
５１８ 盐酸(HCl).
５１９ 氨水(NH３H２O).
５２ 溶液配制
５２１ 碳酸氢钠饱和溶液:取水１００mL,加无水碳酸氢钠至不溶解为止,取上清液,现用现配.
５２２ 碳酸钠饱和溶液:取水１００mL,加碳酸钠至不溶解为止,取上清液,现用现配.
５２３ 碳酸盐缓冲液:取碳酸氢钠饱和溶液９０mL、碳酸钠饱和溶液１０mL,混匀.
５２４ ０１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,加水稀释至１０００mL,混匀.
５２５ ４％氨水甲醇溶液:取氨水４mL,用甲醇稀释至１００mL,混匀,现用现配.
５２６ ０１％甲酸溶液:取甲酸５００μL,用水稀释至５００mL,混匀.
５２７ １０％乙腈甲酸溶液:取乙腈１０mL,用０１％甲酸水溶液稀释至１００mL,混匀.
５３ 标准品
盐酸左旋咪唑(Levamisolehydrochloride,C１１H１２N２SHCl,CAS号:１６５９５Ｇ８０Ｇ５),含量≥９９％.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液:取盐酸左旋咪唑标准品适量(相当于左旋咪唑约１０mg),精密称定,加甲醇适量使溶
解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的左旋咪唑标准储备液.-１８℃保存,有效期
６个月.
５４２ 标准工作液:精密量取标准储备液１mL,于１００mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为
１０μg/mL的左旋咪唑标准工作液.４℃保存,有效期３个月.
５５ 材料
５５１ 混合型阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.
５５２ 陶瓷均质子.
５５３ 微孔尼龙滤膜:０２２μm.
６ 仪器设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾电离源.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 涡旋混合器.
６４ 涡旋振荡器.
６５ 高速冷冻离心机:转速≥１００００r/min.
６６ 固相萃取装置.
６７ 氮吹仪.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.
７２ 试样保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确至±００５g),于５０mL聚丙烯离心管中(脂肪样品需在６０℃水浴下加热２０min),
加入一粒陶瓷均质子,加碳酸盐缓冲液０５mL,无水硫酸钠２g,乙酸乙酯１０mL,涡旋１min,振荡５min,
６０００r/min离心５min,取上层乙酸乙酯至另一离心管,残渣用乙酸乙酯１０mL重复提取一次,合并两次
提取液,加０１mol/L盐酸溶液５mL,振荡５min,６０００r/min离心５min,取下层水相至另一离心管中,
有机相中再加０１mol/L盐酸溶液５mL重复萃取一次,合并两次萃取液,备用.
８２ 净化
取混合型阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇３mL、０１mol/L盐酸溶液３mL活化.取备用液过
柱,流速控制在１mL/min~２mL/min,依次用水３mL、甲醇３mL淋洗,抽干,４％氨水甲醇溶液３mL洗
脱,抽干,收集洗脱液,４０℃下氮气吹干.用１０％乙腈甲酸溶液１０mL溶解残余物,超声１min,过
GB ３１６５８２１-２０２２
０２２μm微孔尼龙滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.
８３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取标准工作液适量,用甲醇稀释,配制成浓度分别为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、
１００ng/mL、２００ng/mL和５００ng/mL的系列标准溶液,各取１００μL,分别加于经提取、净化步骤处理的
空白试料洗脱液中,于４０℃下氮气吹干,用１０％乙腈甲酸水溶液１０mL溶解残余物,超声１min,混匀.
配制成浓度分别为１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL和５０ng/mL的基质匹配标准溶
液,过微孔尼龙滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.以左旋咪唑定量离子质量色谱峰面积为纵坐标,基质
匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线.求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(５０mm×２１mm,１７μm),或相当者;
b) 柱温:３５℃;
c) 进样量:２μL;
d) 流速:０３０mL/min;
e) 流动相:A为０１％甲酸溶液;B为甲醇;梯度洗脱程序见表１.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描;
c) 检测方式:多反应监测;
d) 离子源温度:１５０℃;
e) 脱溶剂温度:５００℃;
f) 毛细管电压:０８kV;
g) 定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表２.
８４３ 测定法
８４３１ 定性测定
在同样测试条件下,试料溶液中左旋咪唑的保留时间与基质匹配标准工作液中的保留时间相对偏差
在±２５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致.其
允许偏差应符合表３要求.
８４３２ 定量测定
取试料溶液和相应的基质匹配标准工作液,作单点或多点校准,按外标法以峰面积定量,基质匹配标
准工作液及试料溶液中的左旋咪唑响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱Ｇ质谱条件下,左旋
咪唑基质匹配标准溶液的特征离子质量色谱图见附录A.
８５ 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行测定.
９ 结果计算和表述
试样中待测物残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 检测方法灵敏度、准确度和精密度
１０１ 灵敏度
本方法的检测限为０５μg/kg,定量限为１０μg/kg.
１０２ 准确度
本方法左旋咪唑在肌肉、肾脏和脂肪组织１０μg/kg~１０μg/......
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