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| 标准编号 | GB/T 38475-2020 (GB/T38475-2020) | | 中文名称 | 色素中生物毒素检测 胶体金快速定量法 | | 英文名称 | Detection of mycotoxins in pigment - Rapid quantitative method of colloidal gold strip test | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | A21 | | 国际标准分类 | 07.080 | | 字数估计 | 7,772 | | 发布日期 | 2020-11-19 | | 实施日期 | 2020-11-19 | | 标准依据 | 国家标准公告2020年第26号 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 38475-2020: 色素中生物毒素检测 胶体金快速定量法
GB/T 38475-2020 英文名称: Detection of mycotoxins in pigment -- Rapid quantitative method of colloidal gold strip test
1 范围
本标准规定了用胶体金快速定量法检测天然色素产品中生物毒素的方法。
本标准适用于基于天然产物提取及发酵制备的天然色素产品中黄曲霉素B1、桔青霉素、玉米赤霉
烯酮、呕吐毒素的快速定量检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样提取液中的生物毒素在层析过程中与检测试剂条中胶体金微粒标记的特异性抗体竞争结合并
发生呈色反应,颜色深浅与试样中生物毒素含量相关。用读数仪检定检测条上检测线和质控线颜色深
浅,根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中生物毒素含量。
4 试剂或材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯。
4.1 水
GB/T 6682,二级水。
4.2 黄曲霉毒素B1
纯度≥98%。
4.3 桔青霉素
纯度≥98%。
4.4 玉米赤霉烯酮
纯度≥98%。
4.5 呕吐毒素
纯度≥98%。
4.6 苯+乙腈混合液
量取98.0mL苯,加2.0mL乙腈,混匀。
4.7 稀释缓冲液
称取2.4228g三羟甲基氨基甲烷,加水溶解,调pH=8.0;加入9.0g氯化钠、5mLTritonX-100,
用水定容至1000mL;或采用商品化的同类产品。
4.8 70%(体积分数)甲醇溶液提取液
取70.0mL的甲醇加水30.0mL,混匀。
4.9 PBS缓冲溶液
称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾,用水溶解,调节pH至7.0,用
水定容至1000mL。
4.10 0.1%(体积分数)吐温20-PBS溶液
移取1mL吐温20,以PBS缓冲溶液定容至1000mL。
4.11 0.1%(体积分数)磷酸溶液
准确移取1mL磷酸,加水定容至1000mL。
4.12 0.1mg/L的生物毒素标准储备液
分别准确称取一定量的生物毒素标准品,用苯+乙腈(98∶2)溶液溶解,容量瓶定容至10mL,配制
0.1mg/L的生物毒素标准储备液,保存于4℃备用,可保存1年。
5 仪器设备
5.1 天平:精度0.01g和0.01mg。
5.2 粉碎机:转速不低于3000r/min。
5.3 离心机:转速不低于3000×g。
5.4 涡旋振荡器。
5.5 读数仪:可测定并显示胶体金免疫层析试纸条的检测结果。
5.6 胶体金免疫层析检测试纸条:性能要求见附录A。
5.7 微量移液器。
5.8 免疫亲和柱:柱体积规格1mL或3mL,柱容量不低于200ng,或等效柱。
6 样品制备
6.1 试样取样
按照GB/T 5491执行。
6.2 试样制备
6.2.1 固体样品
天平称取有代表性的固体或样品500g,其中300g用粉碎机粉碎至全部通过20目筛,混匀,分两
份密封冷冻保存。取一份保存样品准确称取2.0g试样于10mL具塞锥形瓶中,加入20.0mL70%甲
醇溶液提取液,密闭,用涡旋振荡器振荡2min~3min,静置后用滤纸过滤,或取1.5mL混合液于离心
管中,用离心机离心1min。取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中,加900μL于稀释缓冲液,
充分混匀待测。如样品为特殊材料,需将稀释后的混合液用针头过滤器过滤,即为待测液。
6.2.2 液体样品
液体待测样品用均质器,处理不少于2min,充分混匀后,用微量移液器分别吸取1.0mL加入2个
2.0mL离心管中,一份密封冷冻保存,一份用于检测。从待测离心管中吸取200μL离心液体样品于另
一离心管中,加入1.8mL稀释缓冲液,充分混匀待测。
6.2.3 净化
将免疫亲和柱连接在10mL玻璃针筒下,准确移取10.0mL上述样品滤液过免疫亲和柱,以
1滴/s~2滴/s的流速全部通过亲和柱;加入10mL0.1%吐温20-PBS溶液,以1滴/s~2滴/s的流速
淋洗柱子,直至空气进入到亲和柱中,弃去全部流出液。准确加入1.0mL洗脱液进行洗脱,洗脱流速
为1滴/s~2滴/s。收集全部洗脱液于离心管中备用。
注:净化处理仅针对红曲红等对胶体金反应结果产生严重背景干扰的色素产品。
7 测定
7.1 低温保存的检测试纸条取出后,室温放置20min~30min。
7.2 胶体金试剂条:将试纸条浸入含300μL~500μL待测溶液的离心管中,室温孵育5min。
7.3 胶体金检测卡:将60μL~80μL待测溶液加入到检测孔中,室温孵育5min。
7.4 宜选择胶体金检测试纸条或检测卡生产厂家的读数仪配套使用。
8 结果分析
8.1 反应结束后,取出胶体金免疫层析检测试纸条或检测卡观察C线(质控线)和T线(检测线)的显
色情况。若出现C线不出现,或C线出现但弥散或严重不均匀,或C线出现但T线弥散或严重不均匀,
均视为无效检测。
8.2 调整读数仪参数,固定好胶体金检测试纸条或检测卡,对目标毒素进行检测,测定需要在2min内
完成,重复测定3次,读数仪根据内置拟合曲线自动计算并显示样品中相应生物毒素的含量,单位为微
克每千克(μg/kg)或微克每升(μg/L)。
8.3 在相应生物毒素的检测范围内,基于阴性对照样品,设置空白样品添加的不同浓度梯度,其中黄曲
霉毒素B1 浓度范围为2μg/kg~128μg/kg;桔青霉素浓度范围为40μg/kg~640μg/kg;呕吐毒素浓
度范围为300μg/kg~14400μg/kg;玉米赤霉烯酮浓度范围为40μg/kg~1920μg/kg。基于标准样
品......
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