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| 标准编号 | GB 7300.1301-2025 (GB7300.1301-2025) | | 中文名称 | 饲料添加剂 第13部分：其他 胆汁酸 | | 英文名称 | Feed additives - Part 13: Others - Bile acid | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | B46 | | 国际标准分类 | 65.120 | | 字数估计 | 17,164 | | 发布日期 | 2025-06-30 | | 实施日期 | 2026-07-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB 7300.1301-2025: 饲料添加剂 第13部分：其他 胆汁酸
ICS 65.120
CCSB46
中华人民共和国国家标准
饲料添加剂 第13部分:其他
胆汁酸
2025-06-30发布
2026-07-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件为GB 7300《饲料添加剂》的第1301部分。GB 7300已经发布了以下部分:
---第1部分:氨基酸、氨基酸盐及其类似物 L-苏氨酸(GB 7300.101);
---第1部分:氨基酸、氨基酸盐及其类似物 甘氨酸(GB 7300.102);
---第1部分:氨基酸、氨基酸盐及其类似物 蛋氨酸羟基类似物(GB 7300.103);
---第1部分:氨基酸、氨基酸盐及其类似物 L-缬氨酸(GB 7300.104);
---第2部分:维生素及类维生素 L-抗坏血酸-2-磷酸酯盐(GB 7300.201);
---第2部分:维生素及类维生素 维生素D3 油(GB 7300.202);
---第2部分:维生素及类维生素 甜菜碱(GB 7300.203);
---第2部分:维生素及类维生素 甜菜碱盐酸盐(GB 7300.204);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 碘化钾(GB 7300.301);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 亚硒酸钠(GB 7300.302);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 碘酸钾(GB 7300.303);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 甘氨酸铁络合物(GB 7300.304);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 碱式氯化铜(GB 7300.305);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 烟酸铬(GB 7300.306);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 甘氨酸锌(GB 7300.307);
---第3部分:矿物元素及其络(螯)合物 苏氨酸锌螯合物(GB 7300.308);
---第4部分:酶制剂 木聚糖酶(GB 7300.401);
---第4部分:酶制剂 植酸酶(GB 7300.402);
---第4部分:酶制剂 纤维素酶(GB 7300.403);
---第4部分:酶制剂 β-甘露聚糖酶(GB 7300.404);
---第4部分:酶制剂 α-半乳糖苷酶(GB 7300.405);
---第5部分:微生物 酿酒酵母(GB 7300.501);
---第5部分:微生物 植物乳杆菌(GB 7300.502);
---第5部分:微生物 屎肠球菌(GB 7300.503);
---第5部分:微生物 嗜酸乳杆菌(GB 7300.504);
---第5部分:微生物 凝结芽孢杆菌(GB 7300.505);
---第6部分:非蛋白氮 尿素(GB 7300.601);
---第8部分:防腐剂、防霉剂和酸度调节剂 碳酸氢钠(GB 7300.801);
---第8部分:防腐剂、防霉剂和酸度调节剂 丙酸(GB 7300.802);
---第8部分:防腐剂、防霉剂和酸度调节剂 氯化铵(GB 7300.803);
---第8部分:防腐剂、防霉剂和酸度调节剂 苯甲酸(GB 7300.804);
---第9部分:着色剂 β-胡萝卜素粉(GB 7300.901);
---第9部分:着色剂 β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(斑蝥黄)(GB 7300.902);
---第10部分:调味和诱食物质 谷氨酸钠(GB 7300.1001);
---第10部分:调味和诱食物质 大蒜素(GB 7300.1002);
---第10部分:调味和诱食物质 新甲基橙皮苷二氢查耳酮(GB 7300.1003);
---第13部分:其他 胆汁酸(GB 7300.1301)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口。
引 言
饲料添加剂是指在饲料加工、制作、使用过程中添加的少量或者微量物质,包括营养性饲料添加剂
和一般饲料添加剂,为了便于使用,按照产品类别,GB 7300《饲料添加剂》分为以下13个大类:
---氨基酸、氨基酸盐及其类似物;
---维生素及类维生素;
---矿物元素及其络(螯)合物;
---酶制剂;
---微生物;
---非蛋白氮;
---抗氧化剂;
---防腐剂、防霉剂和酸度调节剂;
---着色剂;
---调味和诱食物质;
---粘结剂、抗结块剂、稳定剂和乳化剂;
---多糖和寡糖;
---其他。
本文件的产品胆汁酸属于第13大类其他,因胆汁酸是此大类第1个发布的产品标准,所以本文件
以GB 7300.1301编号,作为GB 7300的1301部分。
饲料添加剂 第13部分:其他
胆汁酸
1 范围
本文件给出了胆汁酸主要成分猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学名称、分子式、相对分子质
量和化学结构式,规定了饲料添加剂胆汁酸产品的技术要求、检验规则及标签、包装、运输、贮存和保质
期,描述了取样和试验方法。
本文件适用于以提取胆红素后的猪胆膏为原料,经皂化、脱色、酸化、纯化、干燥等加工工艺获得的
饲料添加剂胆汁酸产品。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法
GB/T 6435 饲料中水分的测定
GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定
GB/T 6439 饲料中水溶性氯化物的测定
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB 10648 饲料标签
GB/T 13079 饲料中总砷的测定
GB/T 13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法
GB/T 13082 饲料中镉的测定
GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的测定
GB/T 14699 饲料 采样
GB/T 42959 饲料微生物检验 采样
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 化学名称、分子式、相对分子质量和化学结构式
4.1 化学名称
猪胆酸:3α,6α,7α-三羟基-5β-胆烷酸;猪去氧胆酸:3α,6α-二羟基-5β-胆烷酸;鹅去氧胆酸:3α,7α-
二羟基-5β-胆烷酸。
4.2 分子式
猪胆酸:C24H40O5;猪去氧胆酸:C24H40O4;鹅去氧胆酸:C24H40O4。
4.3 相对分子质量
猪胆酸:408.57(按2022年国际相对原子质量);猪去氧胆酸:392.58(按2022年国际相对原子质
量);鹅去氧胆酸:392.58(按2022年国际相对原子质量)。
4.4 化学结构式
猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学结构式分别见图1a)、图1b)和图1c)。
a) 猪胆酸 b) 猪去氧胆酸 c) 鹅去氧胆酸
图1 猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学结构式
5 技术要求
5.1 外观与性状
本品应为白色或类白色粉末,有轻微腥味。
5.2 鉴别
在硫酸甲醛溶液中呈现蓝绿色。
5.3 理化指标
应符合表1的要求。
表1 理化指标
项 目 指 标
胆汁酸总量(以猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量之和计)/% ≥95.0
猪去氧胆酸+猪胆酸/% ≥78.0
鹅去氧胆酸/% ≥17.0
水溶性氯化物(以Cl-计)/% ≤0.5
粗灰分/% ≤0.1
水分/% ≤1.0
粒度(180μm试验筛通过率)/% ≥95
5.4 卫生指标
应符合表2的要求。
表2 卫生指标
项 目 指 标
总砷(以As计)/(mg/kg) ≤0.1
铅/(mg/kg) ≤1.0
镉/(mg/kg) ≤2.0
沙门氏菌/(25g样品中) 不应检出
6 取样
按GB/T 14699和GB/T 42959执行。
7 试验方法
7.1 一般规定
除非另有规定,仅使用分析纯试剂;色谱分析中用水为GB/T 6682中规定的一级水,其他分析用水
为GB/T 6682规定的三级水。
7.2 外观与性状
取适量试样放置于适宜的器皿中,在正常光照、通风良好、无异味环境下,观察其色泽和形态,并嗅
其气味。
7.3 鉴别试验
7.3.1 试剂或材料
7.3.1.1 硫酸。
7.3.1.2 甲醛。
7.3.2 仪器设备
分析天平:精度为0.1mg。
7.3.3 鉴别方法
称取试样10mg于洁净试管中,加1mL硫酸与1滴甲醛使其溶解,放置5min后,再加5mL水,
生成蓝绿色悬浮物。
7.4 胆汁酸总量、猪胆酸+猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸
7.4.1 高效液相色谱-荧光法(仲裁法)
7.4.1.1 原理
试样用甲醇溶解,在18-冠醚-6催化下,用4-溴甲基-7-甲氧基香豆素将猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去
氧胆酸衍生为具有荧光发色基团化合物,经高效液相色谱反相柱法分离后,荧光检测器测定,外标法
定量。
7.4.1.2 试剂或材料
7.4.1.2.1 甲醇:色谱纯。
7.4.1.2.2 乙腈:色谱纯。
7.4.1.2.3 氢氧化钾甲醇溶液(1.8mmol/L):称取0.101g氢氧化钾,置于100mL容量瓶中,用甲醇
(7.4.1.2.1)溶解并定容至刻度,混匀。准确移取该溶液10mL,置于100mL容量瓶中,用甲醇(7.4.1.2.1)稀
释并定容,混匀。
7.4.1.2.4 4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BMC)乙腈溶液(10mmol/L):称取0.1345gBMC置于50mL
容量瓶中,用乙腈(7.4.1.2.2)溶解并定容,混匀。
7.4.1.2.5 18-冠醚-6(DCC)乙腈溶液(5mmol/L):称取0.0661gDCC置于50mL容量瓶中,用乙腈
(7.4.1.2.2)溶解并定容,混匀。
7.4.1.2.6 0.05%三氟乙酸溶液:移取0.5mL三氟乙酸,置于1000mL容量瓶中,用水稀释并定容,混
匀,0.45μm微孔滤膜(7.4.1.2.9)过滤。
7.4.1.2.7 混合标准贮备溶液(1mg/mL):分别准确称取猪胆酸标准品(CAS号:547-75-1,纯度≥
99%)、猪去氧胆酸标准品(CAS号:83-49-8,纯度≥97.3%)、鹅去氧胆酸标准品(CAS号:74-25-9,纯度
≥99%)各10mg(精确至0.01mg),于10mL容量瓶中,用甲醇(7.4.1.2.1)溶解并定容,混匀。4℃以
下保存,有效期为2周。
7.4.1.2.8 混合标准系列溶液:精确移取混合标准储备溶液(7.4.1.2.7)适量于50mL容量瓶中,用甲醇
(7.4.1.2.1)稀释并定容,混匀,配制成质量浓度分别为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、
100μg/mL、200μg/mL的混合标准工作溶液。临用现配。
7.4.1.2.9 微孔滤膜:0.45μm,有机系。
7.4.1.3 仪器设备
7.4.1.3.1 高效液相色谱仪:配荧光检测器。
7.4.1.3.2 分析天平,精度为0.1mg和0.01mg。
7.4.1.3.3 氮吹仪。
7.4.1.3.4 涡旋仪。
7.4.1.3.5 水浴锅:温控精度±2℃。
7.4.1.3.6 超声波振荡器。
7.4.1.4 试验步骤
7.4.1.4.1 试样溶液的制备
平行做两份试验。称取试样200mg(准确至0.1mg)于100mL容量瓶中,用甲醇(7.4.1.2.1)超声
溶解并定容(V1),混匀。准确移取5mL(V2),于100mL容量瓶中,用甲醇(7.4.1.2.1)稀释并定容
(V3),混匀,为试样溶液。
7.4.1.4.2 衍生
准确移取混合标准系列溶液(7.4.1.2.8)和试样溶液(7.4.1.4.1)各0.5mL,分别置于10mL具塞试
管中,各加入2.50mL氢氧化钾甲醇溶液(7.4.1.2.3),旋涡混匀,于55℃氮气吹干。分别向试管中加入
BMC乙腈溶液(7.4.1.2.4)和DCC乙腈溶液(7.4.1.2.5)各0.50mL,将试管盖严,于65℃水浴衍生2h。
取出试管,冷却至室温。衍生后的溶液过0.45μm微孔滤膜(7.4.1.2.9),待测。
7.4.1.4.3 高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或者性能相当者;
b) 流动相:A相:0.05%三氟乙酸溶液(7.4.1.2.6),B相:乙腈(7.4.1.2.2);
c) 流速:1.0mL/min;
d) 检测波长:荧光激发波长330nm,发射波长410nm;
e) 柱温:室温;
f) 进样量:10μL;
g) 梯度洗脱程序,见表3。
表3 梯度洗脱程序
时间/min A相/% B相/%
0 40 60
2 40 60
14 20 80
18 20 80
20 40 60
26 40 60
7.4.1.4.4 测定
在仪器最佳工作条件下,将衍生反应后的混合标准系列溶液和试样溶液注入液相色谱仪,猪胆酸、
猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸标准溶液色谱图见附录A。
7.4.1.4.5 定性
试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸保留时间应与混合标准系列溶液浓度相近的该组分
的保留时间一致,其相对偏差在2.5%之内。
7.4.1.4.6 定量
以混合标准系列溶液中被测组分浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标,绘制各组分的标准曲线,
其线性相关系数不低于0.99。单点校准定量时,试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的浓度与
标准系列工作溶液的浓度相差不超过30%。
7.4.1.5 试验数据处理
试样中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量以质量分数wi 计,数值以%表示,单点校准按式(1)
计算,多点校准按式(2)计算。
wi=
Pi×Ci×V1×V3
Psti×m×V2×1000×
100 (1)
式中:
Pi ---试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积;
Ci ---混合标准工作溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度,单位为微克每毫升
(μg/mL);
V1 ---试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);
V2 ---试样溶液分取体积(7.4.1.4.1),单位为毫升(mL);
V3 ---稀释定容体积,单位为毫升(mL);
Psti---混合标准工作溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积;
m ---试样质量,单位为毫克(mg)。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留至小数点后一位。
wi=
Ci×V1×V3
m×V2×1000×
100 (2)
式中:
Ci ---标准曲线上查得的试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度,单位为微克
每毫升(μg/mL);
V1---试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);
V2---试样溶液分取体积(7.4.1.4.1),单位为毫升(mL);
V3---稀释定容体积,单位为毫升(mL);
m ---试样质量,单位为毫克(mg)。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留至小数点后一位。
试样中胆汁酸总量以质量分数w 计,数值以%表示,按式(3)计算。
w=w1+w2+w3 (3)
式中:
w1---试样中猪胆酸含量,%;
w2---试样中猪去氧胆酸含量,%;
w3---试样中鹅去氧胆酸含量,%。
试样中猪胆酸和猪去氧胆酸总量以质量分数w'计,数值以%表示,按式(4)计算。
w'=w1+w2 (4)
式中:
w1---试样中猪胆酸含量,%;
w2---试样中猪去氧胆酸含量,%。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留至小数点后一位。
7.4.1.6 精密度
在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值:含量大于或等于10%时,不大于
该算术平均值的5%;含量低于10%时,不大于该算术平均值的10%。
7.4.2 高效液相色谱-示差折光法
7.4.2.1 原理
试样中的胆汁酸经提取液提取后,经高效液相色谱反相柱法分离后,示差折光检测,外标法定量。
7.4.2.2 试剂或材料
7.4.2.2.1 甲醇:色谱纯。
7.4.2.2.2 乙腈:色谱纯。
7.4.2.2.3 胆汁酸混合标准贮备溶液(1mg/mL):分别准确称取10mg猪胆酸标准品(CAS号:547-75-1,
纯度大于或等于99%)、猪去氧胆酸标准品(CAS号:83-49-8,纯度大于或等于97.3%)、鹅去氧胆酸标准品
(CAS号:74-25-9,纯度大于或等于99%)(准确至0.01mg),于10mL容量瓶中,用甲醇(7.4.2.2.1)溶解,
混匀。
7.4.2.2.4 胆汁酸混合标准系列溶液:准确吸取适量胆汁酸混合标准贮备溶液(7.4.2.2.3)于50mL容
量瓶中,用甲醇(7.4.2.2.1)稀释并定容,混匀,配制成质量浓度分别为20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、
200μg/mL和500μg/mL标准系列溶液,临用现配。
7.4.2.2.5 微孔滤膜:孔径0.45μm,有机系。
7.4.2.3 仪器设备
7.4.2.3.1 高效液相色谱仪:配示差折光检测器。
7.4.2.3.2 超声波振荡器。
7.4.2.3.3 分析天平:精度为0.1mg和0.01mg。
7.4.2.3.4 pH计。
7.4.2.4 试验步骤
7.4.2.4.1 试样溶液的制备
平行做两份试验。称取试样100mg(准确至0.0001g)于100mL容量瓶中,加流动相[7.4.2.4.2
b)]约70mL,超声提取30min,取出,冷至室温,用流动相[7.4.2.4.2b)]定容,摇匀,溶液经微孔滤膜
(7.4.2.2.5)过滤,待测。
7.4.2.4.2 高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或者性能相当者;
b) 流动相:甲醇(7.4.2.2.1)+乙腈(7.4.2.2.2)+水=110+100+90,用磷酸调pH至2.6±0.2;
c) 流速:1.0mL/min;
d) 检测器:示差折光检测器;
e) 检测池温度:40℃;
f) 柱温:40℃;
g) 进样量:20μL。
7.4.2.4.3 测定
在仪器最佳工作条件下,将混合标准系列溶液和试样溶液注入液相色谱仪,猪胆酸、猪去氧胆酸和
鹅去氧胆酸标准溶液色谱图见附录B。
7.4.2.4.4 定性
试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸保留时间应与混合标准系列溶液浓度相近的该组分
的保留时间一致,其相对偏差在2.5%之内。
7.4.2.4.5 定量
以混合标准系列溶液中被测组分浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标,绘制各组分的标准曲线,
其线性相关系数不低于0.99。单点校准定量时,试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的浓度与
标准系列工作溶液的浓度相差不超过30%。
7.4.2.5 试验数据处理
试样中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量以质量分数wi 计,数值以%表示,单点校准按式(5)
计算,多点校准按式(6)计算。
wi=
Pi×Ci×V
Psti×m×1000×
100 (5)
式中:
Pi ---试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积;
Ci ---混合标准工作溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度,单位为微克每毫升
(μg/mL);
V ---试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);
Psti---混合标准工作溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积;
m ---试样质量,单位为毫克(mg)。
以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,结果保留至小数点后一位。
wi=
Ci×V
m×1000×
100 (6)
式中:
Ci ---标准曲线上查得的试样溶液中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度,单位为微克
每毫升(μg/mL);
V ---试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);
m ---试样质量,单位为毫克(mg)。
以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,结果保留至小数点后一位。
试样中胆汁酸总量以质量分数w 计,数值以%表示,按式(7)计算。
w=w1+w2+w3 (7)
式中:
w1---试样中猪胆酸含量,%;
w2---试样中猪去氧胆酸含量,%;
w3---试样中鹅去氧胆酸含量,%。
以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,结果保留至小数点后一位。
试样中猪胆酸和猪去氧胆酸总量以质量分数w'计,数值以%表示,按式(8)计算。
w'=w1+w2 (8)
式中:
w1---试样中猪胆酸含量,%;
w2---试样中猪去氧胆酸含量,%。
以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,结果保留至小数点后一位。
7.4.2.6 精密度
在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值:含量大于或等于10%时,不大于
该算术平均值的5%;含量低于10%时,不大于该算术平均值的10%。
7.5 水溶性氯化物(以氯离子计)
按GB/T 6439的规定执行。
7.6 粗灰分
按GB/T 6438的规定执行。
7.7 水分
按GB/T 6435的规定执行。
7.8 粒度
按GB/T 5917.1的规定执行。
7.9 总砷
按GB/T 13079的规定执行。
7.10 铅
按GB/T 13080的规定执行。
7.11 镉
按GB/T 13082的规定执行。
7.12 沙门氏菌
按GB/T 13091的规定执行。
8 检验规则
8.1 组批
以相同原料、相同生产工艺、......
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