| 标准编号 | GB 29685-2013 (GB29685-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定 气相色谱-质谱法 | | 英文名称 | Determination of Lincomycin, Clindamycin and Spectinomycin residues in animal derived food by Gas Chromatography Mass Spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 11,159 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于猪、牛和鸡的肌肉和肾脏以及牛奶和鸡蛋中林可霉素、克林霉素和大观霉素单个或多个药物残留量的检测。 | GB 29685-2013
Determination of Lincomycin, Clindamycin and Spectinomycin residues in animal derived food by Gas Chromatography Mass Spectrometric method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观
霉素多残留的测定 气相色谱-质谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观
霉素多残留的测定 气相色谱-质谱法
1 范围
本标准规定了动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素残留量检测的制样和气相色谱-质谱测
定方法。
本标准适用于猪、牛和鸡的肌肉和肾脏以及牛奶和鸡蛋中林可霉素、克林霉素和大观霉素单个或多
个药物残留量的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的林可霉素、克林霉素和大观霉素,用磷酸缓冲液提取,3%三氯乙酸沉淀蛋白,离子对
原理反相SPE柱净化,N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生,气相色谱-质谱法测定,外标法定量。
4 试剂和材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 盐酸林可霉素标准品:含量≥99%;盐酸克林霉素和盐酸大观霉素标准品:含量≥95%。
4.2 N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺。
4.3 乙酸:优级纯。
4.4 甲醇:色谱纯。
4.5 乙腈:色谱纯。
4.6 正己烷:色谱纯。
4.7 磷酸二氢钾:优级纯。
4.8 磷酸:优级纯。
4.9 氢氧化钾:优级纯。
4.10 三氯乙酸:优级纯。
4.11 十二烷基磺酸钠:色谱纯。
4.12 HLB固相萃取柱:60mg/3mL,或相当者。
4.13 提取液:取磷酸二氢钾1.36g,用水溶解并稀释至1000mL,用磷酸调节pH至4.0。
4.14 3%三氯乙酸溶液:取三氯乙酸3.0g,用水溶解并稀释至100mL。
4.15 2mol/L氢氧化钾溶液:取氢氧化钾11.6g,用水溶解并稀释至100mL。
4.16 十二烷基磺酸钠溶液:取十二烷基磺酸钠2.78g,用水溶解并稀释至50mL。
4.17 十二烷基磺酸钠缓冲液:取十二烷基磺酸钠2.78g,用水溶解,加乙酸1mL,用水稀释至
500mL。
4.18 1mg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准贮备液:精密称取林可霉素、克林霉素和大观霉素
标准品各10mg,分别于10mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的林可霉
素、克林霉素和大观霉素标准贮备液。2℃~8℃避光保存,有效期6个月。
4.19 100μg/mL标准工作液:精密量取1mg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准贮备液各
1.0mL,分别于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL的林可霉素、克林霉素和
大观霉素标准工作液。2℃~8℃避光保存,有效期1周。
5 仪器和设备
5.1 气相色谱-质谱联用仪:配EI源。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 冷冻高速离心机。
5.5 电热恒温水浴锅。
5.6 旋涡混合器。
5.7 均质机。
5.8 聚四氟乙烯离心管:50mL。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
6.1.1 猪、牛和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.1.2 牛奶和鸡蛋
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶和鸡蛋,混合,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
组织试料-20℃以下保存。鸡蛋和牛奶试料2℃~8℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 基质匹配标准曲线的制备
分别精密量取100μg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准工作液适量,用甲醇稀释,配制成浓
度为50、100、200、400、800、1600和3200μg/L的系列混合标准溶液,各取1.0mL,分别溶解经提取、
净化及吹干的空白试料残余物,充分混匀,室温吹干,加N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺500μL和
乙腈100μL,涡旋混合1min,密封,于75℃恒温箱衍生反应1h,于室温氮气吹干,加正己烷0.5mL溶
解残余物,涡旋混匀,供气相色谱-质谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,
绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2 提取
7.2.1 肌肉和肾脏组织
称取试料5g±0.05g,于50mL聚四氟乙烯离心管中,加提取液10mL,振荡5min,5000r/min
离心10min,取上清液于另一离心管中,残渣中加提取液10mL,重复提取一次,合并两次上清液,加
3%三氯乙酸溶液5mL,混匀,8000r/min离心10min,取上清液,用2mol/L氢氧化钾溶液调pH至
5.8±0.2,加十二烷基磺酸钠溶液2mL,涡旋混匀,静置15min,备用。
7.2.2 牛奶和鸡蛋组织
称取试料5g±0.05g,于50mL聚四氟乙烯离心管中,加提取液10mL,振荡5min,5000r/min
离心10min,取上清液于另一离心管中,残渣中加提取液10mL,重复提取一次,合并两次上清液,加正
己烷5mL,混匀,5000r/min离心15min,取下层液,用2mol/L氢氧化钾溶液调pH至5.8±0.2,加
十二烷基磺酸钠溶液2mL,涡旋混匀,静置15min,备用。
7.3 净化
HLB柱依次用甲醇3mL、水3mL和十二烷基磺酸钠缓冲液3mL活化,取备用液过柱,用水淋洗
两次,每次3mL,用甲醇4mL洗脱,收集洗脱液,于40℃水浴氮气吹至近干,室温吹干,加N,O-双(三
甲基硅烷基)三氟乙酰胺500μL和乙腈100μL,涡旋混合1min,密封,于75℃恒温箱衍生反应1h,室
温氮气吹干,用正己烷0.5mL溶解残余物,涡旋混匀,供气相色谱-质谱测定。
7.4 测定
7.4.1 色谱条件
7.4.1.1 色谱柱:毛细管色谱柱Rtx-5(5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.25mm),或相当者。
7.4.1.2 进样口温度:280℃。
7.4.1.3 进样方式:不分流。
7.4.1.4 进样体积:1μL。
7.4.1.5 模式:恒流。
7.4.1.6 载气:氦气(99.999%)。
7.4.1.7 柱流速:1mL/min。
7.4.1.8 柱温升温程序见表1。
表1 柱温升温程序
起始温度
终止温度
升温速率
℃/min
保持时间
min
总时间
min
2.0
2.0
19.5
7.4.2 质谱条件
7.4.2.1 离子源温度:200℃。
7.4.2.2 接口温度:280℃。
7.4.2.3 质谱采集(SIM):林可霉素和克林霉素扫描离子:126(定量离子),127,73。
大观霉素扫描离子:145(定量离子),171,187,201。
7.4.3 测定法
7.4.3.1 定性测定
通过样品色谱图的保留时间与标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准品各色谱
峰的特征离子相对照定性。样品与标准品的保留时间的相对偏差不大于5%;样品特征离子的相对丰
度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表2的规定,则可判断样品中存在相
应的被测物。
表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 >50% >20%至50% >10%至20% ≤10%
允许的相对偏差 ±10% ±15% ±20% ±50%
将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。
7.4.3.2 定量测定
取试样溶液和标准溶液,按外标法,以峰面积定量,标准溶液及试样溶液中林可霉素、克林霉素和大
观霉素响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下,林可霉素、克林霉素和大观霉
素标准溶液和空白添加试样溶液中特征离子质量色谱图见附录A。
7.5 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果计算与表述
单点校准:
c=
cSA
AS
(1)
基质匹配标准曲线校准:由AS=acS+b,求得a和b,则
c=
A-b
(2)
试料中林可霉素、克林霉素和大观霉素的残留量按式(3)计算:
X=
cV
(3)
式中:
c ---供试试料溶液中相应的林可霉素、克林霉素或大观霉素浓度,单位为微克每升(μg/L);
cS ---标准溶液中相应的林可霉素、克林霉素或大观霉素浓度,单位为微克每升(μg/L);
A ---供试试料溶液中相应的林可霉素、克林霉素或大观霉素的衍生物的峰面积;
AS---标准溶液中相应的林可霉素、克林霉素或大观霉素的衍生物的峰面积;
X ---供试试料中相应的林可霉素、克林霉素或大观霉素的残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
V ---溶解残余物体积,单位为毫升(mL);
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。
9 检测方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法的检测限,林可霉素和克林霉素为......
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