路径: 主页 > SN/T > 第70页 > SN/T 5205-2020 | 标准编号 | SN/T 5205-2020 (SN/T5205-2020) | | 中文名称 | 柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法 | | 英文名称 | (Quarantine and identification method of Boping melon mosaic virus) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 12,170 | | 发布日期 | 2020-12-30 | | 实施日期 | 2021-07-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2020年第136号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5205-2020: 柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法
SN/T 5205-2020 英文名称: (Quarantine and identification method of Boping melon mosaic virus)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本文件按照 GB/T 1.1-2020 的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布
结构不承担识别这些专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国厦门海关、中华人民共和国青岛海关。
本文件主要起草人：陈青、陈红运、迟海英，林振基、方志鹏、黄峰、廖富荣、林石明。
柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法
1 范围
本文件规定了柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法。
本文件适用于可能带有柏平缕瓜花叶病毒的植物种子、苗木及产品的检疫鉴定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
4 原理
学名：Pepino mosaic virus
缩写：PepMV
分类地位：甲型线状病毒科（Alphaflexiviridae），马铃薯 X 病毒属（Potexvirus）的成员抗原特性
和基因组特征是检疫鉴定的主要依据。
详细资料参见附录 A。
5 主要仪器设备与试剂
5.1 主要仪器设备和用具
微量研磨仪、酶标仪、洗板机、微量天平（感量：0.001g）、PCR 仪、电泳仪、水平电泳槽、凝
胶成像仪、高速冷冻台式离心机、制冰机、旋涡震荡器、水浴槽、pH 计、可调移液器（1000 μL、
200 μL、20 μL、2 μL）、96 孔酶标板、研钵等。
5.2 主要试剂
主要试剂和缓冲液见附录 B、C、D。
6 检测样品的制备
6.1 种子样品制备
挑取畸形、不成熟种子在防虫网室内播于灭菌土中，待长出 3 片～ 4 片真叶后将表现症状的植株
编号，未表现症状的植株分组（10 株为 1 组）并编号，采集的真叶分成 2 份，根据需要分别用于后
续的试验。种子也可以直接检测。
6.2 苗木和植物产品
有症状（如叶片畸形、花叶、斑驳等）的苗木和植物产品编号单独检测。没有症状的分组并编号
检测，分组方法和检测方法同 6.1。
7 检测与鉴定
7.1 双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）
设阴性对照和阳性对照（健康的植物组织作阴性对照，感染了 PepMV 的植物组织作阳性对照），
样品提取缓冲液作空白对照，其中阴性对照种类和材料（如种子或叶片）应尽量与检测样品一致。不
同的检测试剂或试剂盒根据试剂或试剂盒的说明操作。具体操作见附录 B。
7.2 一步法 RT-PCR 检测
分别提取样品和对照的总 RNA，RT-PCR 一步法进行 PCR 扩增。健康的植物组织作阴性对照，
感染 PepMV 的植物组织作阳性对照，用 ddH2O 作空白对照。具体操作见附录 C。
7.3 一步法实时荧光 RT-PCR 检测
分别提取样品和对照的总 RNA，进行一步法实时荧光 RT-PCR 检测。健康的植物组织作阴性对照，
感染 PepMV 的植物组织作阳性对照，ddH2O 作空白对照。具体操作见附录 D。
8 结果判定
酶联检测为阳性后，RT-PCR 或实时荧光 RT-PCR 检测为阳性即可判断为样品携带柏平缕瓜花叶
病毒。
9 结果记录与样品保存
9.1 结果记录
完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有
经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联板反应的原始数据；PCR 检测需有电泳结果照片，实
时荧光 RT-PCR......
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