搜索结果: SN/T 3327-2012, SN/T3327-2012, SNT 3327-2012, SNT3327-2012
| 标准编号 | SN/T 3327-2012 (SN/T3327-2012) | | 中文名称 | 猪瘟病毒逆转录环介导等温核酸扩增检测方法 | | 英文名称 | Quarantine protocal for classic swine fever virus by loop-mediated isothermal amplification | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 字数估计 | 8,864 | | 引用标准 | GB/T 18088; GB 19489-2008 | | 标准依据 | 国质检认(2012)777号;行业标准备案公告2013年第4号(总第160号) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了猪瘟病毒逆转录环介导等温核酸扩增检测的操作方法。本标准适用于猪瘟病毒的快速筛查。 | SN/T 3327-2012
Quarantine protocal for classic swine fever virus by loop-mediated isothermal amplification
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
猪瘟病毒逆转录环介导等温
核酸扩增检测方法
2012-12-12发布
2013-07-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:李健、熊炜、张强、蒋静、邱璐、王巧全、黄忠荣、胡永强。
猪瘟病毒逆转录环介导等温
核酸扩增检测方法
1 范围
本标准规定了猪瘟病毒逆转录环介导等温核酸扩增检测的操作方法。
本标准适用于猪瘟病毒的快速筛查。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 18088 出入境动物检疫采样
GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
3 概述
性、热性、高度接触性传染病,对猪养殖业危害极为严重。CSFV基因型为单股正链RNA,基因组长约
123kb,仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)。本标准利用环介导等温核酸扩增技术在恒温条件下
快速、高效、特异地扩增位于猪瘟病毒5’端非编码区(5’-UTR)的靶序列,从而达到快速检测的目的。
4 试剂和材料
4.1 BstDNA聚合酶(大片段):酶浓度为8U/μL,-20℃保存,避免反复冻融。
4.2 10倍ThermoPol聚合酶浓缩缓冲液:-20℃保存。
4.3 硫酸镁溶液(MgSO4):浓度为25mmol/L,-20℃保存。
4.4 AMV逆转录酶:逆转录酶浓度为5U/μL,-20℃保存,避免反复冻融。
4.5 甜菜碱溶液(Betaine):浓度为5mol/L,-20℃保存,避免反复冻融。
4.6 dNTPs:含dATP、dGTP、dCTP、dTTP各10mmol/L,-20℃保存。
4.7 LAMP引物:引物配成浓度25μmol/L,-20℃保存备用。其序列如下:
---正向外引物(CSFV-F3):5’-AGC-TCC-CTG-GGT-GGT-CTA-3’;
---反向外引物(CSFV-B3):5’-CCT-AAT-AGT-GGG-CCT-CTG-CA-3’;
---正向内引物(CSFV-FIP):5’-GCC-CTC-GTC-CAC-ATA-GCA-TCT-CAG-TAC-AGG-ACA-
GTC-GTC-AGT-3’;
---反向内引物(CSFV-BIP):5’-GCC-CAA-GAC-ACA-CCT-TAA-CCC-TTC-AGG-TCG-TAC-
TCC-CAT-CAC-3’;
---正向环引物(CSFV-LF):5’-GGG-CTT-CTG-CTC-......
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