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| 标准编号 | GB 4789.28-2024 (GB4789.28-2024) | | 中文名称 | 食品安全国家标准--食品微生物学检验--培养基和试剂的质量要求 | | 英文名称 | National Food Safety Standards--Food Microbiology Testing--Quality Requirements for Medium and Reagents | | 行业 | 国家标准 | | 字数估计 | 64,620 | | 发布日期 | 2/8/2024 | GB 4789.28-2024: 食品安全国家标准--食品微生物学检验--培养基和试剂的质量要求
GB 4789.28-2024 英文版: National Food Safety Standards--Food Microbiology Testing--Quality Requirements for Medium and Reagents
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品安全国家标准
食品微生物学检验
培养基和试剂的质量要求
2024-02-08发布
2024-08-08实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
1 范围
本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求。
本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。
2 术语和定义
2.1 质量控制
为满足质量要求所采取的技术操作和活动。
2.2 培养基和试剂的批次
培养基和试剂完整的可追溯单位,是指在特定的生产周期生产,符合生产质量要求的一定数量的产
品,这些产品批号相同。
2.3 培养基和试剂的性能
在一定条件下培养基和试剂对测试菌株的反应。
2.4 培养基
液体、半固体或固体形式的,含天然或合成成分,用于保证微生物繁殖、鉴定或保持其活力的物质。
2.5 液体培养基
由含有一种或多种成分的水溶液组成的培养基(如:缓冲蛋白胨水)。
2.6 固体培养基
在液体培养基中加入一定量固化物(如:琼脂),经煮沸或湿热灭菌处理,冷却至室温后凝固成固体
状态的培养基。
倾注到平皿内的固体培养基一般称作“平板”;倒入试管并倾斜摆放的固体培养基,当培养基凝固后
通常称作“斜面”。
2.7 半固体培养基
在液体培养基中加入少量固化物(如:琼脂),经煮沸或湿热灭菌处理,冷却后成半固体状态的培
养基。
2.8 运输培养基
在取样后至实验室处理前,保护和维持微生物活性,且不允许微生物明显增殖或减少的培养基。
运输培养基中通常不含使微生物增殖的物质,但是培养基应能保护菌株(如:缓冲甘油-氯化钠溶液
运输培养基)。
2.9 保藏培养基
用于在一定期限内保护和维持微生物活力,防止长期保存对其不利的影响,或使其在长期保存后容
易复苏的培养基(如:营养琼脂斜面)。
2.10 悬浮培养基
将测试样品的微生物分散到液相中,在整个接触过程中不产生增殖或抑制作用的培养基(如:磷酸
盐缓冲液)。
2.11 复苏培养基
能够使受损或应激的微生物修复,使微生物恢复正常生长能力,但不一定促进微生物繁殖的培养基
(如:胰蛋白胨大豆肉汤)。
2.12 增菌培养基
通常为液体培养基,能够给微生物繁殖提供特定的生长环境。
2.13 选择性增菌培养基
能够允许特定的微生物在其中繁殖,而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基(如:TTB培
养基)。
2.14 非选择性增菌培养基
能够保证多种微生物生长的培养基(如:营养肉汤)。
2.15 分离培养基
支持微生物生长的固体或半固体培养基。
2.16 选择性分离培养基
支持特定微生物生长而抑制其他微生物生长的固体培养基(如:XLD琼脂)。
2.17 非选择性分离培养基
对微生物没有选择性抑制的固体培养基(如:营养琼脂)。
2.18 鉴别培养基(特异性培养基)
能够进行一项或多项微生物生理和(或)生化特性鉴定的培养基(如:伊红美蓝琼脂)。
注:能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离(鉴别)培养基(如:XLD琼脂)。
2.19 鉴定培养基
能够产生一个或多个特定的鉴定反应而通常不需要进一步确证试验的培养基(如:乳糖发酵管)。
注:用于分离的鉴定培养基被称为分离(鉴定)培养基。
2.20 计数培养基
能够对微生物进行定量计数的选择性(如:MYP琼脂)或非选择性培养基(如:平板计数琼脂)。
注:计数培养基可包含复苏和(或)增菌培养基的特性。
2.21 参比培养基
依据培养基配方特别制备,质量优良的培养基,用于培养基的质量控制,以保证食品微生物检验用
培养基的质量。
参比培养基需由具备相应检验能力,并取得通过国家认证认可资质检验机构出具的检测报告。
2.22 商品化即用型培养基
以即用形式或熔化后即用形式置于容器(如:平皿、试管或其他容器)或载体内供应的液体、固体或
半固体培养基:
---完全可即用的培养基(如:测试片等);
---需重新熔化的培养基(如:用于平板倾注技术);
---使用前需重新熔化、分装(如:倾注到平皿)的培养基(如:制剂培养基);
---使用前需重新熔化,添加物质并分装的培养基(如:TSC培养基和BairdParker琼脂)。
注:测试片的测试方法及评定标准参照附录F,无法参照附录F部分(如菌落形态)可参考生产企业提供的操作说明
来执行。
2.23 商品化脱水合成培养基
使用前需加水和进行处理的干燥培养基(如粉末、小颗粒、冻干等形式):
---完全培养基,使用的时候无须加入其他成分;
---不完全培养基,使用的时候需加入添加剂。
2.24 自制培养基
依据培养基完整配方的具体成分,实验室自行制备的培养基。
2.25 试剂
用于食品微生物检验的试剂和培养基配制的配套试剂。
2.26 测试菌株
通常用于培养基性能测试的微生物。
注:测试菌株根据其来源不同(见2.27~2.30)可进一步定义。
2.27 标准菌株
直接从专业菌种保藏机构获得并至少定义到属或种水平的菌株。按菌株特性进行分类和描述,最
好来源于食品、水或其生产环境中的菌株。
2.28 标准储备菌株
将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。
2.29 储备菌株
从标准储备菌株转接一代获得的独立菌株。
2.30 工作菌株
由标准物质/标准样品或标准储备菌株、储备菌株转接一代获得的直接用于测试使用的菌株。
注:标准物质/标准样品是指含有一定数量活菌,符合预期用途并足够均匀和稳定的材料。
3 培养基及试剂质量保证
3.1 证明文件
3.1.1 生产企业提供的文件
生产企业应提供以下资料(可提供电子文本):
---培养基或试剂的各种成分、添加成分名称及产品编号;
---批号;
---pH(适用于培养基);
---贮存信息和有效期;
---标准要求及质控报告;
---必要的安全和(或)危害数据。
3.1.2 产品的交货验收
对每批产品,应记录接收日期,并检查:
---产品合格证明材料;
---包装的完整性;
---产品的有效期;
---其他必要的文件材料。
3.2 贮存
3.2.1 一般要求
应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行培养基和试剂的保存和使用。
3.2.2 商品化脱水合成培养基及其添加成分
验收应包括以下内容:
---容器密闭性检查;
---内容物的感官检查。
开封后的脱水合成培养基,其质量取决于贮存条件。通过观察粉末或颗粒的流动性、均匀性、结块
情况和色泽变化等,判断脱水培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变,则不应
再使用。
3.2.3 商品化即用型培养基和试剂
应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用。
3.2.4 实验室自制培养基
在保证其成分不会改变条件下保存,即避光、干燥保存,必要时在2℃~8℃冰箱中保存,通常建议
平板保存期不超过4周,瓶装及试管装培养基保存期不超过6个月。
如需在培养基中添加不稳定的添加剂,应即配即用;含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养
基也应即配即用,不可二次熔化。
培养基的贮存应建立经验证的有效期。观察培养基是否有颜色变化、蒸发(脱水)或微生物生长的
情况,当培养基发生这类变化时,应禁止使用。
培养基使用或再次加热前,应先取出平衡至室温。
3.3 培养基的实验室制备
3.3.1 一般要求
正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一,使用脱水培养基和其他成分,尤其是含有有毒有
害物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基
的不正确制备会导致培养基出现质量问题(见附录B)。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配制,如质量(体积)、
pH、制备日期、灭菌条件和操作步骤等。
实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息,如培养基名称和
类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的
方式、温度及时间)、配制日期、人员等,以便溯源。
3.3.2 水
试验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.04ΜΩ/cm),除非另有规定
要求。
试验用水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB 4789.2定期检验微生物污染水平。
3.3.3 称重和溶解
准确称量所需量的脱水合成培养基(必要时佩戴口罩或在通风柜或抽气罩下操作,以防吸入培养基
粉末等有害物质),先加入适量的水,充分混合(注意避免培养基结块),然后加水至所需的量后适当加
热,并重复或连续搅拌使其快速分散,含琼脂的培养基在加热溶解前应浸泡3min~5min。
3.3.4 pH的测定和调节
除特殊说明外,灭菌后pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为1mol/L的氢氧化钠溶
液或盐酸溶液调节培养基的pH。
3.3.5 分装
将配好的培养基分装至适当容器中,培养基体积不应超过容器容积的2/3。
3.3.6 灭菌/除菌
3.3.6.1 一般要求
培养基应采用湿热灭菌法(见3.3.6.2)或过滤除菌法(见3.3.6.3)。
某些培养基如不适用湿热灭菌或过滤除菌的方式,则可使用煮沸杀菌方式处理。
3.3.6.2 湿热灭菌
具体培养基应按食品微生物学检验标准中的规定或者商品使用说明进行灭菌。
如培养基体积超过1000mL,应使用生物指示剂或相应设备进行灭菌效果验证。所有的操作应按
照标准或使用说明的规定进行。
加热后采用适当的方式冷却,以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要,例如含有煌绿
的培养基。
3.3.6.3 过滤除菌
过滤除菌可使用孔径为0.22μm的无菌设备和滤膜过滤去除微生物。
3.4 培养基的使用
3.4.1 琼脂培养基的熔化
将培养基放入沸水浴中或采用有相同效果的方法(如高压锅中的层流蒸汽)使之熔化。经过高压的
培养基应尽量减少重新加热时间。熔化后的培养基放入47℃~50℃的恒温装置中冷却保温(可根据
实际培养基凝固温度适当提高恒温装置温度),直至使用,培养基达到47℃~50℃的时间与培养基的
品种、体积和数量有关。熔化后的培养基应尽快使用,放置时间不应超过4h。未用完的培养基不能重
新凝固留待下次使用。
3.4.2 培养基的脱氧
将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min;加热时松开容器的盖子,加热后盖紧,并迅
速冷却至使用温度(如液体硫乙醇酸盐培养基)。
3.4.3 添加成分的加入
待培养基冷却至47℃~50℃时,加入平衡至室温的热不稳定添加成分,避免造成琼脂凝结或形成
片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀,尽快分装至待用......
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