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| 标准编号 | GB/T 22915-2008 (GB/T22915-2008) | | 中文名称 | 口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法 | | 英文名称 | Protocol of universal fluorogenic RT-PCR for foot and mouth disease virus | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 12,120 | | 发布日期 | 2008-12-31 | | 实施日期 | 2009-05-01 | | 标准依据 | National Standard Approval Announcement 2008 No.25 (Total No.138) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 22915-2008
Protocol of universal fluorogenic RT-PCR for foot and mouth disease virus
ICS １１．２２０
B４１
中华人民共和国国家标准
GB/T ２２９１５-２００８
口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法
２００８-１２-３１发布
２００９-０５-０１实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、禽鸟与蜜蜂）》
（第５版）。
本标准的附录Ａ、附录Ｃ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫
局、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人：花群义、杨云庆、秦智锋、周晓黎、卢体康、董俊、陶虹、阮周曦、叶弈优、林祥梅、
吴绍强。
GB/T ２２９１５-２００８
口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法
１ 范围
本标准规定了口蹄疫病毒荧光ＲＴ-ＰＣＲ检测的操作方法。
本标准适用于动物及其动物产品中口蹄疫病毒的检测。
２ 缩略语
下列缩略语适用于本标准。
２．１ 荧光RT-PCR
荧光反转录-聚合酶链反应。
每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
２．３ RNA
核糖核酸。
２．４ DEPC
焦碳酸磷酯。
２．５ PBS
磷酸盐缓冲盐水，配方见附录Ａ。
２．６ T犪狇酶
T犪狇ＤＮＡ聚合酶。
２．７ FMD犞
口蹄疫病毒。
３ 原理
根据口蹄疫病毒各型共有的基因特定序列的保守片段，合成一对通用的特异性引物和一条通用的
特异性探针。荧光探针的５′端标记ＦＡＭ荧光素，３′端标记ＴＡＭＲＡ荧光素，３′端的淬灭基团在近距离
内能吸收５′端报告荧光基团发出的荧光信号。但在扩增时，由于T犪狇酶的５′→３′的外切活性，在延伸
到荧光探针时，将其切断，两基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生。因此，可以通过检测荧光信号对
核酸模板进行检测。
４ 材料与试剂
４．１ 仪器与器材
４．１．１ 荧光ＲＴ-ＰＣＲ检测仪。
４．１．２ 高速台式冷冻离心机（离心速度１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。
４．１．３ 台式离心机（离心速度３０００ｒ／ｍｉｎ）。
４．１．４ 混匀器。
４．１．５ 冰箱（２℃～８℃和-２０℃两种）。
４．１．６ 微量可调移液器......
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