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SN/T 2051-2008	英文版	150	SN/T 2051-2008	3分钟内自动发货[PDF]	食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法	SN/T 2051-2008	有效

基本信息
标准编号	SN/T 2051-2008 (SN/T2051-2008)
中文名称	食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法
英文名称	Determination of bovine, ovine, porcine-derived materials in food, cosmetic and feed-Real-time PCR method
行业	商检行业标准 (推荐)
中标分类	X04
字数估计	17,197
发布日期	2008-04-29
实施日期	2008-11-01
引用标准	GB/T 6682; GB 19489
标准依据	行业标准备案公告2008年第7号;国认科[2012]57号
发布机构	海关总署
范围	本标准规定了食品、化妆品和饲料中牛、羊(绵羊和山羊)、猪源性成分实时PCR检测方法。本标准适用于食品、化妆品和饲料中牛、羊(绵羊和山羊)、猪源性成分的鉴别检测。

SN/T 2051-2008: 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法 SN/T 2051-2008 英文名称: Determination of bovine, ovine, porcine-derived materials in food, cosmetic and feed-Real-time PCR method 书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN／T２０５１-２００８食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法　实时PCR法中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准的附录Ｆ为规范性附录，附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ、附录Ｄ、附录Ｅ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、宝生物工程（大连）有限公司、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：曹际娟、李晶泉、郑秋月、于爱丽、陈颖、姚珊、谢琰。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法　实时PCR法１　范围本标准规定了食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分实时ＰＣＲ检测方法。本标准适用于食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分的鉴别检测。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法（GB/T ６６８２-１９９２，neq ISO ３６９６：１９８７） GB １９４８９　实验室　生物安全通用要求３　术语和定义、缩略语下列术语和定义、缩略语适用于本标准。４　原理本标准采用ＴａｑＭａｎ实时荧光ＰＣＲ技术，根据线粒体ＤＮＡ（ＣＯＸⅠ）基因上动物种间多态性的差异而进行动物源性种类鉴定。本标准应用多色荧光检测技术，采用多重ＰＣＲ方法。牛、羊、猪源性成分单体系检测时，对反应液中含有的两种不同荧光染料进行双通道同步检测，在同一反应管内对牛或羊或猪的ＣＯＸⅠ基因及内参照反应同时进行扩增，并通过标记两种不同荧光物质（ＦＡＭ、ＨＥＸ）的特异性探针进行特异性杂交，两色荧光同步检测；牛羊源性成分混合体系检测时，对反应液中含有的三种不同荧光染料进行三通道同步检测，在同一反应管内分别对牛、羊特异的ＣＯＸ Ⅰ基因及内参照（ＩｎｔｅｒｎａｌＣｏｎｔｒｏｌ）同时进行扩增，并通过标记三种不同荧光物质（ＦＡＭ、ＨＥＸ、ＲＯＸ）的特异性探针进行特异性杂交，多色荧光同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。５　材料与试剂５．１　设备和材料５．１．１　实时荧光ＰＣＲ检测系统。５．１．２　高速台式冷冻离心机（最高转速１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。５．１．３　台式离心机（最高转速２０００ｒ／ｍｉｎ）。５．１．４　振荡器。５．１．５　冰箱（２℃～８℃和-２０℃或-８０℃）。５．１．６　微量可调移液器及配套吸头（１０μＬ、１００μＬ、１０００μＬ）。５．１．７　实时荧光ＰＣＲ反应管。５．１．８　离心管。５．１．９　水浴槽。５．１．１０　加热器。５．１．１１　可移动紫外灯。５．１．１２　磁力架。５．２　试剂除特别说明以外，所用试剂均为分析纯，水为按照 GB/T ６６８２规定的一级水。所有试剂均用无ＤＮＡ酶污染的容器分装。５．２．１　基因组ＤＮＡ提取试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参见附录Ａ。５．２．２　牛源性成分实时荧光ＰＣＲ检测试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参见附录Ｂ。５．２．３　羊源性成分实时荧光ＰＣＲ检测试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参见附录Ｃ。５．２．４　猪源性成分实时荧光ＰＣＲ检测试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参见附录Ｄ。５．２．５　牛羊源性成分实时荧光ＰＣＲ检测试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参见附录Ｅ。６　抽样６．１　采样工具下列采样工具应经１８０℃±２℃，２ｈ高温灭菌：剪刀、镊子、扦子。６．２　样品采集待检样品装入一次性塑料袋或其他灭菌容器，编号，送实验室。６．３　样品储运样品采集后，将采集的样品放入密闭的塑料袋内（一个采样点的样品放入一个塑料袋），于保温箱中加冰、密封，送实验室。７　操作方法７．１　实验室的设备和管理实验室的设备与管理见附录Ｆ。７．２　样品模板DNA的制备７．２．１　在样本制备区进行。组成、功能及使用注意事项参见附录Ａ。７．２．２　固态食品和饲料中基因组ＤＮＡ的提取试剂盒参见附录Ａ中的第Ａ．１章固态食品和饲料中基因组ＤＮＡ提取试剂盒处理样品。７．２．３　液态食品和化妆品中基因组ＤＮＡ的提取试剂盒参见附录Ａ中的第Ａ．２章液态食品和化妆品中基因组ＤＮＡ提取试剂盒处理样品。模板ＤＮＡ溶液放于冰上保存备用。若长期保存须存放于 -２０℃或-８０℃冰箱。７．３　检测７．３．１　扩增试剂准备在反应混合物配制区进行。为确保检测结果的准确性，在进行实际样品检测时，应设立空白对照、阴性对照和阳性对照实验。实时荧光ＰＣＲ反应体系见表１。从牛、羊、猪、牛羊源性成分实时荧光ＰＣＲ检测试剂盒（分别参见附录Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）中取出相应的实时荧光ＰＣＲ反应用试剂，融化后，２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｓ。向每个实时荧光ＰＣＲ反应管中各分装２４μＬ反应混合液（除模板ＤＮＡ外），转移至上样区。７．３．２　加样在上样区进行。在各设定的实时荧光ＰＣＲ反应管中分别加入制备的模板ＤＮＡ溶液，盖紧管，离心５ｓ～１０ｓ。７．３．３　实时荧光PCR检测在检测区进行。将本标准７．３．２中离心后的实时荧光ＰＣＲ反应管放入实时荧光ＰＣＲ检测系统内，记录样本摆放顺序。循环条件设置：９５℃／１０ｓ，１个循环；９５℃／５ｓ，６０℃／２０ｓ（２４ｓ、３０ｓ、３１ｓ、３４ｓ）２），４０个循环，在每次循环的退火时收集荧光。检测结束后，根据扩增曲线和Ｃｔ值判定结果。８　结果判定８．１　结果分析条件设定直接读取检测结果。阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整。８．２　质控标准８．２．１　牛、羊、猪源性成分单体系检测阴性对照：有ＨＥＸ荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ｃｔ值应小于２８．０，而无ＦＡＭ荧光信号检出。８．２．２　牛、羊源性成分混合体系检测阴性对照：有ＨＥＸ荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ｃｔ值应小于２８．０，而无ＦＡＭ和ＲＯＸ荧光信号检出。８．２．３　牛、羊、猪源性成分单体系检测阳性对照：有ＦＡＭ和ＨＥＸ荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ｃｔ值应小于２８．０。８．２．４　牛、羊源性成分混合体系检测阳性对照：有ＦＡＭ、ＲＯＸ和ＨＥＸ荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ｃｔ值应小于２８．０。８．３　结果判定与表述８．３．１　有效原则Ｃｔ值小于等于３５视为有效值，Ｃｔ值大于３５视为无效值。８．３．２　结果的判定８．３．２．１　当使用附录Ｂ、Ｃ、Ｄ对牛、羊、猪源性成分单体系检测时，实验结果的判定情况说明见表２。８．３．２．２　当使用附录Ｅ对牛、羊源性成分混合体系检测时，实验结果的判定情况说明见表３。２）　使用Ａｐｐｌ......

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