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| 标准编号 | GB 31656.15-2022 (GB31656.15-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National Food Safety Standards Determination of Mebendazole and Its Metabolite Residues in Aquatic Products-Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 字数估计 | 10,130 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | GB 31656.15-2022: 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB 31656.15-2022 英文名称: (National Food Safety Standards Determination of Mebendazole and Its Metabolite Residues in Aquatic Products-Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量
的测定 液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照 GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了水产品中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑残留量检测的制样和
液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于鱼、虾和鳖可食组织中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑残留量
的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规则和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,用液相色谱Ｇ
串联质谱法检测,内标法定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５１２ 乙酸乙酯(CH３COOHC２H５):色谱纯.
５１３ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１４ 正己烷(C６H１４):色谱纯.
５１５ 二甲基亚砜[(CH３)２SO]:色谱纯.
５２ 溶液的配制
５２１ ５０mmol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠８９５g,用水溶解并稀释至５００mL.
５２２ ０１％甲酸溶液:取０５mL甲酸,加水溶解并稀释至５００mL,混匀.
５２３ 甲醇Ｇ０１％甲酸溶液(５０∶５０,V/V):取甲醇、０１％的甲酸溶液等体积混匀.
５３ 标准品
甲苯咪唑(MBZ),含量≥９９０％;羟基甲苯咪唑(MBZＧOH),含量≥９９０％;氨基甲苯咪唑(MBZＧ
NH２),含量≥９９０％;氘代甲苯咪唑(MBZＧD３),含量≥９９５％;氘代羟基甲苯咪唑(MBZＧOHＧD３),含量
≥９９０％.具体见附录A.
５４ 标准溶液的制备
５４１ 标准储备液(１００μg/mL):取甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑标准品各１０mg,精密称
定,分别用１０mL二甲基亚砜溶解,加甲醇稀释定容至１００mL容量瓶,摇匀.-１８℃以下保存,有效期３
个月.
５４２ 混合标准工作液:精密量取甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑标准储备液各１mL,用甲
醇Ｇ０１％甲酸溶液稀释配制成浓度为１０００ng/mL、１００ng/mL、１０ng/mL３个浓度混合标准工作液.现
用现配.
５４３ 内标标准储备液(１００μg/mL):取氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑标准品各１０mg,精密称定,
分别用１０mL二甲基亚砜溶解,用甲醇稀释定容至１００mL容量瓶,摇匀.-１８℃以下保存,有效期３
个月.
５４４ 混合内标工作液:精密量取氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑内标标准储备液各１mL,用甲醇Ｇ
０１％甲酸溶液稀释成含氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑浓度分别为５０ng/mL和１０ng/mL的混合
内标工作液.现用现配.
５５ 材料
微孔尼龙滤膜:０２２μm.
６ 仪器和设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪(LCＧMS/MS):配电喷雾离子源(ESI).
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 离心机:８０００r/min.
６４ 涡旋混合器.
６５ 超声波清洗仪.
６６ 氮吹仪.
６７ 具塞聚丙烯离心管:５０mL.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
按GB/T ３０８９１-２０１４附录B的要求制样.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试样的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确至±００５g),于５０mL具塞离心管,准确加入混合内标工作液１００μL,涡旋振荡
２min,加５０mmol/L的磷酸氢二钠溶液５mL,涡旋振荡１min,加乙酸乙酯６mL,涡旋振荡１min,
８０００r/min离心６min,收集上清液(乙酸乙酯层),残渣加乙酸乙酯３mL重复提取１次,合并上清液,
备用.
８２ 净化
取备用液,４０℃氮气吹干,用甲醇Ｇ０１％甲酸溶液２０mL溶解残留物,加正己烷２mL,涡旋振荡
１min,８０００r/min离心６min,弃去上层正己烷层,重复去脂１次,取澄清液,过０２２μm滤膜,供液相色
谱Ｇ串联质谱仪测定.
８３ 标准曲线的制作
精密量取标准工作液和内标工作液适量,用甲醇Ｇ０１％甲酸溶液稀释成甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和
羟基甲苯咪唑的浓度均为０５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、
１００ng/mL系列标准工作液(内标氘代甲苯咪唑浓度为２５ng/mL、氘代羟基甲苯咪唑为０５ng/mL),
供液相色谱Ｇ串联质谱测定.分别以各药物浓度与内标物浓度的比值为横坐标(x)、各药物的峰面积与同
位素内标峰面积的比值为纵坐标(y)绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(１００mm×２１mm,粒径３μm),或性能相当者;
b) 柱温:３０℃;
c) 进样量:１０μL;
d) 流速:０２mL/min;
e) 流动相:A为甲醇;B为０１％甲酸溶液,梯度洗脱程序见表１.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源(ESI);
b) 扫描方式:正离子扫描;
c) 喷雾电压:３５００V;
d) 鞘气压力:３０L/min;
e) 辅助气压力:１５L/min;
f) 离子传输管温度:３５０℃;
g) 源内碰撞诱导解离电压:１２V;
h) 检测方式:选择反应监测(SRM),选择反应监测母离子、子离子、碰撞能量见表２;
i) Q１半峰宽:０４Da;
j) Q３半峰宽:０７Da;
k) 碰撞气压力:氩气,０２Pa.
８４３ 测定法
８４３１ 定性测定
在同样测试条件下,试料溶液中甲苯咪唑及其代谢物的保留时间与标准工作液中的保留时间之比,偏
差在±２５％以内,且检测到的离子相对丰度,应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致,其允许偏差
应符合表３的要求.
８４３２ 定量测定
取试料溶液和标准工作液,作单点或多点校准,甲苯咪唑以氘代甲苯咪唑为内标,羟基甲苯咪唑和
氨基甲苯咪唑以氘代羟基甲苯咪唑为内标,以色谱峰面积定量,内标法计算.标准溶液及试料溶液中
目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.标准溶液特征离子质量色
谱图见附录B.
８５ 空白试验
取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中待测物的残留量......
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