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| 标准编号 | WS/T 617-2018 (WS/T617-2018) | | 中文名称 | 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序 | | 英文名称 | Reference procedure for the measurement of catalytic activity concentration of aspartate aminotransferase | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 字数估计 | 37,377 | | 发布日期 | 2018-08-20 | | 实施日期 | 2019-03-01 | | 标准依据 | 国卫通(2018)16号 | | 发布机构 | 卫生健康委员会 | WS/T 617-2018: 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序
WS/T 617-2018 英文名称: Reference procedure for the measurement of catalytic activity concentration of aspartate aminotransferase
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
CS 11.020
C 50
WS
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序
1 范围
本标准规定了在临床医学应用中，测量天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度的参考测量程序。
本标准主要适用于参考实验室，作为天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测量的溯源，也可作为与
酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源，可供有关认可监督管理单位及质量管理部门应
用。此参考测量程序可用于我国临床常规方法测量结果的溯源。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
ISO 15193 体外诊断器具-生物源样本中量的测量-参考测量程序的表述
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实验室样品 laboratory sample
准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样品或原始样品的分样品。
3.2
分析样品 analytical sample
自实验室样本制备的、可从中取出分析部分的样品。
注：在取出分析部分之前，分析样品可经过各种处理。
3.3
分析部分 analytical portion
从分析样品中取出的用于实际测量和观察的物质部分。
注：如果不需预处理，分析部分直接从原始样品或实验室样品中取出。某些情况下，
需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。
3.4
分析溶液 analytical solution
将分析部分溶解在气体、液体或固体中而制备的溶液，溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。
3.5
(某一物质系统的)基质 matrix(of a material system)
一个物质系统中除被分析物之外的所有成分。
3.6
参考测量程序 reference measurement procedure
参考程序 reference procedure
在校准或参考物质定值时，为提供测量结果所采用的测量程序，它用于评价由同类量的其他测量程
序获得的被测量的量值的测量正确度。
3.7
测量系统的灵敏度 sensitivity of a measuring system
灵敏度 sensitivity
测量系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。
注1：测量系统的灵敏度可能与被测量的量值有关。
注2：所考虑的被测量值的变化必须大于测量系统的分辨力。
3.8
分析特异性 analytical specificity
测量程序只测量可测量的量的能力。
3.9
分析干扰 analytical interference
由一个影响量引起的系统测量误差，该影响量自身在测量系统中不产生信号，
但它会引起示值的增高或降低。
3.10
影响量 influence quantity
被测量以外的可影响测量结果的量。
3.11
检出限 detection limit；limit of detection
由给定测量程序获得的测得值，其声称的物质成分不存在的误判概率为，
声称物质成分存在的误判概率为。
注 1：国际理论和应用化学联合会（IUPAC）推荐和的默认值为 0.05。
注 2：有时使用缩写词 LOD。
注 3：不要用术语“灵敏度”表示“检出限”。
3.12
校准品 calibrator
用于校准的测量标准。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AST：天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase）
GUM：测量不确定度表达指南（Guide to the expression of Uncertainty in Measurement）
IFCC：国际临床化学与检验医学联合会（International Federation of Clinical Chemistry and
Laboratory Medicine）
LD：乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase)
MD：苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase）
NAD：氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β-Nicotinamide-Adenine-Dinucleotide, oxidized form）
NADH：还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β-Nicotinamide-Adenine-Dinucleotide, reduced form）
P-5-P：5′-磷酸吡哆醛（Pyridoxal-5-Phosphoric acid）
QUAM：化学测量中不确定度的评定(Quantifying Uncertainty In Analytical Measurement)
SOP：标准操作程序(Standard Operation Procedure)
5 测量原理和方法
本参考测量程序采用偶联反应，反应式如下：
6 测量前试剂准备
6.1 试剂列表
将所用试剂按表1列出。
6.3 试剂溶液配制
6.3.1 一般要求
制备溶液时各成分给出的质量是指100％含量。如果化学物质的含量低于100％[例如y(%)]，则应用
因子：Fcontent＝100／y，计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。溶液的制备应使用质量与双蒸水
类似的高纯度水（电导率＜2 μS·cm-1，pH 6～7，硅酸盐＜0.1 mg·L-1)。
每次称重的扩展不确定度（k＝2）(包括物质纯度的不确定度)（正态分布），应≤1.5％。
6.3.2溶液 1
称量1.17 g Tris、4.02 g天门冬氨酸（游离酸）、0.052 g叠氮钠，将上述物质按以下步骤处理：
--溶在约 80 mL 水中；
--加 4.2 mL～4.4 mL 5.00 mol·L-1的氢氧化钠溶液；
--搅拌直到试剂完全溶解；
--混合液的pH值应比pH靶值低（约0.3 pH～0.9 pH）；
--在 37℃用 2 mol·L-1氢氧化钠溶液调节 pH到 7.65；
--转移至 100 mL容量瓶中；
--将容量瓶和水平衡至 20℃；
--加水（20℃）至容量瓶的刻度线。
最终配制的溶液中 Tris浓度为 96.92 mmol·L-1，天门冬氨酸浓度为 302.4 mmol·L-1，叠氮钠浓
度为 8.00 mmol·L-1 。该溶液 2℃～8℃稳定性为 3个月。
注: 加水之后天门冬氨酸不溶解,必须先加氢氧化钠溶液,以5 mol·L-1代替2 mol·L-1氢氧化钠溶液可减少所需用
量,精确调整pH值时需用2 mol·L-1氢氧化钠溶液。
6.3.3 溶液 2
称量1.17 g Tris、0.052 g叠氮钠，将上述物质按以下步骤处理：
--将上述 2种试剂溶在约 80 mL水中；
--在 37℃用 1 mol·L-1盐酸调 pH值到 7.65；
--转移至 100 mL容量瓶；
--将容量瓶和水平衡至 20℃；
--加水（20℃）至容量瓶刻度线。
最终配制的溶液中 Tris浓度为 96.92 mmol·L-1，叠氮钠浓度为 8.00 mmol·L-1 。该溶液在 2℃～8℃稳定性为 3个月。
6.3.4 溶液 3
称量16.7 mg P-5-P一水化合物，按以下步骤处理：
--将 16.7 mg P-5-P一水化合物用 6mL溶液 2溶解；
--转移至 10 mL 容量瓶；
--容量瓶和溶液 2平衡至 20℃；
--加溶液 2（20℃）到容量瓶刻度线；
--避光保存（如棕色瓶）。
最终配制的溶液中 P-5-P浓度为 6.30 mmol·L-1。此溶液在 2℃～8℃稳定性为 1周。
6.3.5 溶液 4
称量16.1 mg NADH二钠盐，按以下步骤处理：
--溶于 2.00 mL 溶液 2中；
--避光保存（如棕色瓶）。
最终配制的溶液中NADH浓度为11.34 mmol·L-1。此溶液在2℃～8℃稳定性为1周。
6.3.6 酶试剂的稀释液
称量1.20 g牛血清白蛋白、0.90 g氯化钠，将上述物质按以下步骤处理：
--将上述 2种试剂溶于约 80 mL水中；
--转移至 100 mL容量瓶；
--将容量瓶和水平衡至 20℃；
--加水（20℃）至容量瓶刻度线。
最终配制的溶液中氯化钠浓度为154 mmol·L-1。此溶液在2℃～8℃稳定性至少1个月。
6.3.7 溶液 5
按以下步骤配制：
--用6.3.6中的酶试剂稀释液稀释LD储存液,使LD催化活性浓度在37℃时为3.78 mkat·L-1（226.8
kU·L-1）。按式(1)计算稀释LD储存液所需酶试剂稀释液体积。
7 测量前仪器准备
7.1 仪器列表
实验室应在表3登记主要测量仪器(分光光度计)和主要辅助仪器(点式温度计、天平、pH计、恒温水
浴箱、稀释配液仪、移液器等)。
7.3 分光光度计准备
测量工作前，按已制定的SOP文件对分光光度计进行检查，填入表5。
7.4 点式温度计准备
测量工作前，按已制定的SOP文件对点式温度计进行检查，填入表6。
10.2 数据处理
对于计算的 AST催化活性浓度,要进行数据处理:
--数据剔除：必要时，每个实验室应建立适当的数据剔除规则；
--计算每批次测量值的均值、标准差，必要时应检查数据分布类型，计算均值的标准差（标准误）；
--根据 GUM和 QUAM原则计算测量结果的不确定度。
10.3 酶活性单位及换算关系
酶催化活性常用单位为kat·L-1，使用时常出现多位小数，目前常以μkat·L-1或 nkat·L-1表示，
但临床医学中仍习惯于使用U·L-1。换算关系如下：
以U·L-1单位表示的催化浓度可通过乘以系数（f=0.01667）转化成μkat·L-1。
10.4 测量不确定度的评定
10.4.1 定义被测量
应至少从下面几个方面定义被测量:
--血清（或血浆）AST催化活性浓度；
--催化活性单位：kat·L-1或U·L-1；
--AST催化活性测量主要用于临床心脏或肝脏疾病的判断；
--应考虑到血清中可能存在线粒体型AST（mAST）和细胞浆型AST（sAST）；
--溶血时sAST可显著升高；
--不考虑分析前和分析后因素对测量不确定度的贡献。
10.4.2 建立数学模型
C为输出量，为AST测量的催化活性浓度。影响测量的直接因素有： ⊿A/⊿T为吸光度变化率； 为
摩尔吸光系数；L为比色杯光径；VR1为反应液体积；VR2为起始试剂体积；VS为样品体积。影响测量的间
接因素有：temp为温度；pH；wl为波长；trans为透光度；lot为试剂厂家与批号；conc为试剂浓度；line
为方法线性；aging为试剂老化。
10.4.3 不确定度分量的定量
应至少从下面几个方面对不确定度的分量进行定量:
--测量结果的不精密度：一般将同一分析样品分4天测量，每天连续测量3次，
计算均值、标准差与变异系数。
--摩尔消光系数的不确定度：根据文献摩尔消光系数的不确定度为1%，可考虑为三角形分布。
--比色杯光径的不确定度：比色杯光径应经有资质的计量院所检定或校准，
引用证书上的不确定度，可考虑为正态分布。
12.2 测量不确定度
应根据GUM和QUAM原则计算测量不确定度。按照10.4不确定度计算方法，并结合比对实验室数据，
本参考程序的测量结果的相对合成标准不确定度在浓度
12.3 测量精密度
选择2个浓度水平的质控物质，每天测量2次（2次间隔不少于2 h），每次测量均做双份，连续测量
20 d，按CLSI EP5-A3文件进行评价。应根据本实验室测量条件评估本参考程序的重复性、期间精密度。
结合比对实验室结果，本参考程序重复性CV宜小于1.5%，期间精密度CV宜小于2.0%。
12.4 检出限
与分光光度计的最小分析信号有关。国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)对检出限的规定，按照AST
参考测量程序的操作步骤，测定试剂空白五次，用生理盐水为零值样本，测定20次，计算 x 与s,
12.5 线性范围
参考CLSI EP6-A文件，设......
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