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| 标准编号 | GB 5009.205-2013 (GB5009.205-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定 | | 英文名称 | National Food Safety Standard -- TEQ Determination of dioxin and its analogues | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.040 | | 字数估计 | 58,579 | | 旧标准 (被替代) | GB 5009.205-2007 | | 标准依据 | 国家卫计委公告2013年第7号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了食品中17种2.3.7.8-取代的多氯代二苯并二噁英(PCDDs)、多氯代二苯并呋喃(PCDFs)和12种二噁英样多氯联苯(DL-PCBs)含量及二噁英毒性当量(TEQ)的测定方法。本标准适用于附录A的表A.1中规定的食品中17种2.3.7.8-取代多氯代二苯并二噁英及多氯代二苯并呋喃(PCDD/Fs)和12种DL-PCBs含量及其TEQ的测定。 | GB 5009.205-2013: 食品安全国家标准 食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定
GB 5009.205-2013 英文名称: National Food Safety Standard -- TEQ Determination of dioxin and its analogues
中华人民共和国国家标准
2013-11-29发布
2014-06-01实施
食品安全国家标准
食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定
1 范围
本标准规定了食品中17种2,3,7,8-取代的多氯代二苯并二噁英（PCDDs）、多氯代二苯并呋喃（PCDFs）
和12种二噁英样多氯联苯（DL-PCBs）含量及二噁英毒性当量（TEQ）的测定方法。
本标准适用于附录A的表A.1中规定的食品中17种2,3,7,8-取代多氯代二苯并二噁英及多氯代二苯并
呋喃（PCDD/Fs）和12种DL-PCBs含量及其TEQ的测定。
2 原理
应用高分辨气相色谱-高分辨质谱联用技术，在质谱分辨率大于10 000的条件下，通过精确质量测
量监测目标化合物的两个离子，获得目标化合物的特异性响应。以目标化合物的同位素标记化合物为定
量内标，采用稳定性同位素稀释法准确测定食品中2,3,7,8位氯取代的PCDD/Fs和DL-PCBs的含量；并以
各目标化合物的毒性当量因子(TEF)与所测得的含量相乘后累加，
得到样品中二噁英及其类似物的毒性当量（TEQ）。
3 试剂和材料
3.2 标准溶液
3.2.1 PCDD/Fs标准溶液
注：本标准推荐使用EPA1613-1997规定的标准溶液，各实验室可根据具体情况选用相当的标准品。如果需要制备储
备溶液，应该在通风橱中进行，并且戴上防毒面罩。
3.2.1.1 校正和时间窗口确定的标准溶液（CS3WT溶液）：用壬烷配制，为含有天然和同位素标记
PCDD/Fs（定量内标、净化标准和回收率内标）的溶液，用于方法的校正和确证，并可以用于DB5 MS
毛细管柱(或等效柱)时间窗口确定和2,3,7,8-TCDD分离度的检查（见附录B的表B.1）。
3.2.1.2 净化标准溶液：用壬烷配制的37Cl4-2,3,7,8-TCDD溶液（浓度为40 μg/L ±2 μg/L）。
3.2.1.3 同位素标记定量内标的储备溶液：用壬烷配制的13C12-PCDD/Fs溶液（见附录B的表B.2）。
3.2.1.4 回收率内标标准溶液：用壬烷配制的13C12-1,2,3,4-TCDD和
13C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD溶液（见附录B的表B.3）。
3.2.1.5 精密度和回收率检查标准溶液（PAR）：用壬烷配制的含天然PCDD/Fs溶液（见附录B的表
B.4），用于方法建立时的初始精密度和回收率试验（IPR）及过程精密度和回收率试验（OPR）。
3.2.1.6 保留时间窗口确定的标准溶液(TDTFWD)：用于确定规定毛细管柱中四氯至八氯取代化合物
出峰顺序，同时用于检查在规定的色谱柱中2,3,7,8-TCDD和2,3,7,8-TCDF的分离度（见附录B的表B.6）。
3.2.1.7 校正标准溶液：为含有天然和同位素标记的PCDD/Fs 系列校正溶液（见附录B的表B.7），其
中CSL为浓度更低的天然PCDD/Fs校正溶液，用于质谱系统校正。测定校正标准溶液，可以获得天然与
标记PCDD/Fs的相对响应因子（RRF）。此外，CS3用于已建立RRF的日常校正和校正曲线校验(VER)；
CS1用于检查HRGC-HRMS必须具备的灵敏度。由于食品要求的灵敏度更低，可以使用CSL进行灵敏度检查。
3.2.2 DL-PCBs标准溶液
注：本标准推荐使用EPA1668A规定的标准溶液，各实验室可根据具体情况选用相当的标准品。如果需要制备储备
溶液，应该在通风橱中进行，并且戴上防毒面罩。
3.2.2.1 时间窗口确定和定量内标标准溶液：用壬烷配制的含同位素标记DL-PCBs的溶液（见附录B的表B.8）。
3.2.2.2 同位素标记的净化内标标准溶液
3.2.2.4 精密度和回收率检查标准溶液(PAR)：用壬烷配制的含天然DL-PCBs溶液（见附录B的表
B.11），用于方法建立时的初始精密度和回收率试验（IPR）及过程精密度和回收率试验（OPR）。
3.2.2.5 校正标准溶液：为含有天然（目标化合物）和同位素标记（定量内标、净化标准和回收率内
标）的DL-PCBs 系列校正溶液（见附录B的表B.12）。其中CS3用于已建立RRF的日常校正和校正曲线
校验(VER)，CS1用于检查HRGC-HRMS必须具备的灵敏度。
3.2.2.6 高灵敏度检查的标准溶液：为天然DL-PCBs的溶液（浓度0.2 μg/L，见附录B的表B.13）。
3.2.2.7 校正检查的标准溶液：浓度相当于CS3，不含同位素标记，仅为天然DL-PCBs的溶液
（50 μg/L，见附录B的表B.14）。
3.3 样品净化用吸附剂
注：样品净化用吸附剂应在制备后尽快使用，如果经过一段较长时间的保存，应检验其活性。在装有氧化铝和硅胶
等容器上应标识其制备日期或开封日期。如果标识不可辨认，应废弃吸附剂，重新制备。由于存在PCBs污染问题，有时
适合于PCDD/Fs测定的试剂不一定适合DL-PCBs的测定，应该经过检查证实没有干扰后使用。
3.3.1 氧化铝
注：如果内标化合物的回收率能达到要求，则可在酸性氧化铝或碱性氧化铝中选择一种用于样品提取液净化。但所
有样品，包括初始精确度和回收率检查试验，均应使用同样类型的氧化铝。
3.3.1.1 酸性氧化铝：在130 °C 下至少加热活化12 h。
3.3.1.2 碱性氧化铝：在600 °C 下至少加热活化24 h。加热温度不能超过700 ℃，否则其吸附能力降
低。活化后保存在130 ℃的密闭烧瓶中。应在烘烤后五天内使用。
3.3.2 硅胶
3.3.2.1 规格：75μm~250μm 或相当等级的硅胶。
3.3.2.2 活性硅胶：使用前，取硅胶分别用甲醇、二氯甲烷清洗，在180 ℃下至少烘烤1 h或150 ℃下
至少烘烤4 h（最多6 h）。在干燥器中冷却，保存在带螺帽密封的玻璃瓶中。
3.3.2.3 酸化硅胶（44%，质量分数）：称取56 g活性硅胶置于250 mL具塞磨口旋转烧瓶中，在玻璃
棒搅拌下加入44 g硫酸，将烧瓶用旋转蒸发器旋转1 h～2 h，使之混和均匀无结块，置干燥器内，可保存3周。
3.3.2.4 碱化硅胶（33%，质量分数）：称取100g活性硅胶置于250 mL具塞磨口旋转烧瓶中，在玻璃
棒搅拌下逐滴加入49 g NaOH溶液（1 mol/L），将烧瓶用旋转蒸发器中旋转1 h～2 h，使之混和均匀无
结块。将碱化硅胶置干燥器内保存。
3.3.2.5 硝酸银硅胶：称取10 g硝酸银置于100 mL烧杯中，加水40 mL溶解。将该溶液转移至250 mL
旋转烧瓶中，慢慢加入90 g活性硅胶，在旋转蒸发器中旋转1 h～2 h，使之干燥并混和均匀。取出后，
在干燥器中冷却，置于褐色玻璃瓶内保存。
3.3.3 弗罗里土
3.3.3.1 规格：150μm~250μm。使用前，称取500 g，装入索氏提取器中，
用适量正己烷:二氯甲烷（1:1，体积比）提取24 h。
3.3.3.2 含水1%（质量分数）的弗罗里土：称取弗罗里土99.0 g，加水1.0 mL，搅拌均匀，
用带聚氟乙烯螺帽的玻璃瓶封装。
3.3.4 混合活性炭
称取9.0 g Carbopak C（推荐使用Supelco 1-0258，或其他相当的类型） 和41.0 g Celite 545（推荐使
用Supelco 2-0199，或其他相当的类型），充分混和，含活性炭为18%（质量分数)。在130 ℃中至少活
化6 h，在干燥器中保存。
3.4 其他材料
3.4.1 无水硫酸钠（Na2SO4）：优级纯。
3.4.2 硫酸（H2SO4）：优级纯。
3.4.3 氢氧化钠（NaOH）：优级纯。
3.4.4 硝酸银（AgNO3）：优级纯。
3.4.5 草酸纳（Na2C2O4）：优级纯。
3.4.6 玻璃棉：使用前以二氯甲烷及正己烷回流48 h，用氮气吹干后，置于棕色瓶内备用。
3.4.7 凝胶色谱填料：Bio-Beads S-X3，38μm~75μm。
3.4.8 硅藻土（选用）：加速溶剂萃取用。
3.5 参考基质
玉米油或其他植物油。基质中未检出PCDD/Fs和DL-PCBs为最理想的情况。由于环境中PCBs的广
泛存在，植物油中可能存在背景水平的PCBs，
作为基质时要求其背景水平不得超过附录C表C.1中的检测限的值。
4 仪器和设备
4.1 高分辨气相色谱-高分辨质谱仪(HRGC-HRMS)。
4.2 气相色谱柱，不同的目标物应选用不同的气相色谱柱：
a)用于 PCDD/Fs 检测：DB-5ms（5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷）柱，60 m×0.25 mm×0.25 μm 或
等效色谱柱；RTX-2330（90%双氰丙基-10%苯基氰丙基聚硅氧烷）,
60 m×0.25 mm×0.1 μm 或等效色谱柱；
b)用于 DL-PCBs 检测：DB-5ms 柱，60 m×0.25 mm×0.25 μm 或等效色谱柱。
4.3 组织匀浆器。
4.4 绞肉机。
4.5 冻干机。
4.6 旋转蒸发器。
4.7 氮气浓缩器。
4.8 超声波清洗器。
4.9 振荡器。
4.10 索氏提取器。
4.11 天平：感量为 0.1 mg。
4.12 恒温干燥箱：用于烘烤和贮存吸附剂，能够在 105 ℃~250 ℃范围内保持恒温（±5 ℃）。
4.13 玻璃层析柱：带聚四氟乙烯柱塞，150 mm×8 mm，300 mm×15 mm。
4.14 全自动样品净化系统（选用）：配备酸碱复合硅胶柱、氧化铝和活性炭净化柱。
4.15 凝胶色谱系统（GPC）（选用，手动或自动系统）：玻璃柱（内径 15 mm～20 mm），内装 50 g
S-X3 凝胶。
4.16 高效液相色谱仪（HPLC）（选用）：包括泵、自动进样器、六通转换阀、检测器和馏分收集器，
配备 Hypercarb（100 mm×4.6 mm，5 μm）或相当色谱柱。
4.17 加速溶剂萃取仪（选用）。
5 试样制备与净化
5.1 样品采集与保存
5.1.1 现场采集的样品用避光材料如铝箔、棕色玻璃瓶等包装，
置冷冻箱中运输到实验室，–10 ℃以下低温保存。
5.1.2 液体或固体样品，如鱼、肉、蛋、奶等经过匀浆使其匀质化后可使用冷冻干燥或无水硫酸钠干
燥，混匀。油脂类样品可直接用正己烷溶解后进行净化分离。
5.2 试样制备
5.2.1 溶剂和提取液的旋转蒸发浓缩
5.2.1.1 连接旋转蒸发器，将水浴锅预热至 45 ℃。在试验开始前，预先将 100 mL 正己烷:二氯甲烷
（1:1，体积比）作为提取溶剂浓缩，以清洗整个旋转蒸发仪系统。如有必要，对经浓缩后的溶剂以及
收集瓶中的溶剂进行检验，以便对污染状况进行检查。在两个浓缩样品之间，分三次用 2 mL～3 mL 溶
剂洗涤旋转蒸发仪接口，用烧杯收集废液。
5.2.1.2 将装有样品提取液的茄形瓶连接到旋转蒸发器上，缓慢抽真空。
5.2.1.3 将茄形瓶降至水浴锅中，调节转速和水浴的温度（或真空度），使浓缩在 15 min～20 min 内
完成。在正确的浓缩速度下，流入废液收集瓶中的溶剂流量应保持稳定，
溶剂不能有爆沸或可见的沸腾现象发生。
注：如果浓缩过快，可能会使样品损失。
5.2.1.4 当茄形瓶中溶剂约为 2 mL 时，将茄形瓶从水浴锅中移开，停止旋转。缓慢并小心地向旋转
蒸发仪中放气，确保打开阀门时不要太快，以免样品冲出茄形瓶。用 2 mL 溶剂洗涤接口，用烧杯收集废液。
5.2.2 索氏提取
5.2.2.1 提取前，在索氏提取器中装入一支空的纤维素或玻璃纤维提取套筒，以正己烷:二氯甲烷（1:1，
体积比）为提取溶剂，预提取 8 h 后取出晾干。
5.2.2.2 将下列处理好的样品装入提取套筒中（附录 D 图 D.1），高度以不超过溢流管为限。在提取
套筒中加入适量 13C12 标记的定量内标的储备溶液（3.2.1.3），用玻璃棉盖住样品，平衡 30 min 后装入
索氏提取器，以适量正己烷:二氯甲烷（1:1，体积比）为溶剂提取 18 h～24 h，回流速度控制在 3 次/h～4 次/h。
鱼、肉、蛋、奶等样品：称取 50 g～200 g 样品（精确到 0.001 g），经过冷冻干燥后，准确称重，
计算含水量。根据估计的污染水平，称取适量试样（精确到 0.001 g），加无水硫酸钠研磨，制成能自
由流动的粉末。将粉末全部转移至处理好的提取套筒，置于索氏抽提器中进行提取。
奶酪等固体乳制品样品：将奶酪直接研成细末后称量，其他固体乳制品直接称量。称取适量试样（通
常为 10 g，精确到 0.001 g），置研钵中，加无水硫酸钠，研磨成干燥的、可以自由流动的粉末。无水
硫酸钠与海砂混合物使用量取决于试样的取样量及含水量。将粉末全部移至处理好的提取套筒。用沾有
正己烷的棉签将研钵、表面皿和研磨棒擦净。该棉签一同放入套筒中进行提取。
注：当已知样品含量或估计其含量较高时，应适当减少用于分析的试样量。所有试样、空白试验、初始精密度及回
收率试验（IPR）、过程精密度及回收率试验（OPR）应具有相同的分析过程，以便检查污染来源及损失情况。
5.2.2.3 提取后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。
5.2.2.4 茄形瓶中的残留物用少量正已烷溶解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加
入净化标准溶液（3.2.1.2），但日常的分析中该步骤可省略。
5.2.2.5 若结果报告需报告脂肪含量，则需要测定样品的脂肪含量。测定脂肪含量后，可以加少量正
己烷溶解，以备进行净化处理。
5.2.2.6 脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结
果的差值为试样的脂肪量。
5.2.3 液液萃取
5.2.3.1 依情况准确量取液体奶样样品 200 mL～300 mL，转移至大小合适的分液漏斗中，加入适量
13C12 标记的定量内标的储备溶液（3.2.1.3）。
5.2.3.2 按 20 mg/g 样品的比例称取草酸钠，加少量水溶解后，将该溶液加入样品，充分振摇。
5.2.3.3 加入与样品等体积的乙醇，再进行振摇。
5.2.3.4 在样品-乙醇溶液中加入与 5.2.3.3 等体积的乙醚:正己烷（2:3，体积比），振摇 1 min。静置
分层后，转移出有机相。然后在水相中加入与样品原始体积相同的正己烷，振摇 1 min。静置分层后，
转移出有机相。合并有机相，浓缩至小于 75 mL。
5.2.3.5 转移提取液至 250 mL 分液漏斗中，加入 30 mL 蒸馏水振摇，弃去水相。
5.2.3.6 转移上层有机相至 250 mL 烧瓶中，加入适量无水硫酸钠，振摇。静置 30 min 后，用一张经
过甲苯淋洗过的滤纸过滤，滤液置于茄形瓶中。
5.2.3.7 将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如需测定脂肪含量，
则按 5.2.2.6 步骤进行脂肪含量的测定。
5.2.3.8 茄形瓶中的残留物用少量正已烷溶解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加
入净化标准溶液（3.2.1.2），但日常的分析中该步骤可省略。
5.2.4 加速溶剂萃取
5.2.4.1 提取前应将所用萃取池以正己烷:二氯甲烷（1:1，体积比）进行清洗。
5.2.4.2 将下列处理好的样品装入萃取池中。萃取池中应预先放入醋酸纤维素过滤膜。在萃取池中加
入适量 13C12 标记的定量内标的储备溶液（3.2.1.3），密闭后，放于萃取仪上，以正己烷:二氯甲烷（1:1，
体积比）为溶剂提取。参考条件为：温度，150 ℃；压力，10.3MPa（1500 psi）；
循环，1 次；静态时间，10 min。
鱼、肉、蛋等含水量较高样品：称取 50 g～200 g 样品（精确到 0.001 g），经过冷冻干燥后，准
确......
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