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| 标准编号 | SN/T 4684-2016 (SN/T4684-2016) | | 中文名称 | 进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法 | | 英文名称 | Determination of Burkholderia cepacia in cosmetics for import and export | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | Y42 | | 字数估计 | 14,176 | | 发布日期 | 2016-12-12 | | 实施日期 | 2017-07-01 | | 标准依据 | 国质检认(2016)590号;行业标准备案公告2017年第8号(总第212号) | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 4684-2016: 进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法
SN/T 4684-2016 英文名称: Determination of Burkholderia cepacia in cosmetics for import and export
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌
检验方法
中华人民共和国国家
质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局
发 布
前言
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布
机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准主要起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、完美(中国)有限公司。
本标准主要起草人：赵晗、崔淑华、孙军、郝莹、田国宁、吴兴海、高业成、贾俊涛、段效辉、李建军。
1 范围
本标准规定了进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌的检测方法。
本标准适用于进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌的定性检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 7918.1 化妆品微生物标准检验方法 总则
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。
3.1 恒温培养箱：30℃±1℃、32℃±1℃、36℃±1℃。
3.2 均质器。
3.3 振荡器。
3.4 光学显微镜。
3.5 天平：感量0.1 g。
3.6 无菌移液管：1 mL,10mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。
3.7 无菌培养皿：直径90 mm (或其他商业用一次性无菌平皿)。
3.8 接种环：3 mm 直径。
3.9 均质袋或均质瓶。
3.10 全自动微生物生化鉴定系统。
4 培养基和试剂
4.1 含多粘菌素 B 的 SCDLP 增菌液：见 A.1。
4.2 含庆大霉素的 BCSA 增菌液：见 A.2。
4.3 含多粘菌素 B、庆大霉素的 BCSA 琼脂：见 A.3。
4.4 含多粘菌素 B、庆大霉素的麦康凯琼脂(不含结晶紫):见 A.4。
4.5 革兰氏染液：见 A.5。
4.6 氧化酶试验试剂：见 A.6。
4.7 葡萄糖氧化/发酵管：见 A.7。
4.8 蔗糖氧化培养基：见 A.8。
4.9 西蒙氏枸橼酸盐培养基：见 A.9。
4.10 七叶苷培养基：见 A.10。
4.11 生化鉴定试剂盒。
5 检验程序
洋葱伯克霍尔德菌检验程序见图1。
6 操作步骤
6.1 增菌培养
按照 GB 7918.1 方法制备1:10化妆品稀释液，取稀释液10 mL 加到90 mL 含多粘菌素 B 的SCDLP 增菌液中，于36℃±1℃培养24 h,移 取 1 mL, 转种于10 mL 含庆大霉素的 BCSA 增菌液内，于36℃±1℃培养18 h～24 h。
6.2 分离培养
分别用接种环取 BCSA 增菌液一环，划线接种于 BCSA 琼脂(含多粘菌素 B、庆大霉素)平板和麦康凯琼脂(含多粘菌素 B、庆大霉素)平板，于32℃±1℃培养48 h,观察各个平板上生长的菌落。典型菌 落在BCSA 琼脂平板上为红色圆形菌落，表面光滑，周围培养基变红；典型菌落在麦康凯琼脂平板上为
浅黄褐色圆形菌落，表面光滑，周围培养基不变色。
6.3 鉴定
6.3.1 初筛
自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落，同一菌株接种于2支葡萄糖氧化/发酵 管，其中一支加灭菌液体石蜡封口，另一支不封口，于36℃±1℃培养24 h,二者均变黄为葡萄糖发酵 型，未加石蜡管变黄而加石蜡管不变色为葡萄糖氧化型。同时在营养琼脂平板上划线纯化，于36 ℃±1℃培养24 h。 选择葡萄糖氧化型(加石蜡管不变黄，不加石蜡管变黄)的纯培养物继续进行鉴定。
6.3.2 革兰氏染色
挑取可疑菌落涂片，进行革兰氏染色。显微镜下观察，洋葱伯克霍尔德菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌。
6.3.3 氧化酶试验
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。洋葱伯克
霍尔德菌为迟缓型氧化酶阳性(紫红色、紫色或深蓝色),反应时间约为2 min～10 min。
注：实验中切勿使用镍/铬材料。
6.3.4 过氧化氢酶试验
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液(临用时
配制)2 mL, 观察气泡产生情况。洋葱伯克霍尔德菌为迟缓产气，1 s 后缓慢出现气泡。
6.3.5 蔗糖氧化
挑取可疑菌落接种于蔗糖氧化培养基，36℃±1℃培养24 h,培养基变黄色为阳性，蓝色为阴性。洋葱伯克霍尔德菌为阳性反应。
6.3.6 枸椽酸盐利用
挑取可疑菌落接种于西蒙氏枸橼酸盐培养基，36℃±1℃培养24h,培养基变蓝色为阳性，浅绿色为阴性。洋葱伯克霍尔德菌为阳性反应。
6.3.7 七叶苷利用
挑取可疑菌落接种于七叶苷培养基，30℃±1℃培养2......
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