路径: 主页 > GB/T > 第618页 > GB/T 42491-2023 | 标准编号 | GB/T 42491-2023 (GB/T42491-2023) | | 中文名称 | 饲料中淀粉总含量的测定 酶法 | | 英文名称 | Determination of total starch content in feeds - Enzymatic method | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B46 | | 国际标准分类 | 65.120 | | 字数估计 | 16,154 | | 发布日期 | 2023-03-17 | | 实施日期 | 2023-10-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 42491-2023: 饲料中淀粉总含量的测定 酶法
GB/T 42491-2023 英文版: Determination of total starch content in feeds -- Enzymatic method
中华人民共和国国家标准
饲料中淀粉总含量的测定 酶法
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件修改采用ISO 15914:2004《动物饲料 总淀粉含量的酶催化测定》。
本文件与ISO 15914:2004相比,在结构上有较多调整。本文件与ISO 15914:2004结构编号对照
一览表见附录A。
本文件与ISO 15914:2004的技术差异及其原因如下:
a) 更改了适用范围(见第1章),细化了饲料产品类型;
b) 更改了淀粉含量定义(注)中含量的表示(见3.2),将g/kg修改为%,并对本文件中葡萄糖标准
溶液浓度和计算公式做了相应更改,以适应我国业内的习惯表示;
c) 增加了淀粉葡萄糖苷酶活测定方法(见附录B)和酶用量调整说明以及对酶的要求(见5.12),为
方法使用者提供便利;
d) 更改了40%乙醇溶液配制(见5.2),以符合我国常用分析纯乙醇试剂的实际情况;
e) 更改了己糖激酶法定量测定葡萄糖试剂盒的规定(见5.13),便于方法的使用;
f) 增加了样品制备的细度要求(见第7章),符合我国样品制备要求;
g) 更改、简化了二甲亚砜分散处理试样的程序(见8.2),为方法使用者提供便利;
h) 增加了水解振荡速率要求(见8.2.2),有利于方法的应用;
i) 更改了精密度的表述和要求(见第10章),有利于方法的应用;
j) 删除了检验报告,符合我国标准结构。
本文件做了下列编辑性改动:
---将文件名称更改为《饲料中淀粉总含量的测定 酶法》。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。
本文件起草单位:广州汇标检测技术中心、广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所、
广东农科监测科技有限公司。
本文件主要起草人:潘浣钰、王智民、万凯、王威利、周振新、卢丽枝、商方方、郝燕娟、陈诗欣、刘海燕、
闵曼、冯敬宾、刘芳芳、何绮霞。
饲料中淀粉总含量的测定 酶法
1 范围
本文件描述了饲料和饲料原料中淀粉总含量的酶法测定方法。
本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中淀粉总含量的测定,同时适用于纯淀
粉的含量测定。
本文件不适用于基质中含有在340nm波长处影响吸光度的成分的试样。
本文件方法定量限为4%。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696:1987,MOD)
注:GB/T 6682-2008被引用的内容与ISO 3696:1987被引用的内容没有技术上的差异。
GB/T 20195-2006 动物饲料 试样的制备(ISO 6498:1998,IDT)
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
4 原理
试样用40%乙醇除去可溶性糖,经90%二甲基亚砜溶液100℃分散,用浓盐酸60℃溶解并部分分
解,试样中的淀粉再用淀粉葡萄糖苷酶进一步定量酶解为葡萄糖,葡萄糖的量用己糖激酶法测定,换算
成淀粉含量[3,4]。
5 试剂或材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
5.1 水:GB/T 6682-2008,三级水。
5.2 乙醇溶液(40%):量取95%乙醇421mL,加水稀释至1000mL,混匀。
5.3 盐酸(HCl)(12mol/L)。
5.4 氢氧化钠溶液(4mol/L):称取氢氧化钠40g,溶于约50mL水中,冷却后,定量转移至250mL容
量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
5.5 乙酸溶液(2mol/L):量取59mL冰乙酸,用水稀释并定容至500mL,混匀。
5.6 乙酸钠溶液(2mol/L):称取无水乙酸钠82.0g,加水溶解并定容至500mL,混匀。
5.7 乙酸钠缓冲溶液(2mol/L,pH4.8):取乙酸溶液(5.5)41mL,与乙酸钠溶液(5.6)59mL混合,用乙
酸或乙酸钠溶液调节pH至4.8,临用现配。
5.8 二甲基亚砜(DMSO)水溶液(90%):二甲基亚砜+水=9+1。
5.9 Carrez澄清溶液,配制方法如下。
5.9.1 亚铁氰化钾溶液(0.25mol/L):称取三水合亚铁氰化钾106g,加水溶解并定容至1000mL,
混匀。
5.9.2 乙酸锌溶液(1mol/L,溶于0.5mol/L乙酸):称取二水合乙酸锌219.5g置于1000mL容量瓶
中,加水溶解,加冰乙酸30g溶于水,用水稀释并定容至1000mL,混匀。
5.10 碘-碘化钾溶液:称取碘12.7g和碘化钾24.0g,用水溶解并稀释至1000mL,棕色瓶保存。临用
前稀释10倍使用。
5.11 葡萄糖标准溶液的配制包括以下两种。
5.11.1 葡萄糖标准溶液Ⅰ(用于淀粉含量大于20%的试样):葡萄糖标准溶液(ρ=3.5g/L):称取三份
350mg无水葡萄糖(精确至1mg)分别置于100mL的容量瓶中,用水稀释至刻度,临用现配。
5.11.2 葡萄糖标准溶液Ⅱ(用于淀粉含量在4%~20%的试样):葡萄糖标准溶液(ρ=0.7g/L):称取
三份350mg无水葡萄糖(精确至1mg)分别置于500mL容量瓶中,用水稀释至刻度,临用现配。
5.12 淀粉葡萄糖苷酶溶液,含量160U/mL。
称取适量淀粉葡萄糖苷酶(AMG)[EC3.2.1.3(源于黑曲霉)],溶于9mL水与1mL乙酸钠缓冲溶
液(5.7)混合溶液。应使用不含游离葡萄糖的AMG,先依注1的酶活定义测定酶活,具体方法见附录B,
并根据酶活调整酶的称取量。AMG的贮存和使用见产品说明书。
酶活按照附录B进行测定,并根据酶活调整酶的称取量。
注1:不同供应商供应的酶酶活定义不同。本文件中AMG的活性单位定义为在25℃、pH4.75条件下,1min从糖
原中释放1μmol葡萄糖的AMG的量即为1单位AMG。
注2:10mL酶溶液能测定75个试样。
5.13 D-葡萄糖紫外测试试剂盒,用于定量测定葡萄糖含量,使用己糖激酶法,按试剂盒说明书进行配
制、操作和保存。
5.13.1 底物-缓冲溶液:按照试剂盒说明书配制。
5.13.2 酶溶液:按照试剂盒说明书配制。
5.13.3 显色剂:按照试剂盒说明书配制。
6 仪器设备
6.1 分析天平:精度0.1mg。
6.2 离心机:最大转速不低于6000r/min。
6.3 恒温水浴锅:控温精度±2℃。
6.4 恒温水浴锅:控温精度±1℃。
6.5 pH计:精度±0.01。
6.6 可调移液器:100μL、1000μL、5mL。
6.7 紫外可见分光光度计(带1cm石英比色皿)或酶标仪。
6.8 振荡器:转速大于或等于100r/min。
6.9 比色管:100mL,可用于复合玻璃电极测量pH,宽颈,配备磨砂玻璃接头。
6.10 旋涡混合器。
6.11 恒温水浴振荡器:控温精度±2℃,150r/min~200r/min,而且能使试管在水浴中固定并平放。
6.12 离心管:塑料或玻璃离心管,带盖,可密封,大于20mL。
6.13 玻璃珠:直径3mm。
7 样品
按GB/T 20195-2006制备试样,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛,充分混
匀,装入容器中,密闭保存,备用。
8 试验步骤
8.1 可溶性糖的去除
平行做两份试验。称取试样约0.2g,精确至0.1mg。分别放入两支离心管(6.12)中,加入10mL
乙醇溶液(5.2),水平放置在振荡器上,以100r/min振荡10min后,用1300r/min离心10min,弃去
上清液,残渣重复提取一次,弃去上清液,残渣按8.2继续操作。
8.2 淀粉溶解和部分分解
8.2.1 分散
向残渣(8.1)中加入15颗玻璃珠(6.13),边涡旋边向试样中加入10.0mLDMSO水溶液(5.8),继
续涡旋混合直至悬浮液均匀无结块,旋紧管盖。同时取一支洁净的离心管作为试样空白溶液,除不加试
样外,与试样平行进行操作。
注:在添加二甲基亚砜的过程中,确保样品均质化,防止形成微凝胶和结块。微凝胶和结块会导致结果偏低。
8.2.2 部分水解
将离心管水平放置在恒温振荡器中,100℃水浴150r/min,振荡30min,冷却后,加入1.7mL盐酸
(5.3),混匀。盖好管盖,置(60±1)℃水浴振荡水解30min。
8.2.3 调节pH
冷却后,将8.2.2离心管内容物定量转移至100mL比色管,加入氢氧化钠溶液(5.4)5.0mL和乙酸
钠缓冲液(5.7)2.5mL,混匀,用pH计准确测定溶液的pH后,用稀盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH
至4.8±0.1,用水冲洗pH电极,洗液并入比色管中,用水稀释至刻度。
8.3 将淀粉酶解为葡萄糖
将比色管中的试样溶液(8.2.3)充分摇匀,迅速用移液管取5.00mL置于干净离心管中,加入
0.125mLAMG酶溶液(5.12),旋紧管盖,混匀,在(60±1)℃水浴保温16h以上,于沸水浴中灭活
15min,取出冷却至室温,加入亚铁氰化钾溶液(5.9.1)0.125mL涡旋1min,再加入乙酸锌溶液(5.9.2)
0.125mL涡旋1min。离心管中溶液的量为5.375mL,6000r/min离心10min,取上清液备用。
向离心管剩余残渣中加入少量水,煮沸10min,冷却,加碘溶液(5.10)0.2mL,若出现蓝色,说明淀
粉酶解不完全,应重新从8.1检测该试样。
8.4 用酶法测定葡萄糖的含量
8.4.1 淀粉含量在20%以上试样:分别准确移取试样溶液(8.3)、试样空白溶液(8.2.1)、三个葡萄糖标
准溶液Ⅰ(5.11.1)和水空白溶液各0.5mL,准确加水9.5mL,混......
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