路径: 主页 > MISC > 第284页 > MZT140-2019 | 标准编号 | MZ/T 140-2019 (MZ/T140-2019) | | 中文名称 | 殡仪场所致病菌检测技术规范 | | 英文名称 | Technical specifications for examination of pathogenic bacteria in funeral home | | 行业 | Chinese Industry Standard (推荐) | | 中标分类 | C59 | | 字数估计 | 12,127 | | 发布日期 | 2019-12-12 | | 实施日期 | 2019-12-12 | | 标准依据 | 民政部公告第467号 | | 发布机构 | 民政部 | MZ/T 140-2019: 殡仪场所致病菌检测技术规范
MZ/T 140-2019 英文名称: Technical specifications for examination of pathogenic bacteria in funeral home
中 华 人 民 共 和 国 民 政 行 业 标 准
中华人民共和国民政部 发 布
1 范围
本标准规定了各类殡仪场所致病菌的采样及检测检验方法。
本标准适用于殡仪馆、火葬场、骨灰堂、公墓、殡仪服务站、殡仪车等固定和流动殡仪场所。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 23287 殡葬术语
3 术语和定义
GB/T 23287界定的及下列术语和定义适用于本文件。
4 细菌总数
4.1 检测方法
采用撞击法或自然沉降法采样、营养琼脂培养基培养计数的方法测定殡仪场所空气中的细菌总数。
4.2 撞击法
4.2.1 仪器和设备
六级筛孔撞击式空气微生物采样器、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、平皿（直径90 mm）。
4.2.2 培养基
4.2.2.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调节 pH 值为 7.2～7.6，定容至 1000 mL，121 ℃高压
灭菌 20 min。将灭菌好的营养琼脂以 15 mL 倾注直径为 90 mm 的培养皿，置 4 ℃备用。
4.2.3 采样
4.2.3.1 采样点
按房间的大小和位置设置采样点。采样布点方法为:室内面积≤30 m2时，设内、中、外对角线3点，
内、外点布点部位距墙壁1 m处；室内面积＞30 m2时，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1 m处。
采样点距离地面高度1.2 m～1.5 m。
4.2.3.2 采样方法
采样时，将六级筛孔撞击式微生物采样器放在各采样点，流量计设置28.3 L/min，采样时间5 min～
15 min，采样结束后，立即盖好平皿盖。
4.2.4 检验步骤
将采集细菌后的营养琼脂平皿放入36 ℃±1 ℃培养箱，培养48 h后计数菌落。
试验采样完成后，应将未用的同批培养基，与上述试验样本同时进行培养或接种后培养，作为阴性
对照。阴性对照组若有菌生长，说明所用培养基有污染，试验无效，更换后按4.2.2、4.2.3、4.2.4步
骤重新检测。
4.2.5 结果报告
4.2.5.1 采样点细菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按以下公式计算空气中细菌总数。
4.2.5.2 一个区域细菌总数测定结果：一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌
总数测定值中的最大值给出。
4.3 自然沉降法
4.3.1 仪器和设备
高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、平皿（直径90 mm）、采样支架。
4.3.2 培养基
见4.2.2。
4.3.3 采样
4.3.3.1 采样点：见4.2.3.1。
4.2.3.1 采样方法：将营养琼脂平板置于采样点，打开皿盖，暴露5 min。
4.3.4 检验步骤
见4.2.4。
4.3.5 结果报告
计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验结果以每平皿菌落数（cfu/
皿）给出。
5 溶血性链球菌
5.1 检测方法
采用撞击法采样、血琼脂培养基培养计数的方法测定殡仪场所中的β-溶血性链球菌。
5.2 仪器和设备
见4.2.1。
5.3 培养基
5.3.1 血琼脂平板成分：
蛋白胨 10.0 g
牛肉膏 3.0 g
氯化钠 5.0 g
琼脂 20.0 g
脱纤维羊血 5 mL ~10 mL
蒸馏水 1000 mL
5.3.2 制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正pH值为7.4~7.6，加入琼脂，121 ℃
高压灭菌20 min。待冷却至50 ℃，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀倾皿。
5.4 采样
见4.2.3。
5.5 检验步骤
5.5.1 培养方法：采样后的血琼脂平板在36 ℃±1 ℃下培养24 h～48 h。
5.5.2 结果观察：培养后，在血琼脂平板上形成灰白色、表面突起、直径 0.5 mm～0.7 mm的细小菌落，
菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列，受
培养与操作条件影响，链的长度在 4个～8个细胞或几十个细胞之间；菌落周围有明显的 2 mm～4 mm
界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的为β-溶血性链球菌。
5.6 结果报告
5.6.1 采样点溶血性链球菌结果计算：菌落计数，记录结果并按以下公式计算空气中β-溶血性链球菌
菌落总数。
5.6.2 一个区域溶血性链球菌测定结果：一个区域空气中溶血性链球菌的测定结果按该区域全部采样点
中β-溶血性链球菌测定值中的最大值给出。
6 大肠菌群
6.1 检测方法
器具上大肠菌群的测定方法为多管发酵法。
6.2 培养基和试剂
6.2.1 生理盐水
氯化钠 9.0 g
蒸馏水 1000 mL
制法：称取 9.0 g 氯化钠溶于 1000 mL 蒸馏水中，分装到试管内，每管 10 mL，121 ℃高压灭菌 20
min。
6.2.2 营养琼脂
见4.2.2.1。
6.2.3 乳糖胆盐培养液
蛋白胨 20.0 g
猪胆盐 5.0 g
乳糖 5.0 g
0.4%溴甲酚紫水溶液 2.5 mL
蒸馏水 1000 mL
制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于 1000 mL 蒸馏水中，调整 pH 为 7.2～7.5 加入指示剂，充分
混匀，分装于含有小管（倒管）的试管中。115 ℃高压灭菌 30 min，贮存于冷暗处备用。
6.2.4 伊红美蓝培养基 (EMB培养基)
蛋白胨 10.0 g
乳糖 10.0 g
磷酸氢二钾 2.0 g
琼脂 17.0 g
2%伊红水溶液 20 mL
0.5%美蓝水溶液 13 mL
蒸馏水 1000 mL
制法：将琼脂加到 900 mL 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再
加入蒸馏水补足至 1000 mL，调整 pH 为 7.2～7.5。趁热用脱脂棉和纱布过滤，再加入乳糖，混匀，定
量分装于烧瓶内，115 ℃高压灭菌 30 min，贮存于冷暗处备用。
临用时，加热融化储备培养基，待冷至 60 ℃左右，据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌
的 2%伊红水溶液和 0.5%美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡），倾注平皿备用。
6.2.5 乳糖发酵管
蛋白胨 20.0 g
乳糖 10.0 g
0.4%溴甲酚紫水溶液 2.5 mL
蒸馏水 1000 mL
制法：将蛋白胨及乳糖溶解于蒸馏水中，调整 pH 为 7.2～7.5 加入指示剂，分装于含有小管（倒管）
的试管中，每管 3 mL，115 ℃高压灭菌 30 min，贮存于冷暗处备用。
6.2.6 革兰氏染色液
购买已配置好的革兰氏染色液，常温阴凉处备用。
6.3 仪器和设备
高压灭菌锅、干热灭菌箱、恒温培养箱、冰箱、电炉、天平、旋涡混合器、无菌试管、平皿、刻度
吸管、灭菌棉拭子、pH 计。
6.4 样品采集
随机抽取清洗消毒后准备使用的公共用品，无菌操作，使用灭菌干燥的棉拭子，于 10 mL 灭菌生理
盐水内浸润后，在用品用具的适当部位均匀涂抹并进行样品采集，再用灭菌剪刀剪去棉签与手接触的部
分，将棉拭子放入剩余的 9 mL 的生理盐水中，4 h 内送检。
采样要求：与人体接触处涂抹采样，采样面积需达到 25 cm2以上/样品。
6.5 检测分析步骤
6.5.1 样品的稀释
将放有采样后棉拭子的试管充分振摇，制成 1:10 稀释样品。全过程需在无菌操作台中进行。
6.5.2 乳糖胆盐发酵试验
将检样倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中，置于 36 ℃±1 ℃培养箱内培养 24 h,观察是否产酸产气，
如不产酸、不产气则为大肠菌群阴性。若有变黄和气体产生，则按照下列步骤进行。
6.5.3 分离培养
自产酸、产气发酵管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置 36 ℃±1 ℃培养箱内培
养 18 h～24 h。然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
深紫色、具有金属光泽的菌落；
紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；
淡紫红色、中心较深的菌落。
6.5.4 证实性试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落 1个～2 个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，置 36 ℃
±1 ℃培养箱内培养 24 h，做好记录。
6.6 计算与结果
凡乳糖发酵管最终产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。
7 金黄色葡萄球菌
7.1 检测方法
器具上金黄色葡萄球菌的测定方法为平皿鉴定法。
7.2 培养基和试剂
7.2.1 胰酪胨肉汤培养基
胰酪胨(或胰蛋白胨) 17 g
植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3 g
氯化钠 100 g
磷酸氢二钾 2.5 g
葡萄糖 2.5 g
蒸馏水 1000 mL
制法：将上述成分混合溶解后，调节 pH 值为 7.2~7.3，分装，121 ℃高压灭菌 20 min。
7.2.2 氯化钠肉汤培养基
蛋白胨 10.0 g
牛肉膏 3.0 g
氯化钠 75.0 g
蒸馏水 1000 mL
制法：将上述成分加热溶解，调 pH 值为 7.4，分装，121 ℃高压灭菌 20 min。
7.2.3 Baired Parker 平板
胰蛋白胨 10 g
牛肉膏 5 g
酵母浸膏 1 g
丙酮酸钠 10 g
甘氨酸 12 g
氯化锂 5 g
琼脂 20 g
蒸馏水 950 mL
增菌剂的配制：卵黄盐水（30%，体积分数）50 mL，与除菌过滤的碲酸钾（质量浓度为 1%）10 mL
混合，保存于冰箱中。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷却至 25 ℃，校正 pH 值 7.0±0.2。分每瓶
95 mL, 121 ℃高压灭菌 15 min。临用时加热融化琼脂，每 95 mL 加入加热到 50 ℃的卵黄亚碲酸钾增
菌剂 5 mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存，不得超过 48 h。
7.3 仪器和设备
高压蒸汽灭菌器、恒温水浴锅、冰箱、电炉、天平、平皿（直径 90 mm）、刻度吸管、pH 计或精密
pH 试纸、显微镜、旋涡混合器、离心机。
7.4 检验方法及步骤
7.4.1 采样：对物体的表面进行采样时，用浸有无菌生理盐水的棉拭子，在物体的把手处直接涂抹采样。
剪去手接触棉拭子的部分，将棉拭子放入装有10 mL已灭菌过的采样液的试管内，采样后4 h内检验。
7.4.2 将 1 mL 样品放入 9 mL 氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基中，36 ℃±1 ℃培养 24 h。
7.5 检测分析步骤
7.5.1从培养液中取 1接......
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