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标准编号 | GB 1886.322-2021 (GB1886.322-2021) | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品添加剂 可溶性大豆多糖 | 英文名称 | National food safety standard - Food additives - Soluble soybean polysaccharide | 行业 | 国家标准 | 中标分类 | X09 | 字数估计 | 9,974 | 发布日期 | 2021-02-22 | 实施日期 | 2021-08-22 | 标准依据 | 国家卫生健康委员会公告2021年第3号 |
GB 1886.322-2021: 食品安全国家标准 食品添加剂 可溶性大豆多糖
GB 1886.322-2021 英文名称: National food safety standard - Food additives - Soluble soybean polysaccharide
1 范围
本标准适用于以大豆或大豆粕为原料,经脱脂、提取、纯化、灭菌、干燥等工艺生产的食品添加剂可
溶性大豆多糖。
2 主成分的结构式
3 技术要求
3.1 感官要求
感官要求应符合表1的规定。
3.2 理化指标
理化要求应符合表2的规定。
3.3 微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
附 录 A
检验方法
A.1 一般规定
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中
所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时,均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
A.2 鉴别试验
A.2.1 试剂和材料
A.2.1.1 氢氧化钠。
A.2.1.2 磷酸二氢钠。
A.2.1.3 标准相对分子质量对照品:普鲁兰多糖,P-5(MW6200Da)、P-20(MW23000Da)、P-50
(MW48800Da)、P-400(MW348000Da)、P-800(MW805000Da)。或者在普鲁兰多糖P-5~P-800之间选择5个以上标准品制定标准曲线。
A.2.2 试剂配制
A.2.2.1 4mol/L氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠,用水溶解至100mL,混匀。
A.2.2.2 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液:称取15.6g磷酸二氢钠(A.2.1.2),用水溶解至1L,混匀,用
4mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8。
A.2.2.3 标准相对分子质量溶液:分别称取标准相对分子质量对照品(A.2.1.3)10.0mg,加0.1mol/L
磷酸二氢钠缓冲溶液(A.2.2.2)溶解并定容至10mL。
A.2.3 仪器和设备
A.2.3.1 高效液相色谱仪,附示差折光检测器。
A.2.3.2 分析天平,感量0.1mg。
A.2.4 参考色谱条件
A.2.4.1 色谱柱:TSK-gelG5000PWXL7.8mm×300mm,或者满足条件的其他凝胶柱。
A.2.4.2 柱温:40℃。
A.2.4.3 流动相:0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(pH6.8)。
A.2.4.4 流速:0.6mL/min。
A.2.4.5 进样量:10μL,20μL。
A.2.5 分析步骤
A.2.5.1 标准曲线
分别取20μL标准相对分子质量溶液(A.2.2.3)注入高效液相色谱仪,进行高效液相色谱分析,记
录色谱峰保留时间tR(min)。用lg(MW)对色谱峰保留时间作标准曲线,见图A.1。
图A.1 标准品相对分子质量与保留时间测定标准曲线示意图
A.2.5.2 试样溶液制备
称取样品1.0g,用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(A.2.2.2)溶解并定容至100mL,混匀,用
0.2μm~0.45μm 水系膜过滤,收集滤液,作为试样溶液。
A.2.5.3 测定
在相同条件下,取10μL试样溶液(A.2.5.2)注入高效液相色谱仪,进行高效液相色谱分析,记录色
谱峰保留时间tR(min)。根据保留时间tR(min)在图A.1中查出试样液各峰lg(MW)并计算出 MW。
A.2.5.4 判断
可溶性大豆多糖典型高效液相色谱图见图A.2,其中4个峰相对分子质量范围分别为4.00×105~
6.50×105、1.00×105~3.00×105、1.50×104~3.50×104、2.00×103~1.00×104。如果试样溶液高效液相色谱图出现2~4个色谱峰,并且峰值在上述相对分子质量范围内,则判断试样是可溶性大豆多糖。
如果谱图中色谱峰是1个,或者色谱峰是2~4个,但峰值不在上述相对分子质量范围内,则判断试样不
是可溶性大豆多糖。
A.3 可溶性多糖含量的测定
A.3.1 方法提要
试样经酶解,收集滤液并用乙醇沉淀,过滤、洗涤残渣并干燥至恒质后,减去其中蛋白质、灰分和试
剂空白含量,即为试样中可溶性多糖含量。
A.3.2 试剂
A.3.2.1 氢氧化钠。
A.3.2.2 2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(MES)。
A.3.2.3 三羟甲基氨基甲烷(TRIS)。
A.3.2.4 热稳定α-淀粉酶液:CAS9000-85-5,酶活力为10000U/mL±1000U/mL,于0℃~5℃冰
箱储存,酶的活性测定及判定标准应符合GB 5009.88-2014附录A的要求。
A.3.2.5 蛋白酶液:CAS9014-01-1,酶活力为300U/mL~400U/mL,于0℃~5℃冰箱储存,酶的活
性测定及判定标准应符合GB 5009.88-2014附录A的要求。
A.3.2.6 淀粉葡萄糖苷酶液:CAS9032-08-0,酶活力为2000U/mL~3300U/mL,于0℃~5℃冰箱
储存,酶的活性测定及判定标准应符合GB 5009.88-2014附录A的要求。
A.3.2.7 盐酸。
A.3.2.8 硅藻土:CAS68855-54-9。
A.3.2.9 重铬酸钾。
A.3.2.10 硫酸。
A.3.2.11 95%乙醇。
A.3.2.12 丙酮。
A.3.3 试剂配制
A.3.3.1 6mol/L氢氧化钠溶液:称取24g氢氧化钠,用水稀释至100mL,混匀。
A.3.3.2 0.05mol/LMES-TRIS缓冲液:称取19.52g2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(MES)和12.2g三羟甲
基氨基甲烷(TRIS),用1.7L水溶解,根据室温用6mol/L氢氧化钠溶液调pH,20℃时调pH为8.3,
24℃时调pH为8.2,28℃时调pH为8.1,20℃~28℃之间其他室温用插入法校正pH。加水稀释至
2L。
A.3.3.3 蛋白酶溶液:用0.05mol/LMES-TRIS缓冲液稀释蛋白酶液(A.3.2.5)至50mg/mL,使用前
现配并于0℃~5℃冰箱暂存。
A.3.3.4 2mol/L盐酸溶液:取167mL盐酸,用水稀释至1L,混匀。
A.3.3.5 酸洗硅藻土:取200g硅藻土于600mL的2mol/L盐酸溶液中,浸泡过夜,过滤,用水洗至滤
液为中性,置于525℃±5℃马弗炉中灼烧灰分后备用。
A.3.3.6 重铬酸钾洗液:称取100g重铬酸钾,用200mL水溶解,加入1800mL浓硫酸混合。
A.3.3.7 6mol/L盐酸溶液:取50mL盐酸,用50mL水稀释,混匀。
A.3.3.8 0.6mol/L盐酸溶液:取93.5mL6mol/L盐酸溶液,用水稀释至1L。
A.3.3.9 1mol/L盐酸溶液:取8.33mL盐酸,用水稀释至100mL,混匀。
A.3.3.10 78%乙醇溶液:取821mL95%乙醇,用水稀释并定容至1L容量瓶中,混匀。
A.3.4 仪器和设备
A.3.4.1 高型烧杯:500mL。
A.3.4.2 马弗炉:525℃±5℃。
A.3.4.3 烘箱:130℃±3℃,105℃±2℃。
A.3.4.4 过滤坩埚:孔径40μm~60μm,清洗后的坩埚在525℃马弗炉中灼烧6h,炉温降至130℃以
下取出,于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h,用水冲洗干净,再用15mL丙酮冲洗后风干。用前,加入约
1.0g硅藻土(A.3.3.5),在130℃烘箱中烘2h,取出坩埚,置于干燥器中冷却约0.5h,称量,再复烘
0.5h,直至恒质,记录坩埚及硅藻土质量(m0),精确到0.1mg。
A.3.4.5 真空抽滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器。备1L抽滤瓶,侧壁有抽滤口,带有与抽滤瓶
配套的橡胶塞,用于酶解液抽滤。
A.3.4.6 恒温水浴锅:控温范围25℃~100℃,温度波动±1℃。
A.3.4.7 磁力搅拌器。
A.3.4.8 分析天平:感量0.1mg和1mg。
A.3.4.9 干燥器:装有有效的二氧化硅或同等的干燥剂。
A.3.4.10 pH 计:具有温度补偿功能,精度±0.1。用前用pH4.0、pH7.0和pH10的标准缓冲液
校准。
A.3.5 操作步骤
A.3.5.1 称量:准确称取双份试样(m)约1g(精确至0.1mg),双份试样质量差≤0.005g。将试样分别
置于500mL高型烧杯中,加入0.05mol/LMES-TRSI缓冲溶液(A.3.3.2)40mL,磁力搅拌直至试样
完全分散在缓冲液中(搅拌均匀,避免试样结成团块,以防止试样酶解过程中不能与酶充分接触)。同时
制备两个空白样液与试样液进行同步操作,用于校正试剂对测定的影响。
A.3.5.2 热稳定α-淀粉酶酶解:用移液枪向试样液中分别加入50μL热稳定α-淀粉酶液(A.3.2.4),用
铝箔覆盖(或加盖表面皿)后置于95℃水浴锅中持续搅拌,当水浴温度升至95℃开始计时,连续反应
30min。将烧杯取出,冷却至60℃,打开铝箔盖,用刮勺轻轻将附着于烧杯内壁上的胶状物刮下,并用
10mL水冲洗烧杯壁和刮勺。
A.3.5.3 蛋白酶酶解:将试样溶液置于60℃水浴中,向每个烧杯中加入100μL蛋白酶溶液(A.3.3.3),
用铝箔覆盖(或加盖表面皿)后连续搅拌,反应30min。打开铝箔盖,边搅拌边加入5mL0.6mol/L盐
酸溶液,在60℃条件下,用1mol/L盐酸溶液调节试样溶液pH至4.0~4.7。
A.3.5.4 淀粉葡萄糖苷酶酶解:加入300μL淀粉葡萄糖苷酶液(A.3.2.6),用铝箔覆盖(或加盖表面皿)
后,继续于60℃水浴中持续搅拌,反应30min。
A.3.5.5 抽滤洗涤:取丙酮处理的过滤坩埚(A.3.4.4),加入1g硅藻土(A.3.3.5),用3mL水湿润过滤
坩埚中的硅藻土,并用抽滤装置将硅藻土均匀铺在坩埚滤层上,继续抽气,将上述酶消化液转移至坩埚
中抽滤。用10mL70℃水洗涤烧杯、残渣两次。合并滤液并转移至预先称量的500mL高型烧杯中,
称量并记录滤液的体积。
A.3.5.6 沉淀:加入4倍于滤液体积并预热至60℃的95%乙醇,或用水将滤液调整至总质量为80g
后,加入320mL60℃的95%乙醇,室温静置1.0h。
A.3.5.7 抽滤:用15mL78%乙醇溶液湿润已......
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