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| 标准编号 | SN/T 2398-2010 (SN/T2398-2010) | | 中文名称 | 苹果丛生植原体检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Identification of candidatus phytoplasma mali | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 07.080 | | 字数估计 | 10,148 | | 发布日期 | 2010-01-10 | | 实施日期 | 2010-07-16 | | 采用标准 | EPPO PM7/62(1), NEQ | | 标准依据 | National Quality Inspection [2010] No. 13 | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了苹果丛生植原体的检疫和鉴定方法。本标准适用于进出境苹果苗木及接穗中苹果丛生植原体的检疫和鉴定。 | SN/T 2398-2010
Identification of candidatus phytoplasma mali
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T２３９８-２０１０
苹果丛生植原体检疫鉴定方法
２０１０-０１-１０发布
２０１０-０７-１６实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准部分采用ＥＰＰＯ植物检疫标准（ＰＭ７／６２（１）），主要技术差异如下：
---删除ＥＬＩＳＡ检测方法；
---删除指示植物鉴定方法；
---添加电子显微镜观察方法。
本标准的附录Ｂ、附录Ｃ、附录Ｄ为规范性附录，附录Ａ为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院。
本标准参加起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国新疆出入境检验检
疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：黄新、牟海青、邓从良、杨旭光、张祥林、王有福、朱水芳。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T２３９８-２０１０
苹果丛生植原体检疫鉴定方法
１ 范围
本标准规定了苹果丛生植原体的检疫和鉴定方法。
本标准适用于进出境苹果苗木及接穗中苹果丛生植原体的检疫和鉴定。
２ 原理
２．１ 分类地位
门，柔膜菌纲，不需固醇菌原体目，不需固醇菌原体科，植原体属，１６ＳｒＸ植原体组。
２．２ 检测方法
其生物学特性和基因序列等分子生物学信息是该检疫鉴定方法的依据。
ＤＡＰＩ荧光染色方法操作简便、成本低，在本标准中作为一种初步筛选植原体的方法；ＰＣＲ技术灵
敏度高、特异性好，ＲＦＬＰ技术目前是国际上植原体鉴定分类的主要方法，在本标准中ＰＣＲ技术与
ＲＦＬＰ技术结合作为鉴定苹果丛生植原体的准确方法。
３ 器材和试剂
ＰＣＲ仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机，台式小型离心机、超低温
冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统。
ＤＡＰＩ、ＰＣＲ缓冲液、氯化镁、ｄＮＴＰ、T犪狇ＤＮＡ聚合酶、引物等。
４ 检测鉴定方法
４．１ 症状观察
仔细观察苹果种苗、果实、叶片等，症状描述参见附录Ａ。
４．２ DAPI染色
选取幼嫩组织（新叶叶梗，枝梢，茎杆及根部韧皮部组织），切片，用１μｇ／ｍＬＤＡＰＩ溶液（４’，６-二脒
基-２-苯基吲哚）染色，在４６０ｎｍ激发条件，荧光显微镜观察，在韧皮部筛管部位有明显的蓝色荧光信号
表明有植原体存在。因植株内植原体分布不均，故每个样品需选取不同部位的幼嫩材料进行检测。
４．３ 通用引物PCR凝胶电泳及RFLP检测
通用引物ＰＣＲ凝胶电泳及ＲＦＬＰ检测见附录Ｂ。
４．４ 特异性引物PCR凝胶电泳检测
特异性引物ＰＣＲ凝胶电泳检测见附录Ｃ。
４．５ 植原体形态观察
对采集的植物样品制备超薄切片，通过电镜观察植原体形态方法见附录Ｄ。
５ 结果判定
５．１ 表现症状与Ａ．１．１描述一致且ＤＡＰＩ染色观察结果显示蓝色荧光，可初步判定为苹果丛生植原
体，但需通过５．２、５．３、５．４中任意方案进一步检测。
５......
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