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| 标准编号 | SN/T 3577-2013 (SN/T3577-2013) | | 中文名称 | 转基因成分检测 棉花PCR-DHPLC检测方法 | | 英文名称 | Detection of genetically modified components. Method for cotton using PCR-DHPLC | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B32 | | 国际标准分类 | 65.020 | | 字数估计 | 8,862 | | 引用标准 | GB/T 19495.7; GB/T 6682; SN/T 1193 | | 标准依据 | 质检总局关于发布2013年第一批179项出入境检验检疫行业标准的通知 ;行业标准备案公告2013年第9号(总第165号) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了进出境棉花中转基因成分和品系的PCR-DHPLC 检测方法。本标准中检测方法适用于转基因棉花品系MON531、MON1445、MON1698、MON15985中的转基因成分和品系的检测。 | SN/T 3577-2013
Detection of genetically modified components.Method for cotton using PCR-DHPLC
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
转基因成分检测
棉花PCR-DHPLC检测方法
2013-03-01发布
2013-09-16实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中国检验
检疫科学研究院、深圳博睿祥晖生物技术有限公司、国家纳米科学中心。
本标准主要起草人:章桂明、朱水芳、向才玉、程颖慧、凌杏园、汪朝晖、朱劲松、黄新、欧阳辉、王颖、
仲建忠。
转基因成分检测
棉花PCR-DHPLC检测方法
1 范围
本标准规定了进出境棉花中转基因成分和品系的PCR-DHPLC检测方法。
本标准中检测方法适用于转基因棉花品系 MON531、MON1445、MON1698、MON15985中的转基
因成分和品系的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法
SN/T 1193 基因检验实验室技术要求
3 原理
单、快速、非凝胶的核酸分析方法,在50℃条件下分析样品,碱基对的数量决定样品峰的洗脱顺序,当过
柱的乙腈浓度提高,核酸片段会根据相对分子质量从小到大的顺序被洗脱出来。本标准采用多重PCR
方法针对转基因棉花含有的转基因成分同时进行扩增,扩增产物用DHPLC进行分析。通过DHPLC
得到的洗脱峰与marker比较确定相对分子质量大小,判定是否带有外源基因成分及确定转基因棉花
品系。
4 设备、用具及试剂
4.1 设备及用具
组织粉碎机、PCR仪、DHPLC仪、水浴锅、电子天平(精度:1/1000以上)、普通离心机、低温冷冻高
速离心机、冰箱、低温冰箱、制冰机、恒温干燥箱、pH计、移液器(0.1μL,0.5μL,2μL,10μL,20μL,
100μL,200μL,1000μL)、紫外可见分光光度计、纯水机、高压消毒锅、PCR管(0.2mL)、离心管(1.5mL,
2.0mL)、Tip头(0.1μL~10μL,5μL~200μL,100μL~500μL)。
4.2 试剂
CTAB提取液、Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、70%乙醇、RNA酶(10mg/mL)、多重PCR
反应液缓冲液(MultiplexPCRMix)、TaqDNA聚合酶,DHPLC缓冲液A:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙
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