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[PDF] GB 5009.158-2016 - 自动发货, 英文版

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GB 5009.158-2016 英文版 115 GB 5009.158-2016 3分钟内自动发货[PDF],有增值税发票。 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定 有效

基本信息
标准编号 GB 5009.158-2016 (GB5009.158-2016)
中文名称 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定
英文名称 National Food Safety Standard -- Determination of Vitamin K1 in Foods
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 15,160
发布日期 2016-12-23
实施日期 2017-06-23
旧标准 (被替代) GB 5413.10-2010; GB/T 5009.158-2003
标准依据 National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016

GB 5009.158-2016: 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定
GB 5009.158-2016 英文名称: National Food Safety Standard -- Determination of Vitamin K1 in Foods
1 范围
本标准规定了食品中维生素K1 的测定方法。
本标准第一法为高效液相色谱-荧光检测法,第二法为液相色谱-串联质谱法,均适用于各类配方食
品、植物油、水果和蔬菜中维生素K1 的测定。
第一法 高效液相色谱-荧光检测法
2 原理
婴幼儿食品和乳品、植物油等样品经脂肪酶和淀粉酶酶解,正己烷提取样品中的维生素K1 后,用
C18液相色谱柱将维生素K1 与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。
水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素K1,经中性氧化铝柱净化,去
除叶绿素等干扰物质。用C18液相色谱柱将维生素K1 与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检
测,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 无水乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.2 碳酸钾(K2CO3)。
3.1.3 无水硫酸钠(Na2SO4)。
3.1.4 异丙醇(C3H8O)。
3.1.5 正己烷(C6H14)。
3.1.6 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.1.7 四氢呋喃(C4H8O):色谱纯。
3.1.8 乙酸乙酯(C4H8O2)。
3.1.9 冰乙酸(CH3COOH):色谱纯。
3.1.10 氯化锌(ZnCl2):色谱纯。
3.1.11 无水乙酸钠(CH3COONa)。
3.1.12 氢氧化钾(KOH)。
3.1.13 脂肪酶:酶活力≥700U/mg。
3.1.14 淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
3.1.15 锌粉:粒径50μm~70μm。
3.2 试剂配制
3.2.1 40%氢氧化钾溶液:称取20g氢氧化钾于100mL烧杯中,用20mL水溶解,冷却后,加水至
50mL,储存于聚乙烯瓶中。
3.2.2 磷酸盐缓冲液(pH8.0):溶解54.0g磷酸二氢钾于300mL水中,用40%氢氧化钾溶液调节pH
至8.0,加水至500mL。
3.2.3 正己烷-乙酸乙酯混合液(90+10):量取90mL正己烷,加入10mL乙酸乙酯,混匀。
3.2.4 流动相:量取甲醇900mL,四氢呋喃100mL,冰乙酸0.3mL,混匀后,加入氯化锌1.5g,无水乙
酸钠0.5g,超声溶解后,用0.22μm有机系滤膜过滤。
3.3 标准品
维生素K1(C31H46O2,CAS号:84-80-0):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准
物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 维生素K1 标准贮备溶液(1mg/mL):准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素K1 标准品于50
mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存
期2个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参照附录A。
3.4.2 维生素K1 标准中间液(100μg/mL):准确吸取标准贮备溶液10.00mL于100mL容量瓶中,加
甲醇至刻度,摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月。
3.4.3 维生素K1 标准使用液(1.00μg/mL):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲
醇至刻度,摇匀。
3.4.4 标准系列工作溶液:分别准确吸取维生素K1 标准使用液0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、
2.00mL、4.00mL于10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,维生素 K1 标准系列工作溶液浓度分别为
10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL。
3.5 材料
3.5.1 中性氧化铝:粒径50μm~150μm。
3.5.2 中性氧化铝柱:2g/6mL,填料中含10%水,可直接购买商品柱,也可自行装填。
注:中性氧化铝柱装填方法:
a) 填料处理:取200g中性氧化铝于500mL的广口瓶中,于150℃干燥箱中烘烤2h,加盖后于干燥器中冷
却至室温,缓慢加入20mL纯水,边加边摇,加完后加上瓶盖,放入80℃烘箱中3min~5min,取出后,剧
烈振摇,直至瓶内氧化铝自由流动,无结块,置于干燥器中冷却30min,备用。
b) 层析柱装填:取6mL的针筒式柱套,加入筛板,称取2.00g上述经脱活化处理的填料,再加入一块筛板,
用装填工具压紧。
3.5.3 锌柱:柱长50mm,内径4.6mm,锌柱可直接购买商品柱,也可自行装填。
注:
a) 锌柱填装方法:将锌粉密集装入不锈钢材质的柱套(柱长50mm,内径4.6mm)中。装柱时,应连续少量多次将锌粉装入柱中,边装边轻轻拍打,以使装入的锌粉紧密。
b) 锌柱接入仪器前,须将液相色谱仪所用管路中的水排干。
3.5.4 微孔滤头:带0.22μm有机系微孔滤膜。
4 仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪:带荧光检测器。
4.2 匀浆机。
4.3 高速粉碎机。
4.4 组织捣碎机。
4.5 涡旋振荡器。
4.6 恒温水浴振荡器。
4.7 pH计:精度0.01。
4.8 天平:感量为1mg和0.1mg。
4.9 离心机:转速≥6000r/min。
4.10 旋转蒸发仪。
4.11 氮吹仪。
4.12 超声波振荡器。
5 分析步骤
5.1 试样制备
米粉、奶粉等粉状样品经混匀后,直接取样;片状、颗粒状样品,经样本粉碎机磨成粉,储存于样品袋
中备用;液态乳、植物油等液态样品摇匀后,直接取样;水果、蔬菜等取可食部分,水洗干净,用纱布擦去
表面水分,经匀浆器匀浆,储存于样品瓶中备用。制样后,需尽快测定。
5.2 试样处理
警示:处理过程应避免紫外光直接照射,尽可能避光操作。
5.2.1 婴幼儿食品和乳品、植物油
5.2.1.1 酶解
准确称取经均质的试样1g~5g(精确到0.01g,维生素K1 含量不低于0.05μg)于50mL离心管
中,加入5mL温水溶解(液体样品直接吸取5mL,植物油不需加水稀释),加入磷酸盐缓冲液(pH8.0)
5mL,混匀,加入0.2g脂肪酶和0.2g淀粉酶(不含淀粉的样品可以不加淀粉酶),加盖,涡旋2min~
3min,混匀后,置于37℃±2℃恒温水浴振荡器中振荡2h以上,使其充分酶解。
5.2.1.2 提取
取出酶解好的试样,分别加入10mL乙醇及1g碳酸钾,混匀后加入10mL正己烷和10mL水,涡
旋或振荡提取10min,6000r/min离心5min,或将酶解液转移至150mL的分液漏斗中萃取提取,静
置分层(如发生乳化现象,可适当增加正己烷或水的加入量,以排除乳化现象),转移上清液至100mL
旋蒸瓶中,向下层液再加入10mL正己烷,重复操作1次,合并上清液至上述旋蒸瓶中。
5.2.1.3 浓缩
将上述正己烷提取液旋蒸至干(如有残液,可用氮气轻吹至干),用甲醇转移并定容至5mL容量瓶
中,摇匀,0.22μm滤膜过滤,滤液待进样。
不加试样,按同一操作方法做空白试验。
5.2.2 水果、蔬菜样品
5.2.2.1 提取
准确称取1g~5g(精确到0.01g,维生素K1 含量不低于0.05μg)经均质匀浆的样品于50mL离
心管中,加入5mL异丙醇,涡旋1min,超声5min,再加入10mL正己烷,涡旋振荡提取3min,
6000r/min离心5min,移取上清液于25mL棕色容量瓶中,向下层溶液中加入10mL正己烷,重复提
取1次,合并上清液于上述容量瓶中,正己烷定容至刻度,用移液管准确分取上清液1mL~5mL(视样
品中维生素K1 含量而定)至10mL试管中,氮气轻吹至干,加入1mL正己烷溶解,待净化。
5.2.2.2 净化、浓缩
将上述1mL提取液用少量正己烷转移至预先用5mL正己烷活化的中性氧化铝柱中,待提取液流
至近干时,5mL正己烷淋洗,6mL正己烷-乙酸乙酯混合液洗脱至10mL试管中,氮气吹干后,用甲醇
定容至5mL,过0.22μm滤膜,滤液供分析测定。
不加试样,按同一操作方法做空白试验。
5.3 色谱参考条件
a) 色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或具同等性能的色谱柱;
b) 锌还原柱:柱长50mm,内径4.6mm;
c) 流动相:按3.2.4配制;
d) 流速:1mL/min;
e) 检测波长:激发波长为243nm,发射波长为430nm;
f) 进样量:10μL;
g) 标准溶液的色谱图见附录B。
5.4 标准曲线的制作
采用外标标准曲线法进行定量。将维生素K1 标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定
相应的峰面积,以峰面积为纵坐标,以标准系列工作液浓度为横坐标绘制标准曲线,计算线性回归方程。
5.5 试样溶液的测定
在相同色谱条件下,将制备的空白溶液和试样溶液分别进样,进行高效液相色谱分析。以保留时间
定性,峰面积外标法定量,根据线性回归方程计算出试样溶液中维生素K1 的浓度。
6 分析结果的表述
试样中维生素K1 的含量按式(1)计算。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果......
   
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