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| 标准编号 | HJ 1215-2021 (HJ1215-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | Water quality - Determination of phytoplankton - Filtration membrane-Microscope counting method | | 行业 | 环保行业标准 | | 字数估计 | 16,157 | | 发布机构 | 生态环境部 | HJ 1215-2021: 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法
HJ 1215-2021 英文名称: Water quality - Determination of phytoplankton - Filtration membrane-Microscope counting method
中华人民共和国国家生态环境标准
水质 浮游植物的测定
滤膜-显微镜计数法
本电子版为正式标准文本，由生态环境部环境标准研究所审校排版。
2021-11-29 发布 2022-06-01 实施
生 态 环 境 部 发 布
1 适用范围
本标准规定了测定水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。
本标准适用于地表水中浮游植物的快速测定。
当样品最大过滤体积为 1000 ml 时，方法检出限为 40 cells/L。方法检出限计算方法详见附录 A。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。
凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
HJ 494 水质 采样技术指导
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
4 方法原理
样品通过一定孔径的滤膜，群体、丝状体及单细胞浮游植物截留在滤膜上，滤膜经透明处理后在显
微镜下镜检。
5 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。
5.1 碘（I2）。
5.2 碘化钾（KI）。
5.3 甲醛溶液：w(HCHO)＝37%～40%。
5.4 鲁哥氏碘液：
称取 60 g 碘化钾（5.2）溶解在 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水
定容至 1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。
5.5 显微镜浸没油：nD
23=1.515 或nE
23=1.518，配透明玻璃滴棒。
5.6 滤膜：混合纤维素酯膜，直径 25 mm，孔径 0.45 μm～3 μm。
注：每批次滤膜应进行水化测试和油透明测试，满足可水化和可透明要求后方可使用。将 1 张未使用的滤膜放入盛
水的烧杯中，若滤膜被水完全浸润，则滤膜可水化。取 1 张未使用的滤膜，置于滴有显微镜浸没油的载玻片上，
若滤膜被浸没油完全浸润，则滤膜可透明。
6 仪器和设备
6.1 25 号浮游生物网：网孔直径 0.064 mm，网呈圆锥形，网口套在铜环上，网底端有出水开关活塞。
6.2 定性采样瓶：30 ml～100 ml 广口聚乙烯瓶。
6.3 采水器：不锈钢或有机玻璃材质，圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。
6.4 定量采样瓶：1 L～2 L 广口聚乙烯瓶。
6.5 冷藏箱。
6.6 真空抽滤装置：包括漏斗（直径 25 mm，容积 200 ml）、多孔聚酯滤膜支撑板、收集瓶、真空泵
（相对真空度≤-17 kPa，可调）。
6.7 载玻片：25 mm×76 mm。
注：载玻片和盖玻片使用前应用浓盐酸和乙醇浸泡。若条件允许，选择可直接使用的载玻片或盖玻片。
6.8 盖玻片：25 mm×25 mm。
6.9 无齿组织镊子。
6.10 载玻片晾片板：适配同规格载玻片。
6.11 烘箱：70 ℃±2 ℃，温度可调。
6.12 正置生物显微镜或倒置生物显微镜：物镜 4×、10×、20×、40×；目镜 10×或 15×。
6.13 载物台测微计：又称镜台测微计，1 mm/100 DIV，分划值为 0.01 mm。
注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。
6.14 惠普尔目镜分划板（Whipple grid）：边长为 7 mm～10 mm 的正方形大格，划分为 100 个相同的
正方形中格，位于中央的 1 个中格进一步划分为 25 个相同的正方形小格。
注：不具备惠普尔目镜分划板时，亦可使用同规格的网格型目镜分划板（即中央的中格未细分为 25 小格的网格型
目镜分划板）。
6.15 计数器。
6.16 一般实验室常用设备。
7 样品
7.1 样品采集
7.1.1 定性样品
点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定执行。
使用 25 号浮游生物网（6.1）采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至
0.5 m 水深处以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往复，缓慢拖动约 1 min～3 min，待网中明显有浮
游植物进入，将浮游生物网（6.1）提出水面，网内水自然通过网孔滤出，待底部剩少许水样（5 ml～
10 ml）时，将底端出口移入定性采样瓶（6.2）中，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品
时，用 25 号浮游生物网（6.1）过滤特定水层样品，其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后
及时将浮游生物网清洗干净。样品采集后放入冷藏箱（6.5）冷藏避光运输。
如有定性样品采集技术规范，按技术规范有关要求执行。
7.1.2 定量样品
按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定采集定量样品。
使用采水器（6.3）采集 1 L～2 L 样品至定量采样瓶（6.4）中。若水体透明度较高，浮游植物数
量较少时，应酌情增加采样体积。定量样品采集完成后，定量采样瓶（6.4）不应装满，以便摇匀。
注 1：有些浮游植物（如蓝藻）常上浮在水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。
注 2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。
7.2 样品保存
7.2.1 定性样品
定性样品采集后应立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。镜检活体
样品不加鲁哥氏碘液（5.4）固定。定性样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光条件
下可保存 12 个月。活体样品 4 ℃～10 ℃冷藏避光条件下可保存 36 h。
7.2.2 定量样品
定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。也可将鲁哥
氏碘液（5.4）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存 3 周；
1 ℃～5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。
样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.4）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补
加适量的鲁哥氏碘液（5.4），直到样品的颜色恢复为黄褐色。
注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的 4%。
8 分析步骤
8.1 试样制备
8.1.1 预检
按照 8.1.2～8.1.5 的要求完成预检装片，判断样品浮游植物密度，便于样品的后续分析。
8.1.2 混匀样品
每次取样前，采用上下颠倒至少 30 次的方式充分混匀样品，混匀动作要轻。
8.1.3 过滤体积
根据预检估算浮游植物密度，调整样品过滤体积，最终使滤膜上约有 40 个～105个浮游植物细
胞。不同预检估计密度水平下推荐的样品过滤体积见表 1。
8.1.4 样品过滤
用量筒或移液器（6.16）快速量取适量样品体积，将样品加入装有滤膜（5.6）的真空抽滤装置（6.6）
漏斗中，静置 2 min～3 min，真空抽滤，至漏斗中有 0.5 cm 液层时关闭真空泵，使剩余液体完全通过漏
斗，切忌抽干滤膜。
8.1.5 装片制备
样品过滤完成后，用无齿组织镊子（6.9）取下滤膜，保持截留浮游植物的一面向上，放在滴有 2 滴
显微镜浸没油（5.5）的载玻片（6.7）上，再用透明玻璃滴棒在滤膜上滴 2 滴显微镜浸没油（5.5），将载
玻片（6.7）放入载玻片晾片板（6.10），置于烘箱（6.11）中，70 ℃±2 ℃加热 2 h。2 h 后取出载玻片
晾片板（6.10），观察滤膜是否透明。若已透明，再在滤膜上滴加 2 滴显微镜浸没油（5.5），盖上盖玻片
（6.8），装片制备完成。若滤膜加热 2 h 后未透明，延长加热时间，不超过 24 h。盖上盖玻片（6.8）时，
勿扰动滤膜。
8.2 定性样品分析
在显微镜（6.12）下观察定性样品，鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种，其他种类至少应鉴
定到属。部分鉴定参考资料见参考文献。
注：种类鉴定除用定性样品观察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察。
8.3 定量样品分析
8.3.1 显微镜标定
计数前标定显微镜（6.12），确定计数视野面积（Whipple 视野或目镜视场视野）。显微镜标定工具
包括载物台测微计（6.13）和惠普尔目镜分划板（6.14）。惠普尔目镜分划板标定方法参见附录 B。
8.3.2 显微镜计数
不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野数量见表 2。将装片（8.1.5）置于显微镜（6.12）载物
台上，用 Whipple 视野或目镜视场视野进行镜检计数。较低密度水平样品计数，建议选择目镜视场视野
计数。根据浮游植物细胞大小，选择目镜 10×、物镜 20×或目镜 10×、物镜 40×放大倍数镜检，记录
每个视野的浮游植物种类及数量。
9.2 结果表示
测定结果以科学计数法表示，保留 2 位有效数字。
10 精密度
6 家实验室分别对含高密度水平（1.0×108 cells/L）、中密度水平（4.0×106 cells/L）和低密度水
平（7.0×104 cells/L）的浮游植物样品进行......
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