搜索结果: WS 321-2010, WS321-2010
| 标准编号 | WS 321-2010 (WS321-2010) | | 中文名称 | 广州管圆线虫病诊断标准 | | 英文名称 | Diagostic criteria for angiostrongyliasis cantonensis | | 行业 | 卫生行业标准 | | 中标分类 | C61 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 16,127 | | 发布日期 | 2010-06-02 | | 实施日期 | 2010-12-01 | | 标准依据 | Health-Communication (2010) 15; Industry Standard Filing Announcement 2010 No.7 (Total No.127) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | WS 321-2010: 广州管圆线虫病诊断标准
WS 321-2010 英文名称: Diagostic criteria for angiostrongyliasis cantonensis
ICs 11。020
C61
备案号 :⒛OG1-201o
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
Ws 321- 2ˉ01o
广州管圆线虫病诊断标准
1 范围
本标准规定了广州管圆线虫病的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。
本标准适用于各级医疗机构和疾病预防控制机构对广州管圆线虫病的诊断。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1广州管圆线虫病
由广州管圆线虫幼虫寄生于人体内所引起的一种以嗜酸粒细胞增多性脑膜脑炎为主要临床表现的寄生虫病。
3 诊断依据
3.1 流行病学史
近期(通常为 1个月内)有生食或半生食广州管圆线虫的中间宿主(如福寿螺、褐云玛瑙螺、蛞蝓等
软体动物)或者转续宿主(如 淡水虾、蟹、鱼、蛙等)史 (参见附录 A),或有广州管圆线虫的中间宿主、转续宿主接触史。
3.2 临床表现
3.2.1 起病较急 ,以 疼痛特别是剧烈头痛等为突出表现 ,可有神经根痛、痛觉过敏等症状 ,可伴有发热、
恶心、呕吐等。
3.2.2 临床检查时可有颈部抵抗 ,甚至颈项强直等脑膜刺激征。
3.3 实验室检查
检查项目和方法详见附录 B。
3.3.1 血常规检查
嗜酸粒细胞的百分比和(或)绝对值增高。
3.3.2 脑脊液检查
可有脑脊液压力增高、嗜酸粒细胞增多。
3.3.3 免疫学检查
血清或脑脊液中广州管圆线虫抗体或循环抗原阳性。
3.3.4 病原学检查
在脑脊液或眼等部位查见广州管圆线虫幼虫。
4 诊断原则
根据流行病学史、临床表现及实验室检查结果等予以诊断。
5 诊断
5.1 疑似病例
同时符合 3.1和 3.2.1或 同时
附 录 A
(资料性附录 )
生活史与流行病学
A。 1 生活史
广州管圆线虫的终宿主主要为鼠类。成虫寄生于鼠肺动脉或右心室中,雎虫产出虫卵 ,在肺毛细血
管孵化出第一期幼虫。第一期幼虫穿过肺毛细血管随呼吸道分泌物上行吞咽进人消化道 ,进 而随粪便
排出体外。当中间宿主如福寿螺、褐云玛瑙螺、蛞蝓等软体动物食人或接触含有第一期幼虫的粪便时 ,
第一期幼虫可进人其体内进一步生长发育。幼虫在软体动物体内蜕皮或生长发育速度与环境温度关系
密切。感染后约 l周,第一期幼虫在中间宿主组织内蜕皮 ,发育为第二期幼虫 ,1周后再经 1次蜕皮 ,发
育为第三期幼虫即感染期幼虫。淡水鱼、虾、蟹、蛙 .蛇、蜥蜴等因捕食中间宿主而长期存储第三期幼虫 ,
是该虫的转续宿主。鼠类因吞食含有第三期幼虫的中间宿主或转续宿主而感染。在鼠体内,第三期幼
虫经消化道进人血液循环 ,在 中枢神经系统进一步发育为第四期幼虫和第五期幼虫 ,再移至鼠肺动脉发育为成虫。
A。 2 流行病学
广州管圆线虫病主要流行于热带和亚热带地区,波及亚洲、非洲、美洲、大洋洲的 30多个国家和地
区 ,其 中东南亚、太平洋岛屿、加勒比海区域流行较重 ,截至 zO08年累计报告病例 2800多 例。到
zO08年底 ,我国已有 9个省 (自 治区、直辖市)报告了广州管圆线虫病例 ,共计报告病例 380多例 ,其中
近 90%病例发生于群体感染。我国广州管圆线虫病自然疫源地主要分布于浙江省、福建省、江西省、湖
南省、广东省、广西壮族自治区、海南省以及台湾地区 ,即这些地区的野外现场中已发现有感染不同虫期
广州管圆线虫的中间宿主、转续宿主和终宿主。由于淡水螺类等产品流通便利 ,病例的发生不仅仅局限
于自然疫源地所在地区。
广州管圆线虫主要寄生于鼠类 ,以 褐家鼠和黑家鼠较普遍。此外 ,在我国已发现黄胸鼠、黄毛鼠、青
毛鼠、社鼠、大足鼠、板齿鼠、小家鼠、海南鼹鼠以及食虫类动物朐睛等有 自然感染。鼠类 自然感染率在
地域上变化较大 ,文献报道 ,在温州市调查 2069只 鼠类 ,平均感染率为 15.3%,其 中褐家鼠感染率为
⒛。4%;在福州市检测 1965只野鼠,平均感染率为 13.7%,其中褐家鼠感染率为 22.4%;在厦门市检
测 957只 鼠类 ,平均感染率为 6.7%,其 中褐家鼠感染率为 12。 4%;在广州市检测 10034只 褐家鼠,平
均感染率为 1.6%。 自然环境中鼠类的感染度变化较大 ,最少仅感染 1条/只 ,最多有 91条/只 。
广州管圆线虫对中间宿主选择性不强 ,至少有 70余种软体动物可在 自然界或实验室条件下感染。
在我国 ,已 知 20多种水生和陆生螺类以及其他软体动物可以自然感染广州管圆线虫。由于不同软体动
物与鼠类或其粪便接触机会不同,因 此 ,自 然感染率差别很大。zO06~2007年全国广州管圆线虫病 自
然疫源地调查发现 ,福寿螺、褐云玛瑙螺和蛞蝓是主要中间宿主 ,平均感染率分别为 6.8%、 13。 4%和
6.5%。 部分地区上述三种软体动物的自然感染率分别可高达 66.9%、82.35%和 46.3%。 自然环境中
软体动物的感染度变化很大 ,有 些仅感染几条幼虫 ,而有些可高达数万条 ,如福寿蜾感染度可高达
8754条幼虫/只 ,褐云玛瑙螺感染度可高达 18500条幼虫/只 ,蛞瑜感染度可高达 5650条幼虫/只 。
由于转续宿主的调查和检测较为困难 ,因 此 ,转续宿主自然感染率很难评估。我国曾有报道 ,在黑
眶蟾蜍、泽蛙、金线蛙体内发现自然感染的广州管圆线虫。
人类多因生食或半生食含有广州管圆线虫第三期幼虫的中间宿主或转续宿主而感染 ;也有通过接
触中间宿主分泌的含有广州管田线虫三期幼虫的黏液而感染。第三期幼虫在人体内移行经过中枢神经
系统可发育为笫四期幼虫和笫五期幼虫。由于人不是广州管田线虫正常宿主,幼虫通常不能下行至肺
动脉发育为成虫 ,因此 ,长期移行于神经系统 ,并诱发以嗜酸拉细胞增多性脑膜脑炎为主要临床表现的
广州管田线虫病。但在有些患者(主要是儿童)的肺部病理切片中能够发现广州管圆线虫的发育期成
(即虫体已经具备成虫的生殖结构 ,但尚未发育到性成熟),提示在患儿体内有发育为成虫的倾向。
附 录 B
(规范性附录)
实验室检查
B。 1 血常规检查
按常规进行 ,计数 白细胞总数并分类 ,计数嗜酸粒细胞百分 比值和绝对值。如果采用 自动检测项
目,嗜酸粒细胞的百分比值和 (或)绝对值超过正常值范围或怀疑患广州管圆线虫病时 ,建议同时采用血
膜涂片镜检的方法计数和分类 ,以 核实结果。
B。 2 脑脊液检查
按常规行腰椎穿刺术。穿刺获脑脊液再行常规检查和细胞学检查。
B。 2.1 脑脊液穿刺方法
以髂后上棘连线与后正中线交会处为穿刺点 (相 当于第 3~4腰椎棘突间隙 ,或者在上一或下一腰
椎间隙进行 )。 局部常规消毒及麻醉后 ,戴无菌橡皮手套、铺洞巾,术者左手食拇二指固定穿刺点皮肤 ,
右手持 7号或 9号穿刺针 (小儿视具体情况而定 ,穿刺部位更低 ,穿刺针更细)以垂直背部方向缓慢刺
人 ,针尖稍斜向头部、针体偏向臀部 ,成人进针深度约 4cm~6cm,儿童约 2cm~4cm,当针头穿过韧带
与硬脑膜时 ,阻力消失获落空感 ,缓慢拔出针芯 ,见脑脊液流出 ,放液前连接测压管测定脑脊液压力 ,撤
去测压管后 ,用无菌试管收集脑脊液 2mL~5mL送检。术毕 ,放 回针芯拔出穿刺针。穿刺点稍加压止
血 ,敷 以消毒纱布并用胶布固定。术后平卧 4h~6h。若初压超过 2.94kPa(300mmH20)时则不宜放
液 ,仅取测压管内的脑脊液即可。
B。 2.2 检查内容
B。 2.2.1 压力检查 侧卧位观察患者脑脊液流经测压管时的脑脊液压力。
B。 2.2.2 常规检查 检查脑脊液混浊度、白细胞计数、蛋白含量、葡萄糖含量以及氯化物含量。
B。 2.2.3 细胞学检查 用瑞特-吉姆萨染色法 (Wright⒍emsa Staining)染片 ,镜检嗜酸粒细胞数量及比例 :
B。 2.3 结果判定
B。 2.3.1 压力检查 侧卧位成人正常值为 0.78kPa~1.76kPa(80mmH2O~180mmH20),儿童为
o。39kPa~0.98kPa(40mmH20~100mmH20),新生丿L为 0。 098kPa~0.1在kPa(10mmH20~14mmH2O)。
B。 2.3.2 常规检查 外观呈混浊或乳 白色 ,白 细胞计数增多。蛋 白增高 ,葡萄糖可轻度降低 ,氯化物
多在正常范围或轻度增高。
B。 2.3.3 细胞学检查 镜检可见大量嗜酸粒细胞 ,分类计数超过 10%。
B。 2.4 注意事项
穿刺用针头宜粗不宜细 ,一般用 7号或 9号穿刺针。脑脊液离心后应立即进行检查。
B。 3 免疫学检查
B。 3.1 双抗体夹心酶联免疫吸附试验
采用广州管圆线虫成虫粗抗原多克隆抗体 ,运用双抗体夹心晦联免疫吸附试验法检测广州管圆线
虫病患者血清循环抗原。
B。 3.1.1 抗原制备 从人工感染 sD大鼠心脏、肺脏分离广州管圆线虫成虫 ,生 理盐水漂洗后冰冻干
燥 ,加人蛋白酶抑制剂 ,研磨成粉 ,冷丙酮脱脂 3次 ,超声粉碎 (冰浴 ,3min/次,共 5次),反 复冻融 ,
4℃ ,30000r/min离心 2min。取出上清液 ,用 Lowry法测定蛋白质含量 ,- ⒛ ℃保存备用。
B。 3.1.2 多克隆抗体制各 取粗抗原溶解于生理盐水中,配置浓度为 2ug/mL,加人等体积的福氏完
全佐剂 ,皮下免疫 BALB/c雌性小鼠,每只 0.5mL,2周后加强免疫一次 ,免疫方式为粗抗原加福氏不
完全佐剂 ,皮下免疫。末次免疫 1个月后 ,断尾取血 ,用粗抗原检测制各抗体的效价 ,一zO℃保存备用。
B。 3.1.3 检测方法 :
D 用 pH9.6碳酸盐缓冲液(PBS)将纯化单抗稀释成 10ug/mL。每孔 100uL,4℃包被 12h。
b) 弃除液体 ,用 0.05%吐温 20屮BS洗涤 3次 ,每孔加人封闭液(5%小牛血清)100uL,37℃孵育
1h,0。05%吐温 zO屮Bs洗涤 3次。
o 每孔加人 100uL待测血清,37℃孵育 45min,0。05%吐温 zO-PBs洗涤 5次。
Φ 每孔加人 100uL酶标单抗(1:1600),37℃ 孵育 45min,0。05%吐温 20-PBs洗涤 5次。
e) 每孔加人 100uL底物 ,37℃避光显色 20min。每孔加人 100uL2mol/LH2sO^终止显色 ,酶标仪读数。
B。 3.1.4 结果判定 以阴性对照血清 OD值均值加 3个标准差为正常值上限 ,大于此值为阳性。
B。 3.2 酶联免疫吸附试验
采用广州管圆线虫第四期幼虫可溶性抗原检测患者血清或脑脊液中特异性抗体。
B。 3.2.1 广州管圆线虫第四期幼虫粗抗原制备 :
o 用人工消化法从福寿螺或褐云玛瑙螺体内分离广州管圆线虫第三期幼虫 :将螺体组织剪碎后
加人人工消化液(盐酸 7mL,胃蛋白酶 2g,生理盐水 993mL),置37℃恒温箱内,消 化 3h~
4h。消化沉淀物用铜筛过滤 ,滤液沉淀水洗 2次 ,弃除上清液。沉淀物置于显微镜下观察 ,用
毛细吸管吸取广州管圆线虫第三期幼虫 ,放置于含生理盐水的玻璃皿中。
b) 将第三期幼虫腹腔接种 sD大鼠,10d后解剖大鼠。从其脑组织中分离出广州管圆线虫第四期幼虫。
c) 用无菌生理盐水冲洗活虫体 3~4次,根据虫体压积加人约 10倍量的 0。 01%硫柳汞生理盐水 ,
匀浆器研磨 ,交替冻融 6次。6d后用 300mA超声处理 4次 ,每次 5min,然后经 10000r/min
(4℃ )离心 30min。取上清液即为可溶性抗原液 ,测蛋白含量 ,贮存于-zO℃冰箱各用。
B。 3.2.2 检测方法 :
o 以pH9.6碳酸盐缓冲液(PBS)稀释上述制备抗原 ,包被 96孔 PVC(聚苯乙烯)酶标板 ,每孔
50uL,孵育 2h后置于 4℃湿盒内过夜。
b) 甩去孔内抗原溶液 ,PBS-T(PBs-0.5%吐温)洗涤 3次 ,晾干 ,每孔加封闭液(5%小牛血清)
200uL,37℃封闭孵育 2h。 加人用 PBs按1:zO0稀释的待测血清 50uL,37℃孵育 1h。
⊙ PBs-T洗涤 3次后每孔加人 1:100稀释的酶结合物E辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人
IgG彐50uL,37℃孵育 1h,洗涤 3次 ,晾干。
d) 每孔加人 TMB溶液E用 3,3’ ,5,5’ -四 甲基联苯胺 (TMB)配 制 ,临 用时按每 10mL底物液加
3%H202o.1mL]5o uL,37℃15min,加人 1mol/L的H2so4终止反应。
B。 3.2.3 结果判定 在酶标仪上以 450/620nm双波长读取 oD值,P/N)2。 0为 阳性(P表示待测样
本oD值,N表示阴性对照平均oD值)。
B。 3.3 间接荧光抗体试验
采用广州管圆线虫第三期幼虫可溶性抗原检测广州管圆线虫病患者血清抗体。
B。 3.3.1 广州管圆线虫幼虫抗原制备 用人工消化法从福寿螺或褐云玛瑙螺体内分离广州管圆线虫
第三期幼虫 ,冰冻包埋 ,切成 4um厚切片 , 胶处理的玻片备用。
B。 4 病原学检查
可通过脑脊液、眼部检查以及尸体解剖等方法查见广州管圆线虫幼虫或发育期成虫。
B。 4.1 脑脊液内虫体检查 脑脊液离心沉淀后 ,立 即吸取沉渣滴于载玻片上 ,盖上盖玻片 ,在显微镜下
检查有无幼虫。发现虫体时,应进-步鉴定。广州管圆线虫在疑似病例脑脊液中的检出率约为 10%。
B。 4.2 眼部虫体检查 有条件者 ,可请眼科医生借助裂隙灯和检眼镜进行眼部检查 ,发现虫体时可用
手术方法取出后送检。
B。 4.3 尸体解剖 通过尸体解剖可发现患者脑组织中的广州管圆线虫虫体断面 ,或在心、肺动脉检查
中可以发现广州管圆线虫发育期成虫。
附 录 C
(资 料性附录)
鉴 别 诊 断
C。 1 脑寄生虫病
能侵犯中枢神经系统的寄生虫较多 ,其 中比较常见的有链状带绦虫的囊尾蚴、并殖吸虫的童虫、血
吸虫的虫卵、曼氏迭宫绦虫的裂头蚴、颚口线虫的第三期幼虫、细粒棘球绦虫的棘球蚴与多房棘球绦虫
的泡球蚴等。它们均能侵人人体脑组织 ,引起中枢神经系统病变和嗜酸粒细胞增多 ,临床表现与广州管
圆线虫病相似 ,同 时这些病原通常难以检出,因此 ,应注意鉴别。鉴别要点包括流行病学史、典型临床表
现、脑脊液和外周血嗜酸粒细胞增高程度、病灶影像学特征、免疫学检查结果等。
C。 1.1 脑连尾坳病
脑囊尾蚴病又称脑囊虫病 ,是 由链状带绦虫囊尾蚴侵人神经系统而引起的寄生虫病。脑娈尾蚴病
占囊尾蚴病住院病例的近 91%,是 主要的临床类型。我国 30个省(自 治区、直辖市)有病例报告 ,云南、
河北和黑龙江等省患病率较高。人主要因食人链状带绦虫的虫卵而感染 ,也可为带绦虫感染者自身感
染。脑囊尾蚴病因感染度和损伤部位的不同而临床表现各异 ,主要临床症状为癫痫、颅内高压、脑膜脑
炎、精神障碍等 ,其 中癫痫发生率最高 ,达 80%以 上 ;颅 内高压其次 ,在 42%~51%之间。有些患者同时
具备多种临床表现。感染链状带绦虫者 ,有 15%~zO%可罹患脑褒尾坳病。
鉴别要点如下 :
o 患者有绦虫病史或喜生食习惯 ;
b) 脑脊液中以淋巴细胞为主 ;
⊙ 头颅 CT或磁共振(MRI)有典型的瑷尾蚴图像或信号改变 (如单发或多发圆形或椭圆形密度
减低或增高区;有 的娈内还可见到囊尾坳头节影);
o 手术摘除皮下等浅表部位结节 ,经活检证实为驻尾坳 ;
e) 褒尾坳抗体检测为阳性。
C。 1.2 脑型并殖吸......
|