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| 标准编号 | GB 4789.40-2016 (GB4789.40-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验 | | 英文名称 | National Food Safety Standard -- Food Microbiological Examination -- Examination of Cronobacter (Enterobacter Sakazakii) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X09 | | 字数估计 | 12,189 | | 发布日期 | 2016-12-23 | | 实施日期 | 2017-06-23 | | 旧标准 (被替代) | GB 4789.40-2010; SN/T 1632.1-2013 | | 标准依据 | National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016 | GB 4789.40-2016: 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验
GB 4789.40-2016 英文名称: National Food Safety Standard -- Food Microbiological Examination -- Examination of Cronobacter (Enterobacter Sakazakii)
1 范围
本标准规定了食品中克罗诺杆菌属(Cronobacter)的检验方法。
本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1 恒温培养箱:25℃±1℃,36℃±1℃,44℃±0.5℃。
2.2 冰箱:2℃~5℃。
2.3 恒温水浴箱:44℃±0.5℃。
2.4 天平:感量0.1g。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶:容量100mL、200mL、2000mL。
2.9 无菌培养皿:直径90mm。
2.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.11 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂
3.1 缓冲蛋白胨水:见A.1。
3.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素
3.3 阪崎肠杆菌显色培养基。
3.4 胰蛋白胨大豆琼脂(trypticasesoyagar,TSA):见A.3。
3.5 生化鉴定试剂盒。
3.6 氧化酶试剂:见A.4。
3.7 L-赖氨酸脱羧酶培养基:见A.5。
3.8 L-鸟氨酸脱羧酶培养基:见A.6。
3.9 L-精氨酸双水解酶培养基:见A.7。
3.10 糖类发酵培养基:见A.8。
3.11 西蒙氏柠檬酸盐培养基:见A.9。
第一法 克罗诺杆菌属定性检验
4 检验程序
克罗诺杆菌属检验程序见图1。
图1 克罗诺杆菌属检验程序
5 操作步骤
5.1 前增菌和增菌
取检样100g(mL)置灭菌锥形瓶中,加入900mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水,用手缓缓地摇
动至充分溶解,36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤,44℃±0.5℃
培养24h±2h。
5.2 分离
5.2.1 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物,各取增菌培养物1环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色
培养基平板,显色培养基须符合GB 4789.28的要求,36℃±1℃培养24h±2h,或按培养基要求条件
培养。
5.2.2 挑取至少5个可疑菌落,不足5个时挑取全部可疑菌落,划线接种于TSA平板。25℃±1℃培
养48h±4h。
5.3 鉴定
自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落,进行生化鉴定。克罗诺杆菌属的主要生化特征见表1。可
选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
6 结果与报告
综合菌落形态和生化特征,报告每100g(mL)样品中检出或未检出克罗诺杆菌属。
第二法 克罗诺杆菌属的计数
7 操作步骤
7.1 样品的稀释
7.1.1 固体和半固体样品:无菌称取样品100g、10g、1g各三份,分别加入900mL、90mL、9mL已预
热至44℃的BPW,轻轻振摇使充分溶解,制成1∶10样品匀液,置36℃±1℃培养18h±2h。分别移
取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤,44℃±0.5℃培养24h±2h。
7.1.2 液体样品:以无菌吸管分别取样品100mL、10mL、1mL各三份,分别加入900mL、90mL、
9mL已预热至44℃的BPW,轻轻振摇使充分混匀,制成1∶10样品匀液置36℃±1......
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