GB/T 17999.10-2008 相关标准英文版PDF

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GB/T 17999.10-2008	英文版	189	GB/T 17999.10-2008	[PDF]天数 <=3	SPF鸡　微生物学监测　第10部分：SPF鸡　间接免疫荧光试验	GB/T 17999.10-2008	有效

基本信息
标准编号	GB/T 17999.10-2008 (GB/T17999.10-2008)
中文名称	SPF鸡　微生物学监测　第10部分：SPF鸡　间接免疫荧光试验
英文名称	SPF chicken -- Microbiological surveillance -- Part 10: Indirect immunofluorescent assay for SPF chicken
行业	国家标准 (推荐)
中标分类	B41
国际标准分类	11.220
字数估计	8,864
发布日期	2008-12-31
实施日期	2009-05-01
旧标准 (被替代)	GB/T 17999.9-1999
标准依据	国家标准批准发布公告2008年第27号(总第140号)
发布机构	中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围	GB/T 17999的本部分规定了间接免疫荧光试验的技术要求等。本部分适用于对SPF鸡进行鸡传染性贫血病毒(Chicken Infectious Anaemia Virus, CIAV)抗体的检测。

GB/T 17999.10-2008 ICS １１．２２０ B４１中华人民共和国国家标准 GB/T １７９９９．１０-２００８代替GB/T １７９９９．９-１９９９ SPF鸡　微生物学监测第１０部分：SPF鸡　间接免疫荧光试验２００８-１２-３１发布２００９-０５-０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言 GB/T １７９９９《ＳＰＦ鸡　微生物学监测》分为１０个部分： ---第１部分：ＳＰＦ鸡　微生物学监测总则； ---第２部分：ＳＰＦ鸡　红细胞凝集抑制试验； ---第３部分：ＳＰＦ鸡　血清中和试验； ---第４部分：ＳＰＦ鸡　血清平板凝集试验； ---第５部分：ＳＰＦ鸡　琼脂扩散试验； ---第６部分：ＳＰＦ鸡　酶联免疫吸附试验； ---第７部分：ＳＰＦ鸡　胚敏感试验； ---第８部分：ＳＰＦ鸡　鸡白痢沙门氏菌检验； ---第９部分：ＳＰＦ鸡　试管凝集试验； ---第１０部分：ＳＰＦ鸡　间接免疫荧光试验。本部分为GB/T １７９９９的第１０部分。本部分代替GB/T １７９９９．９-１９９９《ＳＰＦ鸡　间接免疫荧光试验》。本部分与GB/T １７９９９．９-１９９９相比主要变化如下： ---增加了规范性附录Ａ“试剂的配制”和资料性附录Ｂ“细胞计数方法”； ---详细界定了试验成立条件和待检样品的判定标准。本部分的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（ＳＡＣ/TＣ１８１）归口。本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司。本部分主要起草人：曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜骞、司昌德、于海波、孟庆文。本部分所代替标准的历次版本发布情况为： ---GB/T １７９９９．９-１９９９。 GB/T １７９９９．１０-２００８ SPF鸡　微生物学监测第１０部分：SPF鸡　间接免疫荧光试验１　范围 GB/T １７９９９的本部分规定了间接免疫荧光试验的技术要求等。本部分适用于对ＳＰＦ鸡进行鸡传染性贫血病毒（ＣｈｉｃｋｅｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＡｎａｅｍｉａＶｉｒｕｓ，ＣＩＡＶ）抗体的检测。２　原理间接免疫荧光试验，以病毒感染细胞作抗原，与待检血清中的特异抗体结合，再与荧光色素标记的抗抗体结合，形成抗原-抗体-抗抗体复合物。荧光色素在紫外光或蓝紫光的作用下，激发出可见的荧光，因此出现荧光就说明标记物的存在，同时也反映了特异性抗体的存在。常采用已知抗原及荧光色素标记的抗抗体检测相应的抗体。３　试剂和器材３．１　试剂３．１．１　ＣＩＡＶ病毒ＤＥＬＲＯＳＥ株。３．１．２　阴性、阳性血清。３．１．３　被检血清。３．１．４　磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）（见附录Ａ）。３．１．５　异硫氰荧光素（ＦＩＴＣ）标记抗鸡ＩｇＧ（按说明稀释使用）。３．１．６　缓冲甘油或封片剂（见附录Ａ）。３．１．７　丙酮。３．２　器材３．２．１　抗原片。３．２．２　湿盒。３．２．３　３７℃培养箱。３．２．４　荧光显微镜。４　操作程序４．１　感染细胞的制备用含１５％新生牛血清的ＤＭＥＭ培养基在３９℃和５％二氧化碳环境中培养ＭＤＣＣ-ＭＳＢ１细胞。细胞长至每毫升５×１０６个时（细胞计数参见附录Ｂ），接种ＣＩＡＶ，并换成含５％新生牛血清的ＤＭＥＭ培养基，继续培养３６ｈ～４８ｈ。４．２　抗原片的制备４．２．１　细胞病变（细胞体积增大２倍～３倍）约达５０％～７５％时，收集细胞培养物，以１５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清液，用ＰＢＳ洗涤细胞沉淀物３次，并细胞计数，用ＰＢＳ重悬细胞浓度。４．２．２　取１０μＬ细胞悬液（约含细胞１０５个......

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