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| 标准编号 | GB 5009.205-2024 (GB5009.205-2024) | | 中文名称 | 食品安全国家标准--食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定 | | 英文名称 | National food safety standards--Determination of toxic equivalents of dioxins and their analogues in food | | 行业 | 国家标准 | | 字数估计 | 40,457 | | 发布日期 | 2024/2/8 | GB 5009.205-2024: 食品安全国家标准--食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定
GB 5009.205-2024 英文版: National food safety standards--Determination of toxic equivalents of dioxins and their analogues in food
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品安全国家标准
食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
前言
本标准代替GB 5009.205-2013《食品安全国家标准 食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定》。
本标准与GB 5009.205-2013相比,主要变化如下:
---增加了第二法“同位素稀释-气相色谱-三重四极杆质谱法”;
---删除了世界卫生组织(WHO)1998年制定的毒性当量因子(TEF);
---修改了第一法“同位素稀释-气相色谱-磁式高分辨质谱法”部分内容的表述和格式。
食品安全国家标准
食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定
1 范围
本标准规定了食品中17种2,3,7,8-取代的多氯代二苯并二噁英、多氯代二苯并呋喃(PCDD/Fs)
和12种二噁英样多氯联苯(DL-PCBs)含量及其毒性当量(TEQ)(见附录A的表A.1)的测定方法。
第一法“同位素稀释-气相色谱-磁式高分辨质谱法”适用于食品中17种PCDD/Fs和12种DL-
PCBs含量及其TEQ的测定。
第二法“同位素稀释-气相色谱-三重四极杆质谱法”适用于肉及肉制品、水产动物及其制品、乳及乳
制品、蛋及蛋制品和油脂中17种PCDD/Fs和12种DL-PCBs含量及其TEQ的测定。
第一法 同位素稀释-气相色谱-磁式高分辨质谱法
2 原理
试样经提取、净化和浓缩后,采用气相色谱-磁式高分辨质谱仪测定,稳定性同位素稀释法定量;以
各目标化合物的毒性当量因子(TEF)与所测得的含量相乘后累加,计算样品中PCDD/Fs和DL-PCBs
的TEQ。
3 试剂和材料
3.1 试剂
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1.1 丙酮(C3H6O):农残级。
3.1.2 正己烷(C6H14):农残级。
3.1.3 甲苯(C7H8):农残级。
3.1.4 环己烷(C6H12):农残级。
3.1.5 二氯甲烷(CH2Cl2):农残级。
3.1.6 甲醇(CH3OH):色谱级。
3.1.7 正壬烷(C9H20):≥99%。
3.1.8 乙酸乙酯(CH3COOCH2CH3):农残级。
3.1.9 无水硫酸钠(Na2SO4):优级纯。
3.1.10 浓硫酸(H2SO4):优级纯。
3.1.11 氢氧化钠(NaOH):优级纯。
3.1.12 硝酸银(AgNO3):优级纯。
3.1.13 提取用硅藻土:堆积密度18.0g/100mL~36.0g/100mL(如EXtrelutNT,或等效产品)。
3.1.14 凝胶色谱填料:聚苯乙烯凝胶,38μm~75μm(如Bio-BeadsS-X3,或等效产品)。
3.1.15 硅胶:75μm~250μm。
3.1.16 碱性氧化铝:63μm~200μm(如EcoChromTM MPAluminaB-SuperI,或等效产品)。
3.1.17 弗罗里土:150μm~250μm。
3.1.18 活性炭:150μm~180μm(如CarbopackC,Supelco10258,或等效产品)。
3.1.19 净化用硅藻土:26μm(如Celite545AW,Supelco20199-U,或等效产品)。
3.2 试剂配制
3.2.1 活性硅胶:硅胶先后用甲醇和二氯甲烷清洗,待溶剂挥干后在600℃下至少烘烤12h,临用
现配。
3.2.2 酸化硅胶(44%,质量分数):称取112.0g活性硅胶于250mL具塞磨口旋转烧瓶中,加入88.0g
浓硫酸,密闭后置于摇床上振荡,直至硅胶呈均匀流动状态,临用现配。
3.2.3 碱化硅胶(33%,质量分数):称取100.0g活性硅胶于250mL具塞磨口旋转烧瓶中,加入49.0g
1mol/L氢氧化钠溶液,密闭后置于摇床上振荡,直至硅胶呈均匀流动状态,临用现配。
3.2.4 硝酸银硅胶:称取10.0g硝酸银于250mL具塞磨口旋转烧瓶中,加入40mL水使之溶解,再慢
慢加入90.0g活性硅胶,密闭后置于摇床上振荡,直至硅胶呈均匀流动状态,临用现配。
3.2.5 碱性氧化铝:取碱性氧化铝在600℃下活化24h,临用现制。
3.2.6 含水弗罗里土(1%,质量分数):取适量弗罗里土装入索氏提取器中,用正己烷∶二氯甲烷
(1∶1,体积比)提取24h,待溶剂挥干后,称取99.0g,加入1.0mL水,在密闭容器中(如具塞玻璃烧瓶
或具塞玻璃三角瓶)混合均匀,临用现配。
3.2.7 混合活性炭:称取9.0g活性炭和41.0g净化用硅藻土,在密闭容器中(如具塞玻璃烧瓶或具塞
玻璃三角瓶)混和均匀,然后130℃活化6h,临用现配。
3.2.8 无水硫酸钠:取无水硫酸钠在660℃下灼烧6h,临用现制。
3.3 标准溶液
3.3.1 分离度检查标准溶液:含有天然PCDD/Fs的溶液,具体化合物和浓度见附录B的表B.1。
3.3.2 PCDD/Fs同位素标记定量内标标准溶液:含15种13C12-PCDD/Fs的溶液,具体化合物及浓度见
表B.2。
3.3.3 PCDD/Fs同位素标记回收率内标标准溶液:含13C12-1,2,3,4-TCDD和13C12-1,2,3,7,8,9-
HxCDD的溶液,具体浓度见表B.3。
3.3.4 PCDD/Fs校正标准溶液:含有天然和同位素标记的PCDD/Fs系列校正曲线标准溶液,具体化
合物及浓度见表B.4。
3.3.5 DL-PCBs同位素标记定量内标标准溶液:含12种13C12-DL-PCBs的溶液,具体化合物和浓度见
表B.5。
3.3.6 DL-PCBs同位素标记回收率内标标准溶液:含13C12-PCB70、13C12-PCB111和13C12-PCB170溶
液,具体浓度见表B.6。
3.3.7 DL-PCBs校正标准溶液:含有天然和同位素标记的DL-PCBs系列校正曲线标准溶液,具体化合
物及浓度见表B.7。
3.3.8 灵敏度检查标准溶液:含有天然和同位素标记的PCDD/Fs系列标准溶液,具体化合物及浓度见
表B.8。
注:标准溶液于室温下避光保存,保存期为6年。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱-磁式高分辨质谱仪(GC-HRMS)。
4.2 天平:感量为0.1g和0.001g。
4.3 组织匀浆器。
4.4 粉碎机。
4.5 冷冻干燥机。
4.6 旋转蒸发仪。
4.7 氮气浓缩器。
4.8 超声波清洗器。
4.9 摇床。
4.10 索氏提取器,配备提取套筒。
4.11 加速溶剂提取仪(可选)。
4.12 马弗炉:能够在200℃~700℃范围内保持恒温(±10℃)。
4.13 烘箱:能够在105℃~250℃范围内保持恒温(±5℃)。
4.14 玻璃层析柱:带聚四氟乙烯柱塞,150mm(长)×8mm(内径),300mm(长)×15mm(内径)。
4.15 全自动样品净化系统:配备酸碱复合硅胶柱、碱性氧化铝柱和活性炭净化柱。
4.16 凝胶渗透色谱柱(GPC):玻璃柱(内径15mm~20mm),内装50gS-X3凝胶,或等效全自
动GPC。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 一般食品样品:干制食品粉碎均匀后,称取10g~20g(精确到0.01g)备用;乳粉称取15g(精确
到0.01g)备用;其他样品匀质化后,称取50g~200g(精确到0.01g),经过冷冻干燥后备用。
5.1.2 油脂样品:直接称取5g样品(精确到0.01g)于茄形瓶中,加入PCDD/Fs和DL-PCBs同位素标
记定量内标标准溶液各10μL,待净化。
5.2 提取
5.2.1 索氏提取
提取前,在索氏提取器(4.10)中装入一支空的提取套筒,以正己烷∶二氯甲烷(1∶1,体积比)为提
取溶剂,以3次/h~4次/h的回流速度预提取8h后取出晾干。
将试样(5.1.1)置于陶瓷研钵中,加入无水硫酸钠研磨,制成能自由流动的粉末。转移至预先清洗
的套筒中,分别加入PCDD/Fs和DL-PCBs同位素标记定量内标标准溶液各10μL,用玻璃棉盖住样
品,平衡30min后装入索氏提取器中,以正己烷∶二氯甲烷(1∶1,体积比)为提取溶剂,以3次/h~
4次/h的回流速度提取18h~24h。
5.2.2 加速溶剂提取
将试样(5.1.1)置于陶瓷研钵中,研磨后与适量硅藻土混合均匀,转移至提取池中,分别加入PCDD/
Fs和DL-PCBs同位素标记定量内标标准溶液各10μL,密闭后置于加速溶剂提取仪上提取,提取参考
条件为:提取溶剂:正己烷∶二氯甲烷(1∶1,体积比);压力:10.3MPa;温度:150℃;静态提取时间:
10min;循环1次。
5.2.3 脂肪称量
准确称量茄形瓶重量m1(精确至0.01g),将提取液(5.2.1或5.2.2)转移至茄形瓶中,用旋转蒸发仪
将溶剂蒸干后准确称重m2(精确至0.01g),然后按式(1)计算样品中脂肪含量:
5.3 脂肪去除
5.3.1 酸化硅胶除脂
用150mL正己烷溶解试样(5.1.2)或称量脂肪后的试样(5.2.3),再加入50g酸化硅胶(44%,质量
分数),用旋转蒸发仪在大气压下以60℃旋转加热20min。静置8min~10min后,将上清液倒入茄形
瓶中。再用50mL正己烷清洗瓶中的酸化硅胶,合并上清液至该茄形瓶中。如果酸化硅胶颜色较深,
则应重复上述过程,直至酸化硅胶为浅黄色。将合并后的上清液用旋转蒸发仪浓缩至3mL~5mL,供
下一步净化用。浓缩过程中避免暴沸。
5.3.2 凝胶渗透色谱除脂
分别以甲苯、环己烷∶乙酸乙酯(1∶1,体积比)冲洗凝胶渗透色谱柱(GPC),然后用5mL~10mL
环己烷∶乙酸乙酯(1∶1,体积比)溶解试样(5.1.2)或称量脂肪后的试样(5.2.3),用10mL环己烷∶乙
酸乙酯(1∶1,体积比)分两次洗涤茄形瓶,一并转入柱内。先用100mL环己烷∶乙酸乙酯(1∶1,体积
比)淋洗,再用90mL环己烷∶乙酸乙酯(1∶1,体积比)以1滴/s~2滴/s的流速洗脱,用茄形瓶接收
洗脱液,再用旋转蒸发仪浓缩至3mL~5mL,供下一步净化用。浓缩过程中避免暴沸。
根据实验室条件,选择使用酸化硅胶除脂和/或凝胶渗透色谱除脂。
5.4 净化分离
5.4.1 填充柱净化
5.4.1.1 复合硅胶柱净化
取内径15mm玻璃层析柱,底部填以适量玻璃棉,依次装入2g活性硅胶、5g碱化硅胶、2g活性
硅胶、10g酸化硅胶、2g活性硅胶、5g硝酸银硅胶、2g活性硅胶和2g无水硫酸钠,干法装柱,轻敲层
析柱,使其分布均匀。
先用150mL正已烷预淋洗,当液面降至无水硫酸钠层上方约2mm时,关闭柱阀,弃去淋洗液。
检查层析柱,如果出现沟流现象应重新装柱。加入除脂浓缩后的提取液,并用5mL正己烷分两次洗涤
茄形瓶(5.3),一并加入柱中,打开柱阀,当液面降至无水硫酸钠层时,加入400mL正己烷,以1滴/s~
2滴/s的流速洗脱,用茄形瓶收集洗脱液,用旋转蒸发仪浓缩至3mL~5mL,供下一步净化用。浓缩
过程中避免暴沸。
5.4.1.2 碱性氧化铝柱分离
取内径15mm玻璃层析柱,底部填以适量玻璃棉,依次装入25g碱性氧化铝、10g无水硫酸钠。
干法装柱,轻敲层析柱,使其分布均匀。先用150mL正已烷预淋洗,当液面降至氧化铝上方约2mm
时,关闭柱阀。弃去淋洗液。检查层析柱,如果出现沟流现象应重新填柱。加入经混合硅胶柱净化的提
取液,并用5mL正己烷分两次洗涤茄形瓶(5.4.1.1),一并加入柱中。用60mL正己烷淋洗氧化铝柱,
弃去淋洗液。用90mL甲苯以1mL/min~2mL/min流速洗脱,用茄形瓶收集洗脱液,供DL-PCBs分
析用。再用200mL正已烷∶二氯甲烷(1∶1,体积比)以1滴/s~2滴/s的流速洗脱,用茄形瓶收集洗
脱液,供PCDD/Fs分析用。各洗脱液分别用旋转蒸发仪浓缩至1mL~2mL,再加入50mL正己烷,
浓缩至1mL~2mL。浓缩过程中避免暴沸。
5.4.1.3 碱性氧化铝柱净化
含PCDD/Fs组分洗脱液的进一步净化:取内径8mm玻璃层析柱,底部填以适量玻璃棉,依次装
入2.5g碱性氧化铝和2g无水硫酸钠。干法装柱,轻敲层析柱,使其分布均匀。用20mL正已烷预淋
洗,弃去淋洗液。加入浓缩后洗脱液。用40mL正己烷∶二氯甲烷(98∶2,体积比)淋洗,弃去淋洗液。
用30mL正已烷∶二氯甲烷(1∶1,体积比)以1滴/s~2滴/s的流速洗脱,用茄形瓶收集洗脱液,用旋
转蒸发仪浓缩至1mL~2mL。浓缩过程中避免暴沸。
含DL-PCBs组分洗脱液的进一步净化:取内径8mm玻璃层析柱,底部填以适量玻璃棉,依次装入
2.5g碱性氧化铝和2g无水硫酸钠。干法装柱,轻敲层析柱,使其分布均匀。用30mL正已烷∶二氯
甲烷(99∶1,体积比)预淋洗,弃去淋洗液。加入浓缩后的洗脱液,用15mL正已烷∶二氯甲烷(1∶1,
体积比)以1滴/s~2滴/s的流速洗脱,用茄形瓶收集洗脱液,用旋转蒸发仪浓缩至1mL~2mL。浓
缩过程中避免暴沸。
5.4.2 全自动样品净化系统净化
将酸碱复合硅胶柱、碱性氧化铝柱和活性炭净化柱等按顺序连接在全自动样品净化系统上,按程序
配好各洗脱溶液并连接好管路(参见图D.1),将除脂浓缩后的提取液转移到全自动样品净化系统的进
样管。按照洗脱程序顺序洗脱(参见表D.1),对样品进行净化、分离,用茄形瓶分别收集含PCDD/Fs和
DL-PCBs组分的洗脱液,用旋转蒸发仪浓缩至1mL~2mL,再加入50mL正己烷,浓缩至1mL~
2mL。浓缩过程中避免暴沸。
根据实验室条件,选择使用填充柱净化或全自动样品净化系统净化,若PCDD/Fs净化效果无法满
足测定要求,可选择活性炭柱和/或弗罗里土柱进一步净化。
5.4.3 补充净化方法
5.4.3.1 活性炭柱净化
取10mL一次性玻璃移液管,切除两端,制成约10cm长玻璃管,装入适量玻璃棉并塞紧,再装入
0.55g混合活性炭,随后装入适量玻璃棉压实并塞紧。先后用如下溶液进行预淋洗:5mL甲苯、2mL
二氯甲烷∶甲醇∶甲苯(15∶4∶1,体积比)溶液、1mL二氯甲烷∶环己烷(1∶1,体积比)溶液和5mL
正己烷。如果流速超过0.5mL/min,则弃用该活性炭柱。将浓缩到约1mL的PCDD/Fs组分净化液
(5.4.1.3)移入活性炭柱,然后用1mL正己烷洗涤原瓶两次,并移入活性炭柱内。分别以3mL正己烷、
2mL二氯甲烷∶环己烷(1∶1,......
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