路径: 主页 > GB > 第142页 > GB 29681-2013 | 标准编号 | GB 29681-2013 (GB29681-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of Levamisole residues in milk by High Performance Liquid Chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 10,156 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了牛奶中左旋咪唑残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于牛奶中左旋咪唑残留量检测。 | GB 29681-2013: 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 高效液相色谱法
GB 29681-2013 英文名称: Determination of Levamisole residues in milk by High Performance Liquid Chromatographic method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
牛奶中左旋咪唑残留量的测定
高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了牛奶中左旋咪唑残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于牛奶中左旋咪唑残留量检测。
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的左旋咪唑,用碳酸盐缓冲液和乙酸乙酯溶液提取,C18柱净化,甲醇洗脱
,高效液相色谱测定,外标法定量。
4 试剂与材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 盐酸左旋咪唑标准品:含量≥99.0%。
4.2 甲醇。
4.3 无水碳酸氢钠:优级纯。
4.4 碳酸钠。
4.5 磷酸二氢钠。
4.6 浓氨水。
4.7 二乙胺:优级纯。
4.8 乙腈。
4.9 磷酸。
4.10 盐酸。
4.11 C18固相萃取柱:500mg/3mL。
4.12 10%磷酸溶液:取磷酸70mL,用水溶解并稀释至1000mL。
4.13 3mol/L盐酸溶液:取盐酸250mL,用水溶解并稀释至1000mL。
4.14 碳酸氢钠饱和水溶液:取水1000mL,加无水碳酸氢钠至不溶解为止,现用现配。
4.15 碳酸钠饱和水溶液:取水500mL,加碳酸钠至不溶解为止,现用现配。
4.16 碳酸盐缓冲液(约pH=9):取碳酸氢钠饱和水溶液900mL,加碳酸钠饱和水溶液100mL,混匀。
4.17 0.02mol/L磷酸二氢钠二乙胺缓冲溶液:取磷酸二氢钠2.44g,加水850mL溶解,加二乙胺
3mL混合,用10%磷酸调pH至7.5,用水稀释至1000mL。
4.18 1mg/mL左旋咪唑标准贮备液:精密称取盐酸左旋咪唑标准品10mg,于10mL量瓶中,用甲醇
溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的左旋咪唑标准贮备液。2℃~4℃保存,有效期3个月。
4.19 10μg/mL左旋咪唑标准工作液:精密量取1mg/mL左旋咪唑标准贮备液1.0mL,于100mL
量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为10μg/L的左旋咪唑标准工作液。2℃~4℃保存,有效期3个月。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 电子天平:感量0.01g。
5.4 均质机。
5.5 冷冻高速离心机。
5.6 电热恒温水浴锅。
5.7 旋涡混合器。
5.8 茄形瓶:50mL。
5.9 离心管。
5.10 滤膜:0.45μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 提取
称取试料5g±0.05g,于离心管中,加碳酸盐缓冲液5mL,加乙酸乙酯10mL,混匀,6000r/min
离心10min,取上清液于茄形瓶中,再加乙酸乙酯10mL萃取一次,合并两次上清液,于50℃水浴旋转
蒸发至干,加碳酸盐缓冲液5mL溶解残余物,备用。
7.2 净化
C18柱依次用水3mL、甲醇3mL和碳酸盐缓冲液3mL活化,取备用液过柱,用水3mL淋洗,用甲
醇5mL洗脱,收集洗脱液,于50℃水浴氮气吹干,用流动相1.0mL溶解残余物,滤膜过滤,供高效液相色谱测定。
7.3 标准曲线的制备
准确量取10μg/mL左旋咪唑标准工作液适量,用流动相稀释,配制成浓度为10、20、50、100、200、
400和800μg/L的系列标准工作液,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液
浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱条件
7.4.1.1 色谱柱:C18(l50mm×4.6mm,粒径5μm),或相当者。
7.4.1.2 流动相:0.02mol/L磷酸二氢钠二乙胺缓冲溶液+甲醇(70+30,体积比)。
7.4.1.3 流速:1mL/min。
7.4.1.4 检测波长:220nm。
7.4.1.5 进样量:50μL。
7.4.1.6 柱温:30℃。
7.4.2 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算。标准溶液及试样溶
液中左旋咪唑响应值应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下,标准溶液和空白添加试样溶
液的高效液相色谱图见附录A。
7.5 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操......
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