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| 标准编号 | SN/T 5142-2019 (SN/T5142-2019) | | 中文名称 | 进出口动物源性食品中粘菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | Determination of colistin residue in foodstuffs of animal origin for import and export -- LC-MS/MS method | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 12,186 | | 发布日期 | 2019-10-25 | | 实施日期 | 2020-05-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第166号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5142-2019: 进出口动物源性食品中粘菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
SN/T 5142-2019 英文名称: Determination of colistin residue in foodstuffs of animal origin for import and export -- LC-MS/MS method
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
进出口动物源性食品中粘菌素残留量的
测定 液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国海关总署发布
前言
本标准按照 GB 1.1 2009 给出的规 编写
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口
本标准起草单位 ：中华人民共和国石家庄海关
本标准主要起草人：侯 凤池、赵雁冰、阙 宝东 、刘晓茂、艾连峰、徐文科
1范围
本标准规定了动物源性食品中粘菌素A和粘菌素B残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于进出口鸡肉、鸡肝、猪肾、扇贝、鸡蛋、牛奶等动物源性食品中粘菌素残量的测定。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。
3方法提要
用三氯乙酸-乙腈溶液提取试样中残留的粘菌素，提取液经WCX固相萃取柱净化，液相色谱-串联 质谱(ESI+)检测，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇;色谱纯。
4.2 乙腈：色谱纯。
4.3 甲酸：色谱纯。
4.4 乙酸：色谱纯。
4.5 氨水。
4.6 三氯乙酸。
4.7 10%(W/V)三氯乙酸溶液：取10.00 g三氯乙酸(4.6),用水溶解，定容至100 mL。
4.8 10%三氯乙酸溶液-乙睛(3 + 7,V/V)：取30 mL 10%三氯乙酸溶液(4.7)和70 mL乙腈(4.2),混匀，现用现配。
4.9 甲酸-甲醇(1 + 4,V/V)：取20 mL甲酸(4.3),加入80 mL甲醇(4.1),混匀。
4.10甲酸溶液(0.2 + 99.8,V/V)：取 0.2 mL 甲酸(4.3),加入 99.8 mL水,混匀。
4.11标准物质：粘菌素，CAS No.1264-72-8,纯度为78.3%,标准品信息见附录A表A.1。
4.12标准贮备溶液：1.0 mg/mL0根据纯度进行折算后称取适量的粘菌素标准物质(4.11),用甲酸溶 液(4.10)溶解并配制成1.0 mg/mL的标准贮备液。0笆〜4 °C冷藏避光保存。
4.13粘菌素中间标准工作溶液:100 Mg/mLo吸取适量粘菌素标准贮备溶液(4.12),用甲酸溶液 (4.10)稀释成100 Mg/mL的标准工作溶液，0 °C〜4 °C冷藏避光保存。
4.14基质标准工作溶液：吸取适量粘菌素中间标准溶液(4.13),用相应基质的空白样品提取液配成合 适浓度的基质标准工作溶液，使用前配制。
4.15固相萃取小柱：Oasis WCX柱，60 mg,3 mL,或相当者。使用前依次用3 mL甲醇和3 mL水预 处理，保持柱体湿润。
4.16微孔滤膜：0.22〃m,有机相型。
5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)O
5.2分析天平:感量分别为0.01 mg和0.01 go
5.3涡旋混匀器。
5.4 离心机:转速不低于5 000 r/mino
5.5均质器：转速不低于10 000 r/mino
5.6固相萃取装置。
5.7真空泵：真空度大于80 kPa。
5.8组织捣碎机。
5.9氮吹仪。
5.10聚丙烯离心管：100 mL,具塞。
5.11试管：10 mL,玻璃。
5.12振荡器。
6试样的制备与保存
6.1通则
在样品制备和保存的操作过程中，应防止样品污染或发生待测物含量的变化。
6.2动物组织、内脏
取有代表性样品约0.5 kg,用组织捣碎机充分捣碎混匀分成两份，装入洁净容器作为试样，密封，标 明标记。将试样置于一18隹冷冻保存。
6.3 蛋
取有代表性样品约0.5 kg,去壳后用组织捣碎机充分绞碎混匀分成两份，装入洁净容器作为试样, 密封，标明标记。将试样置于0 °C〜4 °C冷藏保存。
6.4牛奶
取适量新鲜或冷藏的样品约500 mL,充分混匀分成两份，装入洁净容器作为试样，密封，标明标记。 将试样置于0 °C〜4 °C冷藏保存。
7测定步骤
7.1提取
7.1.1动物组织、内脏
称取试样2 g(精确到0.01 g),置于100 mL聚丙烯离心管(5.10)中，加入10 mL 10%三氯乙酸水 溶液-乙If (4.8),10 000 r/min均质2 min后，5 000 r/min离心5 mino转移上清液至另一离心管中，残
渣中加入10 mL10%三氯乙酸水溶液-乙睛（4.8）,重复以上提取操作。合并2次提取上清液，用氨水调 pH = 9,5 000 r/min离心5 min,上清液待净化。
7.1.2蛋和牛奶
称取试样2 g（精确到0.01 g）,置于100 mL聚丙烯离心管（5.10）中，加入10 mL 10%三氯乙酸水 溶液-乙腊（4.8）,用振荡器振摇提取20 min后，5 000 r/min离心5 mmo转移上清液至另一离心管中， 余下操作同7.1.1。
7.2净化
将测定步骤7.1所得待净化液，以小于2 mL/min的流速通过WCX固相萃取柱（4.15）,待样液全 部通过后,依次用5 mL水、3 mL甲醇洗涤固相萃取柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽 至近干。固相萃取柱用5 mL甲酸-甲醇（4.9）洗脱至10 mL试管（5.11）中，在45 °C下氮气吹至约 1.0 mL,用水定容至2.0 mL,涡旋混匀，过0.22卩m膜（4.16）,供液相色谱-串联质谱仪测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱:Atlantis® dC18,3.0 um,150 mmX2.1 mm（内径）或相当者；
b）柱温：35 °C；
c）进样量：5ul
d）流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。
7.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）离子源:电喷雾离子源（ESI）；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式:多反应监测（MRM）；
其他参考质谱条件参见附录B中表B.1。
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1 定性确证
每种被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混 合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在士 2.5%之内；且样品谱图中各组分的定性离子对的 相对离子丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子对的相对离子丰度进行比 较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。
7.3.3.2定量测定
由于粘菌素为粘菌素A和粘菌素B的混合物，采用粘菌素A和粘菌素B的峰面积加和进行定量 分析。
外标法定量:在仪器最佳工作条件下，对粘菌素的基质校准标准溶液分别进样测定，以系列基质校 准标准溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定 量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。
粘菌素A和粘菌素B的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。
7.4平行试验
按以上步......
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