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| 标准编号 | NY/T 1331-2007 (NY/T1331-2007) | | 中文名称 | 乳与乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜热需氧芽孢数的测定 | | 英文名称 | Enumeration of Colony of Psychrotrophic Microorganisms, Total Aerobic Bacterial Spores and Thermophilic Aerobic Bacterial Spores in Milk and Dairy Products | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | X16 | | 国际标准分类 | 67.100.10 | | 字数估计 | 14,129 | | 发布日期 | 2007-04-17 | | 实施日期 | 2007-07-01 | | 引用标准 | GB/T 4789.1; GB/T 4789.28-2003 | | 采用标准 | ISO 6730-1992, NEQ; NEN 6809-1999, NEQ; NEN 6813-1999, NEQ | | 标准依据 | 农业部公告第846号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部 | | 范围 | 本部分规定了乳中嗜冷菌数的测定方法。本部分适用于生鲜乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌数的测定。 | NY/T 1331-2007: 乳与乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜热需氧芽孢数的测定
NY/T 1331-2007 英文名称: Enumeration of Colony of Psychrotrophic Microorganisms, Total Aerobic Bacterial Spores and Thermophilic Aerobic Bacterial Spores in Milk and Dairy Products
中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准
NY/T 1331—2007
乳与乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及
嗜热需氧芽孢数的测定
中华人民共和国农业部发布
1 范围
本部分规定了乳中嗜冷菌数的测定方法。
本部分适用于生鲜乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌数的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T 4789.1 食品卫生微生物学检验 总则
GB/T 4789.28—2003 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。
4 原理
检样在MPC琼脂内，于6.5℃条件下培养10d,菌落计数，算出每毫升检样中的嗜冷菌数。
5 稀释液和培养基
5.1 蛋白胨-盐溶液
5.1.1 成分
酶水解酪蛋白胨 1.0g
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000 mL
5.1.2 制法
将酶水解酪蛋白胨和氯化钠溶解于蒸馏水中，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH 至7.0± 0.1。
分装试管和烧瓶，每管9mL、每瓶90mL 或225mL, 相对误差不超过±2%。密封后，121℃±1℃高压灭菌15 min。
5 .2磷酸盐缓冲液：按GB/T4789.28—2003 中3.22规定进行制备。
5.3 MPC 琼脂培养基
5.3.2 制法
将5.3.1中除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH 至7.0± 0.1。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。必要时使用两层纱布之间夹脱脂棉过滤，分装烧瓶。密封后， 121℃±1℃高压灭菌15min。若立即使用此培养基，在水浴(6.3)中将其冷却到45℃;否则，将灭菌后 的培养基放于暗处温度为0℃~5℃之间贮存，时间不超过30d。为了避免延误倾注培养基的时间，微生物检测之前，加热融化培养基。然后，于水浴(6.3)中冷却到45℃。
6 设备和材料
6.1 微生物实验室常用设备和材料。
6.2 生化培养箱：6.5℃±0.5℃。
6.3 水浴锅：45℃±1℃。
6.4 无菌培养皿：直径90 mm。
6.5 无菌吸管。
7 取样
样品的采取按GB/T 4789.1执行。
8 检测程序
嗜冷菌数检测程序见图1。
9 操作步骤
9.1 检样处理
9.1.1 快速翻转待检样品容器25次，使样品混合均匀，避免形成泡沫。然后，以无菌操作打开样品包 装容器。
9.1.2 用无菌吸管(6.5)吸取1mL 检样于含有9mL 无菌稀释液(5.1或5.2)的试管中(或10mL 检 样于含有90mL无菌稀释液的烧瓶中，或25mL 检样于含有225mL 无菌稀释液的烧瓶中),经充分振 摇获得10-1均匀稀释液。
9.1.3 另用一支1mL 无菌吸管吸取10-1稀释液1mL, 加入到含有9mL 无菌稀释液的试管中，振摇试管，混合均匀，获得10-²稀释液。按上述操作方法，做10倍递增稀释。如此每递增稀释一次，即换用一支1mL 无菌吸管。
9.2 接种及培养
9.2.1 根据对样品中嗜冷菌污染情况的估计，选择三个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的 同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL该稀释液于无菌培养皿(6.4)内，每个稀释度接种两个培 养皿。
9.2.2 检查培养基(5.3)的温度不要超过46℃。然后，立即倾注12mL～15mL培养基到每个培养皿中。
9.2.3 小心地转动培养皿使接种样液和培养基混合均匀，水平放置使混合物凝固。从第一步稀释液的制备到接种样液和培养基混合所用的时间不得超过15 min。
9.2.4 接种的同时，用1mL 稀释液作空白试验。
9.2.5 待琼脂凝固后，堆叠培养皿，倒置在培养箱(6.2)中，于6.5℃±0.5℃培养10d。 培养皿堆叠不超过6个。
9.3 菌落计数
9.3.1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，极微小的菌落也应计数在内，需要时用放大镜检查。
9.3.2 蔓延的菌落被认为是单一菌落。如果被蔓延菌落所覆盖的部分不到平板面积的1/4,计数未受影响的平板部分的菌落并计算出整个平板的相对量；如果被蔓延菌落所覆盖的部分超过了平板面积的 1/4,不应计数。
10 结果计算
10.1 保留含有10个～300个菌落的培养皿。 用公式(1)计算每毫升样品中的嗜冷菌数：
10.3 如果所有稀释度培养皿中的菌落数均多于300个，从最接近300个菌落的培养皿中计算出一个 估计值乘以相应最高稀释度的倒数。结果报告为“每毫升样品中嗜冷菌数的估计值”。
11 重复性
在重复性条件下两次独立测试结果的绝对差值，不大于较低结果的30%,以大于较低结果30%的 情况不超过5%为前提。
第二部分：需氧芽孢总数测定
1 范围
本部分规定了乳与乳制品中需氧芽孢总数的测定方法。
本部分适用于生鲜乳及其制品中需氧芽孢总数的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T 4789.1 食品卫生微生物学检验 总则
GB/T 4789.28—2003食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。
4 原理
取一定量的液体检样或检样的初级稀释液，将其在80℃下加热10min, 在 MPC琼脂内，于36℃条件下培养48h, 菌落计数，算出每毫升(克)检样中的需氧芽孢总数。
5 稀释液和培养基
5.1 蛋白胨-盐溶液
5.1.1 成分
酶水解酪蛋白胨 1.0g
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000 mL
5.1.2 制法
将酶水解酪蛋白胨和氯化钠溶解于蒸馏水中，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH 至7.0± 0.1。分装试管和烧瓶，每管9mL、每瓶90mL 或225mL, 相对误差不超过±2%。密封后，121℃±1℃ 高压灭菌15 min。
5.2 磷酸盐缓冲液：按GB/T 4789.28—2003中3.22规定进行制备。
5.3 MPC 琼脂培养基
5.3.1 成分
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
葡萄糖 1.0g
脱脂奶粉 1.0g
琼脂 10 g～15g
蒸馏水 1000 mL
注1:脱脂奶粉不应含有抗生素类物质。
注2:琼脂用量根据其凝固程度决定。
5.3.2 制法
将5.3.1中除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH 至7.0士 0.1。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂融化。必要时使用两层纱布之间夹脱脂棉过滤，分装烧瓶。密封后， 121℃±1℃高压灭菌15 min。若立即使用此培养基，在水浴(6.3)中将其冷却到45℃。否则，将灭菌后的培养基放于暗处温度为0℃~5℃之间贮存，时间不超过30d。为了避免延误倾注培养基的时间，微生物检测之前，加热融化培养基。然后......
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