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[PDF] GB 4789.28-2013 - 中国标准 英文版

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GB 4789.28-2013 155 GB 4789.28-2013 9秒内发货PDF 食品安全国家标准　食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求
基本信息
标准编号 GB 4789.28-2013 (GB4789.28-2013)
中文名称 食品安全国家标准　食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求
英文名称 National food safety standard - Food Microbiological Examination - Quality requirements of culture media and reagents
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 07.100.30
字数估计 55,549
旧标准 (被替代) GB 4789.28-2003
标准依据 国家卫计委公告2013年第7号
发布机构 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
范围 本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求。本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。

GB 4789.28-2013: 食品安全国家标准　食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB 4789.28-2013 英文名称: National Food Safety Standard Food Microbiological Examination -- Quality requirements of culture media and reagents 中华人民共和国国家标准 1 范围 本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求。 本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。 5 培养基和试剂的质量要求 5.1 基本要求 5.1.1 培养基和试剂 培养基和试剂的质量由基础成分的质量、制备过程的控制、微生物污染的消除及包装和储存条件等因素所决定。 供应商或制备者应确保培养基和试剂的理化特性满足相关标准的要求,以下特性的质量评估结果 应符合相应的规定: ---分装的量和(或)厚度; ---外观,色泽和均一性; ---琼脂凝胶的硬度; ---水分含量; ---20℃~25℃的pH; ---缓冲能力; ---微生物污染。 培养基和试剂的各种成分、添加剂或选择剂应进行适当的质量评价。 5.1.2 基础成分 国家标准中提到的培养基通常可以直接使用。但因其中一些培养基成分(见附录C)质量不稳定, 可允许对其用量进行适当的调整,如: ---根据营养需要改变蛋白胨、牛肉浸出物、酵母浸出物的用量; ---根据所需凝胶作用的效果改变琼脂的用量; ---根据缓冲要求决定缓冲物质用量; ---根据选择性要求决定胆盐、胆汁抽提物和脱氧胆酸盐、抗菌染料的用量; ---根据抗生素的效价决定其用量。 5.2 微生物学要求 5.2.1 概论 培养基和试剂应达到附录D质量控制标准的要求,其性能测试方法按6.1执行。实验室使用商品 化培养基和试剂时,应保留生产商按3.1.1提供的资料,并制定验收程序,如需进行验证,可按6.2执行, 并应达到附录E质量控制标准要求。 5.2.2 微生物污染的控制 按批量的不同选择适量的培养基在适当条件下培养,测定其微生物污染。生产商应根据每种平板 或液体培养基的数量,规定或建立其污染限值,并记录培养基成分、制备要素和包装类型。 分别从初始和最终制备的培养基中抽取或制备至少一个(或1%)平板或试管,置于37℃培养18h 或按特定标准中规定的温度时间进行培养。 本条款只适用于即用型培养基。 5.2.3 生长特性 5.2.3.1 一般要求 选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价: ---定量方法; ---半定量方法; ---定性方法。 采用定量方法时,应使用参考培养基(见附录D)进行对照;采用半定量和定性方法时,使用参考培 养基或能得到“阳性”结果的培养基进行对照有助于结果的解释。参考培养基应选择近期批次中质量良 好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。 5.2.3.2 测试菌株 测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株。测试 菌株主要购置于标准菌种保藏中心,也可以是实验室自己分离的具有良好特性的菌株。实验室应检测 和记录标准储备菌株的特性;或选择具有典型特性的新菌株,使用时应引起注意;最好使用从食品或水中分离的菌株。 对不含指示剂或选择剂的培养基,只需采用一株阳性菌株进行测试;对含有指示剂或选择剂的培养 基或试剂,应使用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验;复合培养基(如需要加入添加成分的培养 基)需要以下列菌株进行验证: ---具典型反应特性的生长良好的阳性菌株; ---弱阳性菌株(对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株); ---不具有该特性的阴性菌株; ---部分或完全受抑制的菌株。 5.2.3.3 生长率 按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中。 每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值(见附录D、附录E)。 5.2.3.4 选择性 为定量评估培养基的选择性,应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性 培养基和参考培养基中,培养基的选择性应达到规定值(见附录D、附录E)。 5.2.3.5 生理生化特性(特异性) 确定培养基的菌落形态学、鉴别特性和选择性,或试剂的鉴别特性,以获得培养基或试剂的基本特性(见附录D、附录E)。 5.2.3.6 性能评价和结果解释 若按照规定的所有测试菌株的性能测试达到标准,则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定。 若基本要求和微生物学要求均符合规定,则该批培养基或试剂可被接受。 6 培养基和试剂性能测试方法 6.1 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法 6.1.1 非选择性分离和计数固体培养基的目标菌生长率定量测试方法 6.1.1.1 平板的制备与保存 倾注融化的培养基到平皿中,使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层(直径90mm的平皿 通常要加入18mL~20mL琼脂培养基),需添加试剂的培养基,应使培养基冷却至47℃~50℃后才 添加试剂。倾注后将平板放到水平平面,使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处 和(或)2℃~8℃冰箱的密封袋中,在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥,但应注意不要过度干燥。 6.1.1.2 工作菌悬液的制备 将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法,制备10倍系列稀释的菌悬液。生 长率测试常用每平板的接种水平为20CFU~200CFU。 6.1.1.3 接种 选择合适稀释度的工作菌悬液0.1mL,均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两 个平板。可使用螺旋平板法(见附录F)或倾注法进行接种,并按标准规定的培养条件培养平板。 6.1.1.5 结果解释 目标菌在培养基上应呈现典型的生长。非选择性分离和计数固体培养基上目标菌的生长率应不小于0.7。 6.1.2 选择性分离和计数固体培养基的测试方法 6.1.2.1 目标菌生长率定量测试方法 6.1.2.1.1 平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。 6.1.2.1.2 工作菌悬液的制备按照6.1.1.2中要求进行。 6.1.2.1.3 接种按照6.1.1.3中要求进行。 6.1.2.1.4 计算按照6.1.1.4中要求进行。 6.1.2.1.5 结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长。选择性分离固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.5, 最低应为0.1;选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7。参照附录F培养基质量控制标准。 6.1.2.2 非目标菌(选择性)半定量测试方法 6.1.2.2.1 平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。 6.1.2.2.2 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。 6.1.2.2.3 接种用1μL接种环取选择性测试工作菌悬液1环,在待测培养基表面划六条平行直线(如图1),同时 接种两个平板,划线时可在培养基下面放一个模板图,按标准规定的培养条件培养平板。 操作时用接种环而不用接种针,接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物,将接种环接触容器 边缘3次可去除多余的液体。划线时,接种环与琼脂平面的角度应为20°~30°。接种环压在琼脂表面 的压力和划线速度前后一致,整个划线应快速连续,移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以 防止环上产生气泡或泡沫。 培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G 为1,每个培 养皿上最多为6分。如果仅一半的线有稠密菌落生长,则G 为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量 少于划线的一半或菌落生长微弱,则G 为0。记录每个平板的得分总和便得到G。同时接种两个平板。 6.1.2.2.5 结果解释 非目标菌的生长指数G 一般小于或等于1,至少应达到小于5。 6.1.2.3 非目标菌(特异性)定性测试方法 6.1.2.3.1 平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。 6.1.2.3.2 工作菌悬液的制备按照6.1.1.2中要求进行。 6.1.2.3.3 接种用1μL接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线,并按标准规定的培养条件培养平板。 6.1.2.3.4 结果解释非目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。 6.1.3 非选择性增菌培养基的半定量测试方法 6.1.3.1 培养基的制备将培养基分装试管,每管10mL。 6.1.3.2 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他制备方法,制备10倍系列稀释的菌悬液。 6.1.3.3 接种 在装有待测培养基的试管中接种10CFU~100CFU的目标菌,每管接种量为1mL,接种两个平 行管。同时将1mL菌悬液(与试管接种同一稀释度)倾注平板,接种两个平板,作接种量计数用。按标 准方法中规定的培养时间和温度进行培养(如:增菌时间为8h以下,需取10μL培养后的增菌液倾注 到适合的培养基中,再按适合的培养时间和温度进行培养)。 6.1.3.4 结果解释 用目测的浊度值(如:0~2)评估培养基: ---0表示无混浊; ---1表示很轻微的混浊; ---2表示严重的混浊。 目标菌的浊度值应为2。 有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团,沉积在试管或瓶子底部,发生这种情况时,小心振荡试管后再进行观察。 如增菌8h以下,10μL增菌液培养计数结果参照附录D培养基质量控制标准。 6.1.4 选择性增菌培养基的半定量测试方法 6.1.4.1 培养基的制备 将培养基分装试管,每管10mL。 6.1.4.2 工作菌悬液的制备 按照6.1.3.2中要求进行。 6.1.4.3 接种 6.1.4.3.1 混合菌的接种 在装有待测培养基的试管中接种10CFU~100CFU的目标菌(特殊接菌量参照附录D培养基质 量控制标准),并接种1000CFU~5000CFU的非目标菌,接种总量为1mL,同时接种两个平行管,混 匀。同时分别将目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释度)和非目标菌菌悬液(比试管接种小10~100倍 稀释度)1mL倾注平板,接种两个平板,作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。 6.1.4.3.2 非目标菌的接种 在装有待测培养基的试管中接种1000CFU~5000CFU的非目标菌,接种量为1mL,同时接种 两个平行管,混匀。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。 6.1.4.4 培养液的接种 6.1.4.4.1 混合菌培养液的接种 用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液,划线接种到特定的选择性平板上,同时每管接种 一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。 6.1.4.4.2 非目标菌培养液的接种 吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,均匀涂布接种到非选择性平板(如:TSA)上。同时每管接 种一个平板。可使用倾注法进行接种,并按标准规定的培养条件培养平板。 6.1.4.5 计算和结果解释 目标菌在选择性平板上的菌落应 >10CFU,则表示待测液体培养基的生长率良好;非目标菌在非 选择性平板上的菌落数应< 100CFU,则表示待测液体培养基的选择性为良好。 6.1.5 选择性液体计数培养基的半定量测试方法 6.1.5.1 培养基的制备 将培养基分装试管,每管10mL。 6.1.5.2 工作菌悬液的制备 按照6.1.3.2中要求进行。 6.1.5.3 接种 6.1.5.3.1 目标菌的接种 在装有待测培养基的试管中接种10CFU~100CFU的目标菌,接种总量为1mL,同时接种两个 平行管,混匀。同时将1mL菌悬液(与试管接种同一稀释度)倾注平板,接种两个平板,作接种量计数 用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。 6.1.5.3.2 非目标菌的接种 在装有待测培养基的试管中接种1000CFU~5000CFU的非目标菌,接种总量为1mL,同时接 种两个平行管,混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10~100倍稀释度)倾注平板,接种两个平 板,作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。 6.1.5.4 结果解释 并记录小导管收集气体的体积比。 目标菌的浊度值应为2,产气应为1/3或以上;非目标菌的浊度值应为0或1,无产气现象。 注:有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团,沉积在试管或瓶子底部,发生这种情况时,小心振荡试管后再进行观察。 6.1.6 悬浮培养基和运输培养基的定量测试方法 6.1.6.1 培养基的制备 将培养基分装试管,每管10mL(有特殊要求的可选用5mL)。 6.1.6.2 目标菌工作菌悬液的制备 按照6.1.3.2中要求进行。 6.1.6.3 接种 在装有待测培养基的试管中接种100CFU~1000CFU的目标菌,同时接种两个平行管,混匀后, 立即吸取1mL待测培养基混合液,参照附录F培养基质量控制标准选用相应的培养基倾注平板,每管 待测培养基接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度培养后,进行菌落计数。 剩余已接种菌液的待测培养基置20℃~25℃放置45min后;再吸取1mL倾注平板,每管培养基 接种一个平板,按标准方法中规定的培养时间和温度培养后,进行菌落计数。如保存条件有......