搜索结果: GB/T 44828-2024, GB/T44828-2024, GBT 44828-2024, GBT44828-2024
| 标准编号 | GB/T 44828-2024 (GB/T44828-2024) | | 中文名称 | 葡萄糖氧化酶活性检测方法 | | 英文名称 | Assay method of glucose oxidase activity | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | C27 | | 国际标准分类 | 07.080 | | 字数估计 | 8,858 | | 发布日期 | 2024-10-26 | | 实施日期 | 2024-10-26 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 44828-2024: 葡萄糖氧化酶活性检测方法
ICS 07.080
CCSC27
中华人民共和国国家标准
葡萄糖氧化酶活性检测方法
2024-10-26发布
2024-10-26实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
目次
前言 Ⅲ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 原理 1
5 试剂或材料 1
6 试验步骤 2
7 质量控制 3
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国工具酶标准化工作组(SAC/SWG11)提出并归口。
本文件起草单位:南生(厦门)分析检测有限公司、华测检测认证集团股份有限公司、宁夏夏盛实业
集团有限公司、威海先进医用材料与高端医疗器械山东省实验室、厦门银祥集团有限公司、深圳市新产
业生物医学工程股份有限公司、武汉新华扬生物股份有限公司、廊坊诺道中科医学检验实验室有限公
司、深圳市海拓华擎生物科技有限公司、天津博菲德科技有限公司、广州市进德生物科技有限公司、山西
大禹生物工程股份有限公司、河北省微生物研究所有限公司、武汉瀚海新酶生物科技有限公司、深圳华
通威国际检验有限公司、杭州安旭生物科技股份有限公司、广东嘉德乐科技股份有限公司、博利多生物
科技(石家庄)有限公司、夏禾(深圳)生物技术有限公司、夏禾(杭州)生物技术有限公司、福建南生科技
有限公司、复旦大学、山东大学、苏州大学、厦门大学、福建农林大学、厦门华厦学院。
本文件主要起草人:黄发灿、郑登忠、白洪海、沈涛、张志刚、马富强、杜凯、徐丽、胖铁良、何毅、
王鹏远、李民友、张广民、马清河、施婧妮、余良清 、陈东、徐昇、张庚博、赵毅、郭延巍、林燕娜、王田华、
郑恬烨、黄恩铭、汤霖、潘威、钟江、陈秀兰、朱力、张永有、刘斌、赵超、皱忠爱、潘排凤、黄海燕。
葡萄糖氧化酶活性检测方法
1 范围
本文件描述了葡萄糖氧化酶活性的检测方法。
本文件适用于葡萄糖氧化酶活性的检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
葡萄糖氧化酶 glucoseoxidase
在有氧气的条件下专一性催化β-D-葡萄糖生成D-葡萄糖酸和过氧化氢的脱氢酶。
3.2
在pH为5.1、35℃的条件下,每分钟能把1.0μmol的β-D-葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和过氧化氢
所需的酶量为一个活性单位(U)。
4 原理
在葡萄糖氧化酶的作用下,葡萄糖和氧反应,生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢和无色的还原型
邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下,生成水和红色的氧化型邻联茴香胺,该红色物质在波长500nm处
有特异吸收峰,通过测定红色物质500nm处吸光度的增高速率可计算出该酶的活性单位数。
5 试剂或材料
5.1 水
符合GB/T 6682规定的二级水。
5.2 50mmol/L乙酸钠缓冲液
称取0.82g无水乙酸钠,用150mL纯水溶解,在35℃下用1mol/L盐酸调pH 至5.1,定容至
200mL。
5.3 0.21mmol/L邻联茴香胺
称取50mg邻联茴香胺二盐酸盐,用7.5mL纯水溶解。取1mL用50mmol/L乙酸钠缓冲液
(pH5.1)稀释定容至100mL。
5.4 10%β-D(+)葡萄糖溶液
称取1gβ-D(+)葡萄糖,用纯水溶解并定容至10mL。
5.5 0.17mmol/L邻联茴香胺-1.72%葡萄糖溶液
取24mL0.21mmol/L邻联茴香胺,5mL10%β-D(+)葡萄糖溶液,混匀并在35℃恒温待用。现
配现用。
5.6 辣根过氧化物酶溶液
取辣根过氧化物酶适量,用冰预冷纯水配制并稀释成60红倍酚单位每毫升(U/mL)的溶液。
5.7 供试品溶液
称量供试品固体或溶液适量,用冰预冷的50mmol/L乙酸钠缓冲液(pH5.1)溶解并稀释至
0.4U/mL~0.8U/mL的溶液。
6 试验步骤
6.1 底物溶液
按表1配制底物工作溶液,35℃水浴5min。
表1 底物工作溶液配制表
试剂 供试品/mL 对照品/mL
0.17mnol/L邻联茴香胺-1.72%葡萄糖溶液 2.9 2.9
辣根过氧化物酶溶液 0.1 0.1
6.2 酶促反应
用紫外分光光度计监测底物工作溶液A500nm恒定后,按表2加样,测A500nm吸光度值,每分钟读数
一次,共5min,取每分钟相邻两读数差值ΔA500nm的最大值。
表2 酶促反应加样表
试剂 供试品/mL 对照品/mL
供试品溶液 0.1 -
50mmol/L乙酸钠缓冲液(pH5.1) - 0.1
6.3 结果计算
6.3.1 单位体积酶活性单位按公式(1)计算:
UV=
(ΔA500nm 供试品-ΔA500nm 对照品)×3.1×df
7.5×0.1
(1)
式中:
UV ---每毫升溶液中的酶活性单位,单位为活性单位每毫升(U/mL);
ΔA500nm供试品 ---供试品每分钟相邻两吸光值差值;
ΔA500nm对照品 ---对照品每分钟相邻两吸光值差值;
3.1 ---酶促反应液的总体积,单位为毫升(mL);
df ---稀释倍数;
7.5 ---A500nm处邻联茴香胺的消光系数;
0.1 ---供试品的加样量,单位为毫升(mL)。
6.3.2 单位质量......
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