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| 标准编号 | WS/T 493-2017 (WS/T493-2017) | | 中文名称 | 酶学参考实验室参考方法测量不确定度评定指南 | | 英文名称 | Guide to the estimation of the measurement uncertainty of reference methods in enzymology reference laboratiories | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 字数估计 | 42,43 | | 发布日期 | 2017-09-06 | | 实施日期 | 2018-03-01 | | 标准依据 | 国卫通(2017)14号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | WS/T 493-2017: 酶学参考实验室参考方法测量不确定度评定指南
WS/T 493-2017 英文名称: Guide to the estimation of the measurement uncertainty of reference methods in enzymology reference laboratiories
ICS １１．１００C５０
中华人民共和国卫生行业标准
WS／T４９３-２０１７
酶学参考实验室参考方法测量不确定度
评定指南
１ 范围
本标准规定了酶学参考实验室在运行参考方法时测量不确定度的来源、评定测量不确定度步骤及报告方式。
本标准适用于酶学参考实验室评定参考方法测量酶催化活性浓度的测量不确定度，也适用于采用
分光光度原理测量的其他参考方法测量量值的测量不确定度评定，同时可供认可评审员在评审过程中使用。
５ 测量不确定度
５．１ 误差和不确定度
５．１．１ 误差是单个数值，原则上已知误差的数值可以用来修正结果。不确定度是以一个区间的形式表
示，为一个分析过程和所规定样品类型做评估时，可适用于其所描述的所有测量值。对大多数医学实验
室的检测项目而言，测量不确定度大小与测量值高低相关，一般不能用不确定度数值修正测量结果。此
外，误差和不确定度的差别还表现在：修正后的分析结果可能非常接近于被测量的数值，因此误差可以
忽略。不确定度可能很大，因为分析人员对于测量结果的接近程度没有把握。测量结果的不确定度不
可以解释为代表了误差本身或经修正后的残余误差。
注：误差是一个理想的概念，不可能被确切地知道。
５．１．２ 通常认为误差含有两个分量，分别称为随机分量和系统分量，包括以下内容：
---随机误差通常产生于影响量的不可预测的变化。这些随机效应使得被测量的重复观察的结果
产生变化。分析结果的随机误差不可消除，但是通常可以通过增加观察次数加以减少；
注：算术平均值或一系列观察值的平均值的实验标准差是由一些随机效应产生的平均值不确定度的度量，而
不是平均值的随机误差。由这些随机效应产生的平均值的随机误差的准确值是不可知的。
---系统误差定义为在对于同一被测量的大量分析过程中保持不变或以可以预测的方式变化的误
差分量。它是独立于测量次数的，因此不能在相同的测量条件下通过增加分析次数的办法使之减小。包括：
● 恒定的系统误差：例如定量分析中没有考虑到试剂空白，或多点设备校准中的不准确性，
在给定的测量值水平上可能是恒定的，但是也可能随着不同测量值的水平而发生变化；
● 不恒定的系统误差：在一系列分析中，影响因素在量上发生了系统的变化，例如由于试验
条件控制得不充分会产生不恒定的系统误差。
示例１：在进行化学分析时，一组样品的温度在逐渐升高，可能会导致结果的渐变。
示例２：在整个试验的过程中，传感器和探针可能存在老化影响，可能引入不恒定的系统误差。
５．１．３ 误差的另一个形式是假误差或过错误差。这种类型的误差使测量无效，它通常由人为失误或仪
器失效产生。记录数据时数字进位、光谱仪流通池中存在的气泡或试样之间偶然的交叉污染等是这类
误差的常见原因。包括以下内容：
---假误差并不总是很明显。当重复测量的次数足够多时，通常应采用异常值检验的方法检查这
组数据中是否存在可疑的数据。所有异常值检验中的阳性结果都应该小心对待，可能时应向
实验者核实。通常情况下，不能仅根据统计结果就剔除某一数值。
---过错误差的测量不确定度是不可接受的，不可将此类误差计算到测量不确定度中。然而，因数
字进位产生的误差可进行修正，特别是当这种误差发生在首位数字时。
５．１．４ 测量结果的所有已识别的显著的系统影响都应修正。测量仪器和系统通常需要用测量标准或
标准物质进行调节或校准，以修正系统影响。与这些测量标准或标准物质有关的不确定度及修正过程
中存在的不确定度应加以考虑。
５．１．５ 用本文件获得的不确定度并没有考虑出现假误差或过错误差的可能性。
５．２ 不确定度的来源
５．２．１ 通常来源
在实际工作中，结果的不确定度可能有很多来源，例如定义不完整、取样、基体效应和干扰、环境条
件、质量和容量仪器的不确定度、参考值、测量方法和程序中的估计和假定、随机变化等。
５．２．２ 酶学参考实验室不确定度主要来源
５．２．２．１ 测量前阶段
５．２．２．１．１ 抽样和样本准备
酶学参考实验室主要工作是给委托的样本赋值，一般不存在取样问题。但如还接受评定样本间变
异、样本稳定性等工作时，此时内部或外部取样是规定程序的组成部分，例如不同样品间的随机变化以
及取样程序存在的潜在偏差等影响因素构成了影响最终结果的不确定度分量。本文件对此暂不加以讨论。
液体样本，常需深低温（如-７０℃）保存，测量前需加以融冻。应严格控制融冻条件，如规定放置在
１８℃～２０℃水浴。此外在融化后应加以混匀，要严格控制混匀方式、时间和强度等，以控制不确定度来源。
冻干粉末样本测量前需加蒸馏水复溶。应严格控制所加蒸馏水质量，应为实验室一级用水。有可
能时应用称重法控制加水的量并规定复溶后混匀方法。通过这些措施减小样本准备时产生的测量不确定度。
５．２．２．１．２ 存储条件
若测试样品在分析前要储存一段时间，则存储条件可能影响结果。因此，存储时间以及存储条件也
被认为是不确定度来源。
酶学参考实验室应注意某些酶是冷变性而非热变性。如低温保存样本，会加速乳酸脱氢酶变性，从
而产生不确定度。
５．２．２．１．３ 仪器的影响
下列仪器会影响酶催化活性浓度的测量结果，包括：
---分光光度计：主要不确定度来源有波长准确度、半波宽、读数的正确性、噪音和漂移等；
---移液器：最大允许误差（ＭＰＥ）和重复性；
---天平：最大允许误差等。
酶学参考实验室应使用最高级的分析仪器，使用前应检查仪器性能，确保性能在规定的参数内。
可按厂家声称的参数评定不确定度。
５．２．２．１．４ 试剂
配制酶反应试剂时有多种不确定度来源，即使配制试剂的原材料已被检测过，因为检测过程存在着
某些不确定度，如某些情况下不能知道滴定溶液浓度。许多有机指示剂，纯度并不是１００％，可能含有
异构体和无机盐。对于这类物质的纯度，制造商通常只标明不低于规定值。关于纯度水平的假设将会
引进一个不确定度分量。
反应混合液中各种成分浓度变化有可能是测量不确定度的来源：酶促反应速度受各种物质浓度的
影响，有底物、激活剂、抑制剂、缓冲物等。当使用酶偶联反应测量酶活性浓度时，需使用各种工具酶（指
示酶、辅助酶）和相应底物。参考方法已对试剂中各种物质做了最适浓度的研究和规定。在配制试剂
时，只要正确地应用高级天平称量，浓度变化很小，常可忽略不计，不计算它们的标准不确定度。但注
意在称量量很小时，如ＡＬＴ和ＡＳＴ测量试剂中的磷酸吡哆醛、ＣＫ测量试剂中５’ＡＭＰ，最好通过实验
验证这些物质由于称量误差能否引起较大的测量不确定度。
试剂的老化和不同批号配制也会引起测量不确定度，如在每个批次测量前重新配制试剂，则测量结
果包含了配制试剂引起的不确定度并除去了试剂老化的影响。
微量的杂质有可能抑制或激活酶的催化活性，这可能是产生测量不确定度一个很重要的来源。有
必要对配制酶测量试剂的原材料制定更严格的要求，如Ｌ-丙氨酸中Ｄ-丙氨酸含量，双甘肽中甘氨酸含量等。
５．２．２．１．５ 测量原理---假设的化学反应定量关系
当假定分析过程按照特定的化学反应定量关系进行时，可能有必要考虑偏离所预期的化学反应定
量关系，或反应的不完全或副反应。
５．２．２．２ 测量阶段
５．２．２．２．１ 测量时环境条件
容量玻璃仪器一般在与校准温度不同的环境温度下使用。总的温度影响应加以修正，但是液体和
玻璃温度的不确定度应加以考虑。同样，当材料对湿度的可能变化敏感时，湿度也是重要的，此时湿度影响也应加以修正。
５．２．２．２．２ 样品的影响
复杂基体的被分析物的回收率或仪器的响应可能受基体成份的影响。被分析物的物种会使这一影
响变得更复杂。由于改变的热力情况或光分解影响，样品（被分析物）的稳定性在分析过程中可能会发
生变化。当用“加料样品”来估计回收率时，样品中的被分析物的回收率可能与加料样品的回收率不同，
因而引进了需要加以考虑的不确定度。
５．２．２．２．３ 空白修正
空白修正的值和适宜性都会有不确定度，在痕量分析中尤为重要。
５．２．２．２．４ 其他重要不确定度来源
酶催化反应速度受ｐＨ变化影响，一般而言，每个酶都有其最适反应ｐＨ，并随ｐＨ变化反应速度上
升或下降。评定测量不确定度时应考虑此分量。不同酶对ｐＨ反应不一致。在评定测量不确定度时往
往要计算灵敏系数。
配制同一ｐＨ的缓冲液常可使用多种化学物质，应选择合适的原料。此时不仅要考虑原料的ｐＫａ
值，以保证有足够的缓冲能力，还要考虑原料本身是否具有抑制或激活酶催化活性的作用。
５．２．２．２．４．２ 酶催化反应时的温度
温度对酶催化活性浓度有明显的影响，一般而言，温度升高会加速反应，但超过一定温度后，由于酶
蛋白变性而反应速度变慢。在评定测量不确定度时往往要计算温度影响的灵敏系数。
５．２．２．３ 测量后阶段
在计算酶活性浓度时需使用摩尔消光系数，应考虑此系数的不确定度。有些仪器选用直线回归，按
斜率计算结果，有时会导致较差的拟合，因此引入较大的不确定度。
修约能导致最终结果的不准确，但这些是很少能预知的，所以建议不要在计算过程中，而在计算的
最后进行修约，这样可能无必要考虑修约引起的不确定度。
５．２．２．４ 其他
５．２．２．４．１ 实验室条件的影响
５．２．２．４．１．１ 温湿度：测量时实验室的温湿度通常对测量有一定的影响，尤其对酶学测量，不同温湿度
条件对加样、分光光度计的散热、天平称量等多个与测量有关的环节影响量不同，通常也可产生一定的
测量不确定度，但目前尚未找到有效的评定方法，应尽量保持测量时实验室温湿度一致是有效控制测量不确定度的方法。
５．２．２．４．１．２ 磁场、噪声与振动：由于酶学项目通常采用分光光度计测量，强磁场、噪声与振动会干扰温
度、吸光度等基于电子信号模式和工作原理的测量，测量区域应远离强磁场、噪声与振动区。
５．２．２．４．２ 操作人员的影响
不论在何阶段，操作人员有很大影响，有可能是测量不确定度的重要来源。为查出和减小此分量的
测量不确定度，应对操作人员进行严格培训、考核。不同批次测量由不同技术人员进行。
５．２．２．４．３ 随机影响
在所有测量中都有随机影响产生的不确定度。在评定测量不确定度时，该项应作为一个不确定度来源包括在列表中。
５．３ 不确定度的分类
５．３．１ 当用标准偏差表示时，测量不确定度分量称为标准测量不确定度。如果各分量间存在相关性，
应考虑协方差。可以评价几个分量的综合效应，这可以减少评估不确定度的总工作量。如果上述综合
考虑的几个不确定度分量存在相关，只需在综合时考虑采用协方差，在最后合成时，无需另外考虑其相关性。
５．３．２ 对于测量结果狔，其不确定度称为合成标准测量不确定度，记做狌ｃ（ｙ），是一个标准偏差估计值，
它等于运用不确定度传播律将所有测量不确定度分量（无论是如何评价的）合成为总体方差的正平方根。
５．３．３ 在报告测量结果时，往往要用到扩展测量不确定度U，扩展不确定度是指被测量的值以一个较
高的置信水平存在的区间宽度。U 由合成标准不确定度狌ｃ（ｙ）乘以包含因子犽得到。选择包含因子犽
时应根据所需要的置信水平，对于大约９５％的置信水平而言，犽值为２。
报告扩展不确定度时应注明包含因子犽，因为只有如此才能复原被测量值的合成标准不确定度，以
备在可能需要用该量进行其他测量结果的合成不确定度计算时使用。
６ 评定测量不确定度
６．１ 评定测量不确定度的一般步骤
６．１．１ 第一步：规定被测量
清楚地说明需要测量什么，包括被测量和被测量所依赖的输入量（例如被测数量、常数、校准标准值
等）的关系。并以标准操作程序（ＳＯＰ）或其他方法描述中给出测量有关的技术资料。
６．１．２ 第二步：识别不确定度的来源（参见附录A）
列出不确定度的可能来源。包括在第一步中所规定的测量模型关系式中所含参数的不确定度来
源，但也要考虑可能还有其他的来源。应包括那些由化学假设所产生的不确定度来源。
６．１．３ 第三步：不确定度分量的量化（参见附录A）
绘制因果（鱼骨）图和不确定度计算公式；对第二步识别和列出的每一个不确定度来源列出量值并
计算相关的不确定度分量大小。通常可能评估或确定与大量独立来源有关的不确定度的单个分量。还
有一点很重要的是要考虑所列出的数据是否反映所有的不确定度来源。常需计划其他的实验和研究来
保证不确定度来源都得到了充分的考虑。
６．１．４ 第四步：计算合成不确定度和扩展不确定度
在第三步中得到的信息，只是不确定度的一些量化分量，它们可能与单个来源有关，也可能与几个
不确定度来源的合成影响有关。这些分量应以标准偏差的形式表示，并根据不确定度传播律有关规则
进行合成，以得到合成标准不确定度，并应选择适当的包含因子来给出扩展不确定度。
６．２ 评定测量不确定度的过程
评定测量不确定度的过程见图１。
７ 评定测量不确定度的具体步骤
７．１ 规定被测量
７．１．１ 规定酶活性浓度测量的被测量
按照ＩＵＰＡＣ／ＩＦＣＣ规定的格式，医学实验室中被测量的名称为“系统-组分；量的种类”。
示例：血浆（血液）---钠离子；对特定的人在特定时间内的物质的量浓度等于１４３ｍｍｏｌ／Ｌ。
规定被测量的要素包括：含被测量组分的系统，如人血清、全血、血浆、脑脊液等；被测量组分，如丙
氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）；被测量的量，如物质量浓度、物质量活性、数量浓度。
按模式“系统（说明）-组分（说明）；量（说明）”给出被测量诸要素，见表１。
７．２ IFCC参考方法测量酶催化活性浓度的测量程序和测量模型
７．２．１ 测量程序
７．２．１．１ 测量前阶段
７．２．１．１．１ 样本准备
根据样本来源不同，准备方法有所区：
---干粉样本：以天平称量需加入的蒸馏水量，复溶、保存，待测；
---深低温-７０℃保存样本：按ＳＯＰ文件要求放置在特定温度下水浴融化、混匀、保存，待测；
---新鲜样本：按ＳＯＰ文件要求保存，待测。
准备好的样本需在规定时间内测量完毕（每个项目ＳＯＰ文件应作出明确规定）。
７．２．１．１．２ 试剂准备
按ＩＦＣＣ参考方法制备测量所需试剂，按要求保存。记录缓冲液ｐＨ，是否达到参考方法要求。当
试剂保存条件与ＩＦＣＣ保存方法不一致时，实验室应有足够证据表明实验室选用的保存方法优于原保存方法。
７．２．１．１．３ 仪器准备
仪器的检定（校准）证书不一定能代表实验时仪器的状态，在重要实验前，实验室应进行内部校准，
包括但不限于以下内容：
---分光光度计：验证分光光度计波长准确度、比色杯光径是否符合ＩＦＣＣ参考方法要求；
---移液器：检查所用移液器是否符合１级品要求；
---天平：检查所用天平的性能，至少应满足国家计量检定规范的要求；
---ｐＨ计：使用前应按照计量规范用有证标准缓冲液进行校准；
---温度计：点温度计使用前应计量。应使用水银温度计校准，其应能满足ＩＦＣＣ参考方法要求。
７．２．１．１．４ 人员准备
包括但不限于以下内容：
---参考方法测量质量与人员的技术水平密切相关，在进行赋值前应考核相关人员能力是否能满
足参考方法测量要求；
---在参考实验室工作期间，应不定期地接受培训，并有详细完整的培训记录；
---准确加样是参考实验室工作人员基本技能之一，为客观评价实验室技术人员的加样技能，实验
室应有类似技能规定：如２００μＬ加样１０次变异（C犞）应小于０．３％。
７．２．１．２ 测量阶段
７．２．１．２．１ 参考方法能力验证：尽可能用ＩＦＣＣ参考方法测量有证参考物质，
７．２．１．２．２ 质量控制程序制定：实验室应依据精密度评定结果制定本次实验质控程序。
７．２．１．２．３ 测量：对每一待赋值样本应至少进行３个以上批次测量，每个批次至少３次。每个批次应测
量新制备的样本。有可能，每个批次宜重新配制试剂，特是不稳定的试剂。每个批次同时测量１种～
２种浓度质控品。只有当质控品结果在控制限内（如３SD），才能认为测量结果有效。同时检查反应曲
线，只有当反应曲线符合线性时，认定合格。计算测量合格样本的结果。
７．２．１．３ 测量后阶段
７．２．１．３．１ 按测量方程计算每次测量的酶催化活性浓度。
注：在计算中不能进行数值修约。只对最后结果修约，避免引起测量不确定度。
７．２．１．３．２ 制定除去异常值（３SD）规则，删除数据不应超总数据的１０％。
７．２．１．３．３ 严格按ＧＵＭ的“自下而上”方法计算合成不确定度和扩展不确定度。
７．２．１．４ 酶催化活性浓度测量全过程步骤图
酶催化活性浓度测量全过程步骤见图２。
７．２．２ 测量模型
酶催化活性浓度计算见式（２）。
７．３ 识别所有可能测量不确定度来源
７．３．１ 列出测量过程中的测量不确定度来源
７．３．１．１ 按式（４）列出与计算公式有关的测量不确定度来源。
７．３．１．２ 从影响酶催化活性浓度的５个影响因素中寻找可能的输入量。影响酶催化活性浓度的５个影
响因素包括测量温度、测量ｐＨ、底物浓度、效应剂（抑制剂／激活剂）以及样本的容积分量，其影响包括：
---温度和ｐＨ是不确定度的重要来源，几乎所有酶均应考虑由这两个分量引起的测量不确定度；
---在进行酶催化活性浓度测量时，应保持样本容积分量的恒定，对某些酶，如ＣＫ尤为重要，有可
能要计算由于样本容积分量变化引起的测量不确定度，但对大多数酶而言，可忽略不计；
---底物浓度对酶反应速度有影响，但由于试剂配制时称量较大，天平称量误差很小。对绝大多酶
而言，底物称重不会引起明显变化；
---对一些酶而言，抑制剂／激活剂浓度变化则可能是测量不确定度的重要来源。某些效应剂称量
较小，但对酶催化活性浓度影响却不小，如磷酸吡哆醛称量常以 ｍｇ计，浓度的变化有可能引起变异。
注：此处５个因素对酶活性浓度的影响不同于计算公式中各分量。要先计算各项的灵敏系数，再乘以相应的各分
量的标准不确定度。后面２项变异发生在测量前配制试剂时，本导则将其列入测量前阶段。
７．３．１．３ 从测量过程寻找不确定度来源，可有以下因素：
---波长是酶催化活性浓度测量的重要参数。对某些酶，分光光度计波长的正确度会产生明显的
测量不确定度，往往是由于所测化合物吸收峰宽度小或者比色波长未在吸收峰，如ＧＧＴ被测
化合物对硝基苯胺吸收峰为４０５ｎｍ，但比色波长为４１０ｎｍ。此时波长正确度和半波宽可能
是不确定度的重要来源；
---测量过程中的混匀步骤，实验证明其影响酶催化活性浓度测量，但目前很难用公式恰当表达其
影响量，这在ＡＬＰ参考方法测量时比较突出，以至于ＩＦＣＣ在研讨ＡＬＰ参考方法时，鉴于“搅
拌方式不同会引起吸光度读数不稳定、在空白管尤为明显”的现象，为减小测量变异，建议空白
管测量３次，以均值计算结果。其他酶测量时同样存在此问题，是否也可考虑采用灵敏系数与
标准偏差的方式评定，还需进一步研究，但固定混匀速度和时间是有效降低混匀引入的不确定度的方法；
---参考方法要求酶催化活性浓度测量在３７℃条件下进行，为使比色杯内温度保持在３７℃，分光
光度计比色舱多采用半导体或水浴控温，这会增加比色杯内液体的蒸发，测量过程中比色杯应
全程闭盖测量，无法实现时将会带来明显的不确定度。
上述测量过程中各因素对酶催化活性浓度的影响也应考虑先计算各项的灵敏系数，再乘以相应各
分量的标准不确定度。
７．３．２ 列出测量前阶段不确定度来源
７．３．２．１ 样本准备
根据样本种类不同有所差异，对ＲＥＬＡ（ＩＦＣＣ国际参考实验室环形比对计划）样本而言，可有下列分量：
---称重法复溶时的称重差异；所用水的质量（如使用１级实验室纯水，可不考虑）；复溶时温度；是否避光等；
---复溶后样本的储存条件和使用期限。如果ＳＯＰ文件对上述分量做了严格规定并得到遵守，则
主要分量可能是称重复溶和复溶样本使用期限和储存条件。后者对ＬＤＨ 可能很重要，因为
ＬＤＨ属于冷变性，冰箱保存会导致活性下降。
７．３．２．２ 试剂配制
试剂配制可有下列分量：
---原料纯度：这是尚待进一步探讨的问题。一般而言，使用著名厂家高纯度试剂可不考虑其测量
不确定度。但目前已知某些酶所用原料，就是使用同一厂家但批号不同，配置试剂后结果还出
现明显差异，例如不同批号的双甘肽原科可引起结果差异约２．５％。不同批号Ｌ-丙氨酸中Ｄ-
丙氨酸含量不同也可能引起ＡＬＴ结果差异；
---称量和容量器具差异引起的测量不确定度：在测量部分已讨论过配制底物和效应物时称重和
容量器具差异引起的测量不确定度。要关注配制某些酶效应剂时，由于称重量变化引起差异。
由于不同试剂对反应速度影响不一，一般需计算灵敏系数；
---试剂老化：绝大多数酶催化活性浓度测量试剂如按ＩＦＣＣ规定储存条件放置并在规定期限内
使用，一般说来，可不考虑其对测量结果影响。但是有个试剂，例如磷酸吡哆醛、烟酰胺腺嘌
呤二核苷酸（ＮＡＤＨ）以及ＡＬＰ、ＧＧＴ底物不稳定。有可能要通过实验（Ａ类评定）了解其灵
敏系数。必要时计算其测量不确定度。如果能在每批次测量前都从新配制试剂，则可去除试剂老化的影响。
７．３．２．３ 仪器准备
酶学参考测量主要使用３类仪器，即１级光栅型紫外可见分光光度计、１级容积量器和使用ｌ级砝
码级天平。在正式测量前，应检查这些仪器是否达到法定要求。可有如下分量：
---分光光度计至少应考虑波长、半波宽、吸光度等分量。对某些酶，分光光度计波长的正确度会
产生明显的测量不确定度。通常由于所测化合物吸收峰宽度小或者比色波长未在吸收峰，如
ＧＧＴ被测化合物对硝基苯胺吸收峰为４０５ｎｍ，但比色波长为４１０ｎｍ。此时波长正确度和半
波宽可能是不确定度的来源。分光光度计读数吸光度主要分量为吸光度校准产生的偏移和重
复性。（参见附录Ｂ）分光光度计的上述参数可直接影响酶催化活性浓度测量，其对酶催化活
性浓度测量的影响放入测量过程中评定。
---容积量器有３个分量：正确度，重复性和温度。在下述条件，室温以及配制用水温度为容器校
准温度±５℃时，温度对不确定度贡献不大。主要分量为前二者。酶催化活性浓度测量时由
于加液量小（相对偏移增大）且次数多，计算时用４个容积量值，因此不可忽视加液对测量不确定度的贡献。
---称重的分量多达７项（参见附录Ｂ）。在酶催化活性浓度测量中，称重对测量不确定度贡献与
其他输入量相比较小，计算时只需考虑校准时的偏移（正确度）和重复性。
７．３．２．４ 人员准备
酶学参考方法是手工方法，因此操作人员素质和操作熟练程度会影响测量结果。但如参考实验室
注意此点，重视工作人员的培训和资格认定，在评定测量不确定度时可不考虑此分量。
７．３．３ 列出测量后阶段不确定度来源
７．３．３．１ 异常值的删除
首先应识别由于仪器故障，明显环境条件变化引起的“大错”，例如分光光度计光源灯不稳、光栅陈
旧引起的吸光度不正常变化。不应认可此时的测量结果。应建立在正常情况下，删除异常值的规定。
参考实验室是否可以考虑超出３个标准偏差（３SD）值即可删除，但删除值不应超过测量总数的１０％。
如参考实验室有严格规定并得到执行，可不考虑此输入量对测量不确定度的贡献。
７．３．３．２ 修约
在酶学测量中，从方程式可看出有多次乘除计算，如每次计算都修约，则可能出现不小的测量不确
定度。但如不每次修约，只对最后结果进行修约，则可忽略不计修约对测量不确定度的贡献。
７．３．３．３ 应用线性方程
在计算酶活性浓度时，除用ΔA／ΔT 外，也可计算单位时间吸光度变化线性方程，用其斜率计算酶
催化活性浓度。此时可用多种办法计算斜率的测量不确定度。
７．３．４ 其他测量不确定度
有些因素如实验室温度、湿度等虽然不能直接影响酶催化活性浓度的测量，也很难通过有效的数学
公式评定其对测量不确定度的影响，但实际工作中发现这些因素也会导致酶催化活性浓度测量结果变
化，其评定方法还有待进一步研究。
７．３．５ 所有输入量说明表
所有输入量说明见表３。
７．４ 绘制测量过程因果（鱼骨）图和测量全过程不确定度计算公式
７．４．１ 绘制测量过程的因果（鱼骨）图
７．４．１．１ 将测量过程的输入量作为分支划出初步因果图
先将计算公式每一乘除项做为一个输入量分支绘图。也就是先将式（４）中２个加减项各合并为一
个分支，再将其他可能输入量做为一个函数列为一个分支，见图３。
７．４．１．２ 列出每个分支中的主要分量
进一步对每一输入量细分对其有影响的组分。一般而言，除个别分支外，按附录Ｂ，均可对每一分
支添加２个分量，即由系统效应导致的分量（正确度）和随机效应导致的分量（精密度）。然后根据不同
情况，酌情添加或删去分量，见图４。
７．４．１．３ 完成按属性分类的因果图
本文件介绍的方法可将众多输入量的复杂分量按属性分类，简化了评定测量不确定度的过程。将
各分支中精密度抽出合并为一支“实验室内复现性（SＲｗ）”。用Ａ类办法评定，通过精密度实验求出其
标准不确定度。如：在ＲＥＬＡ测试中，参考实验室可在每个工作日开启一瓶样本，复溶后重复测量３次～
５次，测量４个工作日。从此１２次～２０次测量结果求出本校准实验室内复现性精密度SＲｗ。建议每个
工作日测量时应重新配制试剂，如能由不同技术员操作可能评定结果更客观。
对各输入量中正确度分量可分别用Ａ类或Ｂ类办法进行评定。见图５。
图５ 按属性分类的因果图
７．６ 计算每一输入量的标准不确定度和绘制预估表
７．６．１ 计算实验室内复现性（SR）
从因果图中可发现一个重要分支，即实验室内复现性。应用Ａ类评定方法通过多批次测量，可以
得到实验室内复现性SＲｗ。为了使数据具有代表性，应该多批次，有可能应进行３个批次以......
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