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| 标准编号 | WS/T 351-2011 (WS/T351-2011) | | 中文名称 | 碱性磷酸酶(ALP)催化活性浓度测定参考方法 | | 英文名称 | Reference procedure for the measurement of catalytical activity concentration of alkaline phosphatase (ALP) | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 27,259 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-01 | | 引用标准 | ISO 15193-2009 | | 采用标准 | JCTLM《IFCC 37℃酶催化活性浓度测定原级参考方法 第9部分:碱性磷酸酶催化浓度测定参考方法》, MOD | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了在临床医学应用中, 测定碱性磷酸酶(ALP)催化活性浓度的参考方法。本标准主要适用于参考实验室, 作为碱性磷酸酶催化活性浓度测定的溯源, 也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源, 可供有关认可单位及质量管理部门应用。 | WS/T 351-2011: 碱性磷酸酶(ALP)催化活性浓度测定参考方法
WS/T 351-2011 英文名称: Reference procedure for the measurement of catalytical activity concentration of alkaline phosphatase (ALP)
ICs 11.020
C 50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
Ws/T 351--2011
碱性磷酸酶(ALP)催化活性浓度测定
参考方法
1 范围
本标准规定了在临床医学应用中 ,测定碱性磷酸酶 (ALP)催化活性浓度的参考方法。
本标准主要适用于参考实验窒 ,作为碱性磷酸酶催化活性浓度测定的溯源 ,也可作为与酶催化活性
浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源 ,可供有关认可单位及质量管理部门应用。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注 日期的引用文件 ,仅所注 日期的版本适用于本
文件。凡是不注 日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于本文件。
3 术语和缩略语
3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1原始样本
最初从一个系统中取出的一个或几个部分的集合物 ,旨 在提供该系统的信息或作为对该系统做出决定的基础。
注:在某些情况下,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此 时取样系统是这些系统的组成部分。
3.1.2实验室样本
准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样本或原始样本的分样本。
3.1.3分析样本
自实验室样本制备的、可从中取出分析部分的样本 。
注:在取出分析部分之前 ,分析样本可经过各种处理。
3.1.4分析部分
从分析样本 中取 出的用于实际测定和观察的物质部分 。
注:如果不需预处理 ,分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出。
某些情况下 ,需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。
4 参考方法描述
4.1 测定原理和方法
本法以磷酸对硝基苯酚(4-NPP)为 底物 ,2-氨基-2-甲 基-⒈丙醇 (AMP)为 磷酸酰基的受体物质 ,增
进酶反应速率 ,在 ALP催化下 ,仁NPP分裂出磷酸基团 ,生成游离的对硝基苯酚 (4-NP),后 者在碱性溶
液中转变成醌式结构 ,呈现较深的黄色。
4.2 检查列表
4,2.1 试剂列表
将所用试剂按表 1列 出。
4.2.2 分光光度计和辅助仪器列表
4.3 试剂
4.3.1 试剂原料信息
按表 3填写试剂原料详细信息。
4.3.2 试剂溶液
4.3.2.1 一般要求
制备溶液时各成分给出的质量是指 100%含量。如果化学物质的含量低于 100%E例如 y(%)],则
应用因子 :凡。n止"=100/γ ,计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。
溶液的制备应使用质量与双蒸水类似的高纯度水 (电 导率 (2uS·cm l,pH6~7,硅酸盐(0.1mg·Ll)。
每次称重的扩展 (屁 =2)不确定度 (包括物质纯度的不确定度×正态分布),应≤ 1.5%。
4.3.2.2 溶液 1
称量 0.878g HEDTA、0.367g硫酸锌及 0.547g醋酸镁 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--将 0.878g HEDTA溶于约 70mL水中 ;
--加人硫酸锌 ;
--硫酸锌完全溶解后加人醋酸镁 ;
--醋酸镁溶解后 ,转移至 100mL容量瓶中 ;
--将容量瓶和水平衡至 zO℃;
--加水至容量瓶的校准刻度线 (20℃ )。
最终配制的溶液中 HEDTA浓 度为 25.50mmol·L"、 硫酸锌浓度为 12.75mmol·Ll、醋酸镁
浓度为 25.50mmol·Lˉ 1。 该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 3个月。
4.3.2.3 反应溶液
称量 8.52g2氨基-2-甲 基-⒈丙醇 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶于约 70mL水中 ;
--用 25%盐酸调节 pH值至 37℃ 时 10.3~10.5;
--加入 10mL溶液 1;
--用 2mol·L1盐酸调节 pH值至 37℃ 时为 10.2;
--转移至 100mL容量瓶中 ;
--将容量瓶和水平衡至 ⒛ ℃ ;
--加水至容量瓶的校准刻度线 (20℃ )。
最终配制的溶液中 ⒉氨基-2-甲 基△-丙醇浓度为 956.3mmol·L1。 该溶液 2℃ ~8℃稳定性为3个月。
4.3.2.4 起始试剂溶液
称量 0.757g六水磷酸对硝基苯酚二钠盐 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶于约 15mL水中 ;
--转移至 25mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 ⒛ ℃ ;
--加水至容量瓶的校准刻度线 (20℃ )。
最终配制的溶液中六水磷酸对硝基苯酚二钠盐浓度为 81.6mmol·Ll。 该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 1周 。
4.3.3 温度对缓冲溶液 pH的影响
当温度偏离 37℃时 ,调节 pH值的方法 :将 温度计与 pH电极同时浸人混合液中。然后将溶液边
搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的 pH值。在校准、控制和调节 pH的过程中 ,搅拌速度要一
致。pH电极应位于被搅拌溶液的中心。
必应考虑到在调节 pH的滴定过程 中 ,温度是可能改变的因素。为此 ,接近靶值时应重新控制温
度 ,如 果需要 ,根据附录 B调整 pH靶值 。同样的方法也适用于 pH计的温度补偿调节 。
配制反应液时 ,需根据不同温度调整 pH值。参阅附录 B来调节溶液的 pH......
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