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| 标准编号 | GB/T 17819-2017 (GB/T17819-2017) | | 中文名称 | 添加剂预混合饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of Vitamin B12 in Additive Premix - High Performance Liquid Chromatography | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B46 | | 国际标准分类 | 65.120 | | 字数估计 | 7,734 | | 发布日期 | 2017-11-01 | | 实施日期 | 2018-05-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 17819-1999 | | 标准依据 | 国家标准公告2017年第29号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 17819-2017: 添加剂预混合饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法
GB/T 17819-2017 英文名称: Determination of vitamin B12 in additive premix -- High performance liquid chromatography
ICS 65.120
B46
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 17819-1999
1 范围
本标准规定了添加剂预混合饲料中维生素B12含量测定的高效液相色谱方法。
本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素B12的测定。
本标准的方法检出限为0.1mg/kg,定量限为0.5mg/kg。
5 仪器和设备
5.1 实验室常用仪器、设备。
5.2 电子天平:感量0.0001g、感量0.001g。
5.3 离心机:可达5000r/min(相对离心力为2988g)。
5.4 超声波水浴。
5.5 固相萃取装置。
5.6 高效液相色谱仪:配紫外可调波长检测器(或二极管矩阵检测器)。
5.7 氮吹装置。
5.8 紫外分光光度计。
5.9 C18固相萃取小柱:500mg/6mL或相当性能的固相萃取小柱。
6 采样和试样制备
按照GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品,用四分法缩减取样。按照GB/T 20195制备试样,
磨碎,全部通过0.25mm孔筛,混匀,装入密闭容器中,避光保存备用。
7 分析步骤
7.1 提取
7.1.1 维生素预混合饲料的提取
称取试样2g~3g(精确到0.001g),置于50mL离心管中,准确加入水20mL,充分摇动30s,再
置于超声水浴中超声提取30min,期间摇动2次。于离心机上5000r/min离心5min,取上清液,如果
样品溶液为含量大于10mg/kg的维生素预混料,则过0.45μm微孔滤膜,上HPLC测定。若测得样品
液中维生素B12浓度小于2μg/mL,则需按7.2净化方法处理;若测得样品液中维生素B12浓度大于
100μg/mL,应根据检测结果,用一定体积的水稀释,使稀释后维生素 B12的含量在2μg/mL~100μg/mL之间,重新测定。
7.1.2 复合预混合饲料的提取
称取试样2g~3g(精确到0.001g),置于50mL离心管中,准确加入水20mL,充分摇动30s,再
置于超声水浴中超声提取30min,期间摇动2次。于离心机上5000r/min离心5min,取上清液,进行下一步净化。
7.2 试样净化
固相萃取小柱分别用5mL甲醇和5mL水活化,准确移取10mL上清液(7.1)过柱,用5mL水淋
洗,近干后,用5mL甲醇洗脱,收集洗脱液。50℃ 氮气吹至近干,准确加入1mL水溶解,过0.45μm
微孔滤膜,上HPLC测定。若测得上机试样溶液中维生素B12浓度超出线性范围,应根据检测结果,用
一定体积的水稀释,使稀释后维生素B12的含量在1μg/mL~100μg/mL之间,重新测定。
7.3 测定
7.3.2 定量测定
按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数,向色谱柱注入相应的维生素B12标准工作液(4.8)和
试样溶液,得到色谱峰面积响应值,用外标法定量测定,维生素B12标准色谱图参见附录A。
9 重复性
对于维生素B12含量小于或等于50mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立
测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的15%。
对于维生素B12含量大于50mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立测定结
果与其算术平均值的差值不大......
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