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| 标准编号 | JJG 705-2014 (JJG705-2014) | | 中文名称 | 液相色谱仪检定规程 | | 英文名称 | Liquid Chromatography | | 行业 | 计量行业标准 | | 中标分类 | A60 | | 国际标准分类 | 17.020 | | 字数估计 | 26,292 | | 发布日期 | 2/14/2014 | | 实施日期 | 8/14/2014 | | 旧标准 (被替代) | JJG 705-2002 | | 引用标准 | JJG 537-2006 | | 标准依据 | 质检总局公告2014年第17号 | | 发布机构 | 国家质量监督检验检疫总局 | | 范围 | 本规程适用于配有紫外一可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光率检测器和蒸发光散射检测器的液相色谱仪的首次检定、后续检定和使用中检查。 | JJG 705-2014: 液相色谱仪检定规程
中华人民共和国国家计量检定规程
液相色谱仪
LiquidChromatographs
国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布
液相色谱仪检定规程
LiquidChromatograp
hs
代替JJG705-2002
归 口 单 位:全国物理化学计量技术委员会
起 草 单 位:中国计量科学研究院
本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释
本规程起草人:
何雅娟 (中国计量科学研究院)
何海红 (中国计量科学研究院)
赵 敏 (中国计量科学研究院)
目 录
引言 (Ⅱ)
1 范围 (1)
2 引用文件 (1)
3 概述 (1)
4 计量性能要求 (1)
4.1 输液系统 (1)
4.2 柱温箱 (2)
4.3 检测器 (2)
4.4 整机性能 (2)
5 通用技术要求 (3)
5.1 仪器外观 (3)
5.2 仪器电路系统 (3)
6 计量器具控制 (3)
6.1 检定条件 (3)
6.2 检定项目和检定方法 (4)
6.3 检定结果 (11)
6.4 检定周期 (11)
附录A 色谱柱性能测试 (12)
附录B 单色器滤光片的性能测试 (14)
附录C 不同温度下流动相密度 (15)
附录D 检定证书 (内页)格式 (17)
附录E 液相色谱仪检定记录格式 (18)
引 言
JJG705-2014 《液相色谱仪》的编写是以JJF1001-2011 《通用计量术语及定
义》、JJF1002-2010 《国家计量检定规程编写规则》为基础和依据,对JJG705-2002
《液相色谱仪》进行修订的。
与JJG705-2002 《液相色谱仪》相比,除编辑性修改外,本规程主要技术内容有
如下变化:
---增加了蒸发光散射检测器;
---删掉了检测器换挡误差的检定项目;
---荧光检测器检定用标准物质改为萘-甲醇溶液;
---示差折光率检测器检定用标准物质改为甲醇中胆固醇溶液;
---整机定性重复性由原来的1.5%修改为1.0%;
---检测器基线噪声和漂移采集时间由原来的1h改为30min。
JJG705的历次版本发布情况为:
---JJG705-2002;
---JJG705-1990。
液相色谱仪检定规程
1 范围
本规程适用于配有紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折
光率检测器和蒸发光散射检测器的液相色谱仪的首次检定、后续检定和使用中检查。
2 引用文件
JJG537-2006 荧光分光光度计
3 概述
液相色谱仪 (以下简称仪器)是由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数
据处理系统等部分组成的分析仪器,图1是其组成的方框图。液相色谱仪根据样品中各
组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附等特性的差异,由流动相将样品带入色谱
柱中进行分离,经检测器检测并通过数据处理系统记录色谱图,依据各组分的保留时间
和响应值 (峰面积或峰高)进行定性和定量分析。
图1 液相色谱仪组成方框图
4 计量性能要求
4.1 输液系统
4.1.1 输液管路接口紧密牢固,在规定的压力范围内无泄漏。
4.1.2 泵流量设定值误差SS和流量稳定性SR 应符合表1的要求。
4.1.3 梯度最大允许误差Gc:±3% 。
表1 泵流量设定值误差SS和稳定性SR 的指标要求
泵流量设定值/(mL/min) 0.2~0.5 0.6~1.0 大于1.0
测量次数 3 3 3
流动相收集时间/min 20~10 10~5 5
泵流量设定值最大允许误差SS ±5% ±3% ±2%
泵流量稳定性SR 3% 2% 2%
注:①最大流量的设定值可根据用户使用情况而定;
②对特殊的、流量小的仪器,流量的设定可根据用户使用情况选大、中、小三个流量,
流动相的收集时间则根据情况适当缩短或延长。
4.2 柱温箱
4.2.1 柱温箱温度设定值最大允许误差:±2℃。
4.2.2 柱温箱温度稳定性:不大于1℃/h。
4.3 检测器
仪器的检测器的主要技术指标见表2。
表2 液相色谱仪检测器的主要技术指标
项目
检测器 紫外-可见光检测器
二极管阵列检测器
荧光检测器 示差折光率检测器 蒸发光散射检测器
基线噪声① ≤5×10-4AU ≤5×10-4FU ≤5×10-7RIU ≤1mV
基线漂移 ≤5×10-3AU/30min ≤5×10-3FU/30min≤5×10-6RIU/30min ≤5mV/30min
最小检测浓度
≤5×10-8g/mL
萘-甲醇溶液
≤5×10-9g/mL
萘-甲醇溶液
≤5×10-6g/mL
胆固醇-甲醇溶液
≤5×10-6g/mL
胆固醇-甲醇溶液
波长示值最大
允许误差
±2nm ±5nm - -
波长重复性 ≤2nm ≤2nm - -
线性范围 优于103 优于103 优于103 -
注:①若仪器的输出信号用mV或V表示,注意查看仪器说明书或仪器标牌标明的其与AU
(FU)的换算关系;若无特殊标明通常可按照1V=1AU (FU)进行换算。
4.4 整机性能
仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示,指标要求见表3。
表3 液相色谱仪整机性能指标要求
项目
检测器 紫外-可见光检测器
二极管阵列检测器
荧光检测器 示差折光率检测器 蒸发光散射检测器
定性重复性 ≤1.0% ≤1.0% ≤1.0% ≤1.5%
定量重复性 ≤3.0% ≤3.0% ≤3.0% ≤4.0%
5 通用技术要求
5.1 仪器外观
仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌,国
产仪器应有制造计量器具许可证标志。
5.2 仪器电路系统
仪器电源线、信号线等插接紧密,各开关、旋钮、按键等功能正常,指示灯灵敏,
显示器清晰。
6 计量器具控制
计量器具控制包括:首次检定、后续检定和使用中检查。
6.1 检定条件
6.1.1 环境条件
6.1.1.1 检定室应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,通风良好。
6.1.1.2 室温 (15~30)℃,检定过程中温度变化不超过3℃ (对示差折光率检测器,
室温变化不超过2℃),室内相对湿度20%~85%。
6.1.1.3 仪器应平稳地放在工作台上,周围无强烈机械振动和电磁干扰源,仪器接地
良好。
6.1.1.4 电源电压为 (220±22)V,频率为 (50±0.5)Hz。
6.1.2 检定设备
6.1.2.1 秒表:最小分度值不大于0.1s。
6.1.2.2 分析天平:最大称量不小于100g,最小分度值不大于1mg。
6.1.2.3 数字温度计:测量范围为 (0~100)℃,最大允许误差为±0.3℃。
以上器具需经计量检定合格。
6.1.3 有证标准物质:
萘-甲醇 溶 液 标 准 物 质:认 定 值 为 1.00×10-4 g/mL,扩 展 不 确 定 度 小 于
4%,k=2;
萘-甲醇 溶 液 标 准 物 质:认 定 值 为 1.00×10-7 g/mL,扩 展 不 确 定 度 小 于
4%,k=2;
甲醇中胆固醇溶液标准物质:认定值为 200μg/mL,扩展不确定 度 小 于
2.0%,k=2;
甲醇中胆固醇溶液标准物质:认定值为 5.0μg/mL,扩展不确定 度 小 于
5.0%,k=2;
胆固醇纯度标准物质:认定值为99.7%,扩展不确定度小于0.1%,k=2。
6.1.4 其他要求
6.1.4.1 检定用试剂:色谱级甲醇,纯水,分析纯的丙酮和异丙醇,紫外分光光度计
溶液标准物质等。
6.1.4.2 注射器:10μL,50μL和10mL各一支。
6.1.4.3 容量瓶:50mL,10个。
6.2 检定项目和检定方法
6.2.1 检定项目
检定项目见表4。
表4 检定项目一览表
序号 检定项目 首次检定 后续检定 使用中检查
输液系统:泵耐压
泵流量设定值误差SS
泵流量稳定性SR
梯度误差Gi②
+①
柱温箱:温度设定值误差ΔTS②
温度稳定性TC②
检测器:基线噪声
基线漂移
最小检测浓度
波长示值误差和重复性③
线性范围
4 整机:定性、定量重复性 + + +
注:① “+”表示应检定项目,“-”表示可不检定项目;
② 无梯度洗脱装置和无柱温箱的仪器,此项不检定;
③ 紫外-可见光、二极管阵列和荧光检测器检定此项目,其他检测器不检定此项目。
6.2.2 检定方法
6.2.2.1 通用技术要求
按5.1和5.2的要求,目视、手动检查。
6.2.2.2 输液系统
a)泵耐压
将仪器各部分连接好,以100% 甲醇 (或纯水)为流动相,流量为0.2mL/min,
按说明书启动仪器,压力平稳后保持10min,用滤纸检查各管路接口处是否有湿迹。
卸下色谱柱,堵住泵出口端 (压力传感器以下),使压力达到最大允许值的90%,保持
5min应无泄漏。
b)泵流量设定值误差SS和流量稳定性SR
按表1的要求设定流量,启动仪器,压力稳定后,在流动相出口处用事先称重过的
洁净容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,收集表1规定时间流出的流动相,在分析天
平上称重,按公式 (3)计算流量实测值Fm 按公式 (1)、公式 (2)计算SS和SR。每
一设定流量,重复测量3次。
SS=
Fm-FS
FS ×
100% (1)
式中:
Fm---同一设定流量3次测量值的算术平均值,mL/min;
FS---流量设定值,mL/min。
SR=
Fmax-Fmin
Fm ×
100% (2)
式中:
Fmax---同一设定流量3次测量值的最大值,mL/min;
Fmin---同一设定流量3次测量值的最小值,mL/min。
Fm=(W2-W1)/(ρt·t) (3)
式中:
Fm---流量实测值,mL/min;
W2---容量瓶+流动相的质量,g;
W1---容量瓶的质量,g;
ρt---实验温度下流动相的密度,g/cm3,(不同温度下流动相的密度参见附录C);
t---收集流动相的时间,min。
c)梯度误差
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序 (梯度程序可参照表5),A 溶剂为纯
水,B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液。将输液泵和检测器连接 (不接色谱柱),开机后
以A溶剂冲洗系统,基线平稳后开始执行梯度程序,画出B溶剂经由5段阶梯从0%
变到100%的梯度变化曲线,如图2所示。求出由B溶剂变化所产生的每一段阶梯对应
的响应信号值的变化值Li。重复测量2次,按公式 (4)计算每一段阶梯对应的响应信
号值的变化平均值Li;按公式 (5)计算五段阶梯响应信号值的总平均值Li;按公式
(6)计算每一段的梯度误差Gi,取Gi 最大者作为仪器的梯度误差。
Li=
(L1i-L1(i-1))+(L2i-L2(i-1))
(4)
式中:
Li---第i段阶梯响应信号值的平均值;
L1i---第i段阶梯第1组响应信号值;
L1(i-1)---第 (i-1)段阶梯第1组响应信号值;
L2i---第i段阶梯第2组响应信号值;
L2(i-1)---第 (i-1)段阶梯第2组响应信号值。
Li=
i=1
Li
(5)
式中:
Li---5段阶梯响应信号值的总平均值;
n---梯度的阶梯数,n=5。
Gi=
Li-Li
Li
×100% (6)
式中:
Gi---第i段阶梯的梯度误差。
注:当i为1 (i-1=0)时,第 (i-1)阶梯响应信号值为B溶剂为0%时的响应信号值。
表5 梯度程序设置
序号
A溶剂
(纯水)
B溶剂
(0.1%丙酮水溶液)
1 100% 0%
2 80% 20%
3 60% 40%
4 40% 60%
5 20% 80%
6 0% 100%
7 100% 0%
图2 梯度误差检定示意图
6.2.2.3 柱温箱温度设定值误差ΔTS和柱箱温度稳定性TC
将数字温度计探头固定在柱温箱内与色谱柱相同的部位,选择35℃和45℃ (也可
根据用户使用温度设定)进行检定。按仪器说明书操作,通电升温,待温度稳定后,记
下温度计读数并开始计时,以后每隔10min记录1次读数,共计7次,求出平均值。
平均值与设定值之差为柱温箱温度设定值误差ΔTS,7次读数中最大值与最小值之差为
柱温箱温度稳定性TC。
6.2.2.4 紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器的性能
a)波长示值误差和重复性
将检测器和数据处理系统连接好,通电预热稳定后,用注射器将纯水注入检测池内
进行冲洗后,充满检测池。待检测器示值稳定后,在 (235±5)nm、 (257±5)nm、
(313±5)nm和 (350±5)nm的波长下将示值回零,然后再用注射器将紫外分光光度
计溶液标准物质 (参考波长为235nm,257nm,313nm和350nm)从检测器入口注入
样品池中冲洗,并将样品池充满至示值稳定。将检测器波长调到低于参考波长5nm 处
(例如检定257nm时,检测器波长先调到252nm),改变检测器波长,每 (5~10)s
改变1nm,记录每个波长下的吸收值 (吸收值变化的示意图见图3),最大或最小吸收
值对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量3次,其中最大值与
最小值之差为波长重复性。
图3 波长示值误差检定中吸收值变化示意图
有吸光值显示的检测器,改变波长时可直接读出吸光值,其最大 (或最小)吸光值
对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。有波长扫描功能的仪器可画出标准溶液的
光谱曲线,其波峰 (或波谷)对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。对于有内置
标准滤光片可进行自检的仪器可直接采用其测量数据。
对改变波长有自动回零功能的紫外-可见光检测器,可采用连续进样的方法检定波
长示值误差,具体做法是:用一节空管代替色谱柱将液路连通,以水做流动相,流量为
(0.5~1.0)mL/min,采用步进进样方法,例如检定257nm 时,从252nm 开始到
262nm,每2min改变1nm,用注射器注入相同体积的紫外分光光度计溶液标准物质,
得到一组不同波长的色谱峰,最高 (或最低)色谱峰对应的波长与参考波长之差,即为
波长示值误差。
b)基线噪声和基线漂移
选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,紫外检测器的波长
设定为254nm,检测灵敏度调到最灵敏挡。开机预热,待仪器稳定后记录基线30min,
选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值,按公式 (7)计算基线噪声,用检测器自身
的物理量 (AU)作单位表示。基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值 (AU/
30min)表示。
Nd=KB (7)
式中:
Nd---检测器基线噪声;
K---衰减倍数;
B---测得基线峰-峰高对应的信号值,AU 。
c)最小检测浓度
在6.2.2.4中b)的色谱条件下,由进样系统注入 (10~20)μL的1.00×10-7g/mL
萘-甲醇溶液,记录色谱图,由色谱峰高和基线噪声峰高,按公式 (8)计算最小检测浓
度CL (按20μL进样量计算)。
CL=
2NdcV
20H
(8)
式中:
CL---最小检测浓度,g/mL;
Nd---基线噪声峰高;
c---标准溶液浓度,g/mL;
V---进样体积,μL;
H---标准物质的峰高。
注:Nd和 H 的单位应保证一致;式中分母的 “20”表示标准的进样体积,其单位为微升
(μL)。
d)线性范围
将检测器和数据处理系统连接好,检测器波长设定为254nm,通电稳定后,用注
射器直接向检测池中注射2%异丙醇-水溶液冲洗检测池至示值稳定后,记下此值。然
后,依照上法向检测池中依次分别注入丙酮-2%异丙醇系列水溶液 (丙酮含量为
0.1%,0.2%,,1.0%),并记下各溶液对应的稳定响应信号值,每个溶液重复测量
3次,取算术平均值。以5个丙酮溶液浓度 (0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%)
和对应的响应信号值做标准曲线,在曲线上找出丙酮溶液浓度大于0.5%各点的读数,
与相应各浓度点的测量值做比较,量值相差5%时的浓度作为检测上限CH。按6.2.2.4
中c)得到的最小检测浓度为检测下限CL值,CH/CL 比值为线性范围。
6.2.2.5 荧光检测器性能
a)波长示值误差和重复性
固定波长荧光检测器波长示值误差和重复性的检定,需取出检测器中的滤光片,参
照JJG537-2006 《荧光分光光度计》5.3.3的方法 (参见附录B),在经检定合格的紫
外-可见分光光度计上测出其最大透射比对应的波长,此波长与滤光片上标记的波长之
差,为波长示值误差。
可调波长荧光检测器波长示值误差和重复性的检定,将检测器与数据处理系统连接
好,利用萘在290nm (激发波长)和330nm (发射波长)有最大荧光强度的特性,用
注射器从检测池入口注入1.00×10-7g/mL的萘-甲醇溶液标准物质,冲洗检测池并将
其充满。调激发波长为290nm,改变发射波长,从325nm到335nm,每 (5~10)s
改变1nm,记录每个波长下的吸收值 (吸收值变化的示意图类似图3),曲线最高点对
应的波长与参考波长之差,为发射波长示值误差,重复测量3次,其最大值与最小值之
差为波长重复性。然后将发射波长调到测得的曲线最高点对应的波长,改变激发波长
(从285nm 到295nm),用与前面相同的方法测出激发波长的示值误差和重复性。
b)基线漂移和基线噪声
将仪器各部分连接好,选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,
灵敏度选在最灵敏挡,激发波长设定为290nm,发射波长设定为330nm,仪器预热稳
定后,记录基线30min,根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的响应信号
值,按公式 (7)计算基线噪声,用检测器自身的物理量 (FU)做单位表示;基线漂移
用30min内基线偏离起始点最大响应信号值 (FU/30min)表示。
c)最小检测浓度
在6.2.2.5中b)的色谱条件下,待基线稳定后由进样系统注入 (10~20)μL的
1.00×10-7g/mL (或1×10-8g/mL)的萘-甲醇溶液,记录色谱图,按公式 (8)计算
最小检测浓度。
d)线性范围
将检测器和数据处理系统连接好,检测器的激发波长设定为290nm,发射波长设定
为330nm,仪器稳定后,向检测池中注入100%甲醇,冲洗检测池,至示值稳定后,记下
此值。然后按此法依次向池中注入1×10-5g/mL,2×10-5g/mL,3×10-5g/mL,,
1×10-4g/mL的萘-甲醇溶液,记下每种溶液对应的响应信号值,重复测量3次,取平
均值。以5个萘-甲醇溶液浓度 (1×10-5~5×10-5)g/mL和对应的响应信号值作标
准曲线,在曲线上找出萘-甲醇浓度大于5×10-5g/mL各点读数,与相应各浓度点的测
量值做比较,两值相差5%时的萘-甲醇溶液浓度为检测上限CH,6.2.2.5中c)得到的
最小检测浓度CL 为检测下限,CH/CL 比值为线性范围。
注:荧光检测器性能的检定过程中使用的1×10-5g/mL、1×10-6g/mL和1×10-8g/mL的萘-
甲醇溶液可用1.0×10-4g/mL的萘-甲醇溶液标准物质稀释而得。
6.2.2.6 示差折光率检测器性能
a)基线漂移和基线噪声
选用C18色谱柱,将仪器各部分连接好,以甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,
参比池充满流动相,灵敏度选择在最灵敏挡,接通电源,待仪器稳定后记录基线
30min,根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的响应信号值,按公式 (7)
计算基线噪声,用检测器自身的物理量 (RIU)表示;基线漂移用30min内基线偏离
起始点最大响应信号值 (RIU/30min)表示。(实验中应特别注意,室温的波动不要超
过2℃)。
b)最小检测浓度
在6.2.2.6中a)的色谱条件下,待基线稳定后由进样系统注入 (10~20)μL的
5.0μg/mL的甲醇中胆固醇溶液标准物质,记录色谱图,按公式 (8)计算最小检测浓
度CL。
c)线性范围
将检测器与数据处理系统连接好,用甲醇反复冲洗样品池与参比池,并充满参比池,仪
器稳定后记下响应信号值。依次向样品池中注入1×10-4g/mL,2×10-4g/mL,,10×
10-4g/mL甲醇中胆固醇溶液,记下上述各浓度溶液对应的响应信号值,重复测量
3次,取平均值。以5个甲醇中胆固醇溶液浓度 (1×10-4~5×10-4)g/mL和对应的
响应信号值作标准曲线,在曲线上找出甲醇中胆固醇溶液浓度大于5×10-4g/mL各点
对应的读数,与相应各浓度点的测量值做比较,两值相差5%时的甲醇中胆固醇溶液浓
度为检测上限CH,6.2.2.6中b)得到最小检测浓度为检测下限CL,CH/CL 之比值为
线性范围。
6.2.2.7 蒸发光散射检测器性能
a)基线漂移和基线噪声
选用C18色谱柱,将仪器各部分连接好,以甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,
漂移管温度70℃ (低温型35℃),雾化气体流速为 (2.5~3.0)L/min或适当的气体
压力 (280~350)kPa,灵敏度选择在适当的挡位,接通电源,待仪器稳定后记录基线
30min,根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的响应信号值,按公式 (7)
计算基线噪声,用检测器自身的物理量 (mV)表示;基线漂移用30min内基线偏离起
始点最大响应信号值 (mV/30min)表示。
b)最小检测浓度
在6.2.2.7中a)的色谱条件下,待基线稳定后由进样系统注入 (10~20)μL的
5.0μg/mL (5.0×10-6g/mL)的甲醇中胆固醇溶液标准物质,记录色谱图,按公式
(8)计算最小检测浓度CL。
6.2.2.8 整机性能 (定性、定量重复性)
将仪器各部分联接好,选用C18色谱柱,用100%甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,根
据仪器配置的检测器,选择测量参数:紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器波长设定为
254nm,灵敏度选择适中,基线稳定后由进样系统注入一定体积的1.0×10-4g/mL萘-
甲醇溶液标准物质;荧光检测器激发波长和发射波长分别设定为290nm和330nm,灵
敏度选在中间挡,基线稳定后注入一定体积的1×10-5g/mL萘-甲醇标准溶液;示差折
光率检测器和蒸发光散射检测器灵敏度选在中间挡,注入一定体积的200μg/mL
(2.0×10-4g/mL)的甲醇中胆固醇溶液标准物质。连续测量6次,记录色谱峰的保留
时间和峰面积,按公式 (9)计算相对标准偏差RSD6。
RSD6定性(定量)=
X ∑
i=1
(Xi-X)2/(n-1)×100% (9)
式中:
RSD6定性(定量)---定性 (定量)测量重复性相对标准偏差;
Xi---第i次测得的保留时间或峰面积;
X---6次测量结果的算术平均值;
i---测量序号;
n---测量次数。
6.3 检定结果
6.3.1 按本规程条款检定,全部检定项目 (详见第4章)均达到规定技术要求的仪器
为合格仪器,发给检定证书。
6.3.2 只配一个检测器的仪器,任何一个检定项目不合格,该仪器为不合格仪器,发
给检定结果通知书,注明不合格项。
6.3.3 配一个以上检测器的仪器,只要其中一个检测器的检定项目和除检测器外其他
检定项目合格,可发给配该检测器的仪器检定证书。同时注明其他不合格的检测器,限
制使用。
6.4 检定周期
仪器的检定周期一般不超过2年,更换重要部件或对仪器性能有影响时,应重新
检定。
附录A
色谱柱性能测试
A.1 液相色谱柱
A.1.1 柱效
反相色谱柱的理论塔板数一般在 (3×104~4×104)m-1范围内,正相色谱柱的理
论塔板数在 (4×104~5×104)m-1范围内。
A.1.2 色谱峰对称性:被测峰 (蒽)的不对称因子AS一般在0.8~1.6范围内。
A.2 色谱柱性能测试方法
A.2.1 测试条件和标准溶液
色谱柱性能测试条件和液相色谱仪的检定条件基本相同。反相色谱柱测试用的标准
溶液为1×10-4g/mL尿嘧啶、1×10-5g/mL联苯和蒽 (萘)的甲醇溶液,正相色谱
柱测试用的标准溶液为1×10-2mL/mL甲苯和1×10-4mL/mL硝基苯的正己烷溶液。
A.2.2 柱效的测试方法
将被测试的色谱柱接到检定合格的液相色谱仪器上,反相柱用甲醇+水 (85%+
15%)为流动相,流速为1mm/s(内径为4.6mm色谱柱,流量为1.0mL/min),紫
外检测器波长为254nm,灵敏度选择适中。按说明书操作,开启仪器稳定后,从进样
口注入10μL反相色谱柱测试标准溶液,记录色谱图 (如图A.1),由公式 (A.1)计
算色谱柱效,重复测量3次,取平均值。
n=5.54×
tR
W h
×1000/L (A.1)
式中:
n---理论塔板数;
tR---色谱峰的保留时间,min(时间测量需精确到0.02min);
W h2---色谱峰半高峰宽,min;
L---色谱柱长,mm 。
正相色谱柱的柱效测试条件和方法与反相色谱柱基本相同,只是流动相为正己烷+
异丙醇 (99.5%+0.5%),注入正相色谱柱测试标准溶液。
A.2.3 色谱峰对称性的计算
在A.2.2测得的色谱图中,按公式 (A.2)计算色谱峰的不对称因子AS。
AS=b/a (A.2)
式中:
a,b分别为通过
10h
峰高处、平行于峰底的直线被峰两侧及峰高截取的两线段的
长度 (见图A.1)。
图 A.1 标准色谱图
附录B
单色器滤光片的性能测试
B.1 带通型滤光片的波长示值误差
用紫外-可见分光光度计测量被检仪器的滤光片在各波长处的透射比,绘制透射比-
波长特性曲线 (见图B.1)。由曲线求出最大透射比Tmax对应的波长λmax,则滤光片峰
值波长误差:
Δλ=λ-λmax (B.1)
式中:
λ---滤光片峰值波长标称值。
图B.1 带通型滤光片透射比-波长特性曲线
B.2 截止型滤光片波长示值误差
截止型滤光片的透射光特性用半高波长表示。测量方法同B.1,由图B.2所示曲线
求出最大透射比Tmax,Tmax/2所对应的波长λ3为半高波长。
图B.2 截止型滤光片透射比-波长特性曲线
附录C
不同温度下流动相密度
C.1 水的密度
不同温度下纯水的密度见表C.1。
表C.1 不同温度下纯水的密度表 单位为g/cm3
t/℃ 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
注:该纯水的密度表采用国际温标 (ITS-90)的纯水密度表。
C.2 纯甲醇的密度
不同温度下纯甲醇的密度按式 (C.1)计算得出:
ρt=ρ20-k(t-20) (C.1)
式中:
ρ20---20℃时纯甲醇的密度,0.791g/cm3;
ρt---t温度条件下纯甲醇密度,g/cm3;
t---测定流速时温度,℃;
k---温度校正系数,0.00093g/cm3·℃-1。
附录D
检定证书 (内页)格式
检 定 结 果
1.外观检查
2.输液系统
泵流量设定值/(mL/min):
实测值/(mL/min):
设定值误差SS/(%):
重复性SR/(%):
泵梯度误差Gi/(%):
3.柱温箱
柱箱温度设定值误差ΔTS:
柱箱温度稳定性TC:
4.检测器性能 (以紫外-可见光检测器为例)
基线噪声/(AU):
基线漂移/(AU/h):
波长示值误差/(nm):
波长重复性/(nm):
最小检测浓度/(g/mL萘-甲醇):
线性范围:
5.整机性能
定性重复性RSD6/(%):
定量重复性RSD6/(%):
以下空白
附录E
液相色谱仪检定记录格式
液相色谱仪检定记录
送检单位 室温 ℃
联系人及电话 相对湿度 %
仪器型号 检定员
制造厂名 核验员
出厂编号 记录编号
检定日期 证书编号
E.1 仪器外观:
E.2 泵耐压、泵流量设定值误差 (SS)和泵流量稳定性误差 (SR):
......
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