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| 标准编号 | SN/T 2462-2010 (SN/T2462-2010) | | 中文名称 | 棉花曲叶病毒检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Identification of cotton leaf curl Begomovirus | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 07.080 | | 字数估计 | 8,814 | | 发布日期 | 2010-01-10 | | 实施日期 | 2010-07-16 | | 标准依据 | 国质检认(2010)13号 | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Begomovirus, 简称CLCuV)的检疫鉴定方法。本标准适用于可能带有棉花曲叶病毒的活体寄主植物的检疫鉴定。 | SN/T 2462-2010
Identification of cotton leaf curl Begomovirus
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T２４６２-２０１０
棉花曲叶病毒检疫鉴定方法
２０１０-０１-１０发布
２０１０-０７-１６实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准的附录Ａ为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、浙江大学、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人：张祥林、周雪平、朱水芳、王罛、吴卫、余永杰。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T２４６２-２０１０
棉花曲叶病毒检疫鉴定方法
１ 范围
本标准规定了棉花曲叶病毒（ＣｏｔｔｏｎｌｅａｆｃｕｒｌＢｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ，简称ＣＬＣｕＶ）的检疫鉴定方法。
本标准适用于可能带有棉花曲叶病毒的活体寄主植物的检疫鉴定。
２ 原理
棉花曲叶病毒的分类地位属于双生病毒科（Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｉｄａｅ）、菜豆金色花叶病毒属（Ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ）。
该病毒的生物学特性、血清学特性和分子生物学特征是制定本标准的主要依据（参见附录Ａ）。
３ 仪器设备和用具
３．１ 仪器设备
电子天平（感量１／１０００ｇ）、超净工作台、高速冷冻离心机、小型低速离心机、ｐＨ计、恒温水浴锅、微
量榨汁机、超低温冰箱、高压灭菌器、酶标仪、ＰＣＲ仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪等。
３．２ 用具
研钵、培养皿、可调式微量移液器（２μＬ、１０μＬ、２０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）及相应的移液器
头、９６孔酶联反应板、离心管（１．５ｍＬ、１０ｍＬ）、ＰＣＲ管（０．２ｍＬ）、量筒、烧杯、镊子。
４ 试剂、缓冲液及溶液
４．１ １０×PBST缓冲液
氯化钾（ＫＣｌ）２ｇ、氯化钠（ＮａＣｌ）８０ｇ、磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）２ｇ、磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）
１１．５ｇ、吐温２０（Ｔｗｅｅｎ-２０）５ｍＬ，用浓盐酸（ＨＣｌ）调节ｐＨ至７．４，加蒸馏水定容至１０００ｍＬ，４℃条件
下贮存。
４．２ 样品提取缓冲液
亚硫酸钠（Ｎａ２ＳＯ３）１．３ｇ、聚乙烯基吡咯烷酮（ＭＷ２４０００～４００００，ＰＶＰ）２０ｇ、叠氮钠（ＮａＮ３）
０．２ｇ、吐温２０（Ｔｗｅｅｎ-２０）２０ｍＬ溶解于８００ｍＬ１×ＰＢＳＴ中，用盐酸调节ｐＨ至７．４，加１×ＰＢＳＴ定
容至１０００ｍＬ，４℃条件下贮存。
４．３ 包被缓冲液
碳酸钠（Ｎａ２ＣＯ３）１．５９ｇ、碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）２．９３ｇ、叠氮钠（ＮａＮ３）０．２ｇ，用浓盐酸（ＨＣｌ）调节
ｐＨ至９．６，加蒸馏水定容至１０００ｍＬ，４℃条件下贮存。
４．４ 洗涤缓冲液
将１×ＰＢＳＴ缓冲液用浓盐酸（ＨＣｌ）调节ｐＨ至７．４，４℃条件下贮存。
４．５ 酶标抗体缓冲液
１×ＰＢＳＴ缓冲液８００ｍＬ、小牛血清白蛋白（ＢＳＡ）２ｇ、聚乙烯基吡咯烷酮２０ｇ、叠氮钠（ＮａＮ３）
０．２ｇ，用无菌蒸馏水定容至１０００ｍＬ，４℃条件下贮存。
４．６ 底物（PNPP）缓冲液
二乙醇胺９７ｍＬ、叠氮钠（ＮａＮ３）０．２ｇ，用浓盐酸（ＨＣｌ）调节ｐＨ 至９．８，用无菌蒸馏水定容至
１０......
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