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| 标准编号 | NY/T 680-2003 (NY/T680-2003) | | 中文名称 | 禽白血病病毒p27抗原. 酶联免疫吸附试验方法 | | 英文名称 | Enzyme-linked immunosorbent assay for avian leukosis virus p27 antigen | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 6,658 | | 发布日期 | 2003-07-30 | | 实施日期 | 2003-10-01 | | 范围 | 本标准规定了禽白血病病毒(ALV)p27抗原酶联免疫吸附试验方法。 本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ALVp27蛋白抗原。 | NY/T 680-2003
Enzyme-linked immunosorbent assay for avian leukosis virus p27 antigen
ICS １１．２２０
B４１
中华人民共和国农业行业标准
NY／T６８０-２００３
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 方 法
２００３-０７-３０发布
２００３-１０-０１实施
中华人民共和国农业部 发 布
前言
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。
本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。
本标准主要起草人：陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬。
NY／T６８０-２００３
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 方 法
１ 范围
本标准规定了禽白血病病毒（ＡＬＶ）ｐ２７抗原酶联免疫吸附试验方法。
本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ＡＬＶｐ２７蛋白抗原。
２．１ 试验材料
２．１．１ 试剂
２．１．１．１ 抗ｐ２７蛋白抗体：应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒ｐ２７蛋白免疫家兔制备。
２．１．１．２ 阳性抗原：含鸡白血病／肉瘤病毒群特异性ｐ２７蛋白抗原的鸡蛋清。
２．１．１．３ 阴性抗原：无鸡白血病／肉瘤病毒群特异性ｐ２７蛋白抗原的ＳＰＦ鸡蛋清。
２．１．１．４ 酶结合物：辣根过氧化物酶标记的抗ｐ２７蛋白抗体。
２．１．１．５ 磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）：配制见第Ａ．１章。
２．１．１．６ 包被液：配制见第Ａ．２章。
２．１．１．７ 洗涤液：配制见第Ａ．３章。
２．１．１．８ 样品稀释液：配制见第Ａ．４章。
２．１．１．９ 底物溶液：配制见第Ａ．６章。
２．１．１．１０ 终止液：配制见第Ａ．７章。
２．１．２ 器材
ａ） 酶联检测仪；
ｂ） 聚苯乙烯板；
ｃ） 微量加样器，容量５０μＬ～２００μＬ；
ｄ） ３７℃恒温培养箱。
２．１．３ 样品
２．１．３．１ 鸡蛋样品：将待检鸡蛋小的一端朝上放置，打碎蛋壳，用移液器无菌吸取蛋清，密装于灭菌小
瓶内。
２．１．３．２ 细胞培养物：用移液器无菌吸取细胞培养物，密装于灭菌小瓶内，４℃或-３０℃保存或立即送
检。试验前将送检样品统一编号，试验时不做稀释。
２．２ 操作方法
２．２．１ 用包被液将抗ｐ２７蛋白抗体作４０００倍稀释，每孔１００μＬ加入９６孔聚苯乙烯板中，４℃过夜。
２．２．２ 取出包被好的聚苯乙烯板，将液体倒弃，每孔加２５０μＬ洗涤液漂洗三次，每次２ｍｉｎ，甩干。
２．２．３ 每孔加１５０μＬ质量浓度为１％的明胶封闭液，３７℃反应６０ｍｉｎ。
２．２．４ 重复２．２．２。
２．２．５ 在Ａ１、Ａ２ 孔各加１００μＬ标准阴性对照，Ａ３、Ａ４ 孔各加１００μＬ标准阳性对照。
２．２．６ 将待检样品加入其他各孔，每个待检样本加两孔，每孔１００μＬ，３......
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