| 标准编号 | GB 29690-2013 (GB29690-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | Determination of marker residues of Nicarbazin in animal derived food by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 12,140 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物4, 4-二硝基苯缩脲残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于鸡的肌肉组织和鸡蛋中尼卡巴嗪残留标志物4, 4"-二硝基均二苯脲残留量的检测。 | GB 29690-2013
Determination of marker residues of Nicarbazin in animal derived food by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物
残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物
残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1 范围
本标准规定了动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物4,4-二硝基苯缩脲残留量检测的制样和液相色
谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于鸡的肌肉组织和鸡蛋中尼卡巴嗪残留标志物4,4′-二硝基均二苯脲残留量的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的4,4-二硝基苯缩脲,用乙腈提取,正己烷除脂,75%甲醇水溶液萃取,液相色谱-串联
质谱法测定,内标法定量。
4 试剂和材料
以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 4,4′-二硝基均二苯脲对照品:含量≥98.0%。
4.2 4,4′-二硝基均二苯脲-D8 对照品:含量≥98.0%。
4.3 乙腈:色谱纯。
4.4 甲醇:色谱纯。
4.5 无水硫酸钠。
4.6 正己烷。
4.7 乙酸铵。
4.8 二甲基甲酰胺。
4.9 0.1mol/L乙酸铵溶液:取乙酸铵1.93g,用水溶解并稀释至250mL。
4.10 75%甲醇水溶液:取甲醇75mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.11 75%甲醇水溶液饱和的正己烷:取75%甲醇水溶液100mL,加正己烷100mL,摇匀,静置分层,
取上层液。
4.12 1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准贮备液:精密称取4,4′-二硝基均二苯脲对照品10mg,于
10mL量瓶内,用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的4,4′-二硝基均二苯脲标
准贮备液。2℃~8℃保存,有效期3个月。
4.13 10μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准工作液:精密量取1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准贮备
液1.0mL,于100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为10μg/mL的4,4′-二硝基均二
苯脲标准工作液。-18℃保存,有效期3个月。
4.14 1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲-D8 标准贮备液:精密称取4,4′-二硝基均二苯脲-D8 对照品
10mg,于10mL量瓶内,用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的4,4′-二硝基
均二苯脲-D8 标准贮备液。2℃~8℃保存,有效期3个月。
4.15 10μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲-D8 标准工作液:精密量取1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲-D8
标准贮备液1.0mL,于100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为10μg/mL的4,4′-二
硝基均二苯脲-D8 标准工作液。-18℃保存,有效期3个月。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 涡旋振荡器。
5.5 离心机。
5.6 氮吹仪。
5.7 离心管:50mL。
5.8 滤膜:0.2μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
6.1.1 鸡蛋
取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋,去壳,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.1.2 鸡肌肉
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 提取与净化
称取试料2g±0.02g,于50mL离心管中,添加10μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲-D8 标准工作液适
量,加无水硫酸钠2g,乙腈8mL,涡旋0.5min,超声5min,5000r/min离心10min,取上清液,于
40℃氮气吹干,加75%甲醇水溶液饱和的正己烷1mL,涡旋10s,再加75%甲醇水溶液1.0mL,充分
涡旋混合,于40℃水浴中静置5min,2000r/min离心5min,取下层清液,滤膜过滤,供液相色谱-串联
质谱测定。
7.2 标准曲线的制备
精密量取10μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准工作液和10μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲-D8 标准
工作液适量,用75%甲醇水溶液稀释,配制成4,4′-二硝基均二苯脲-D8 浓度均为100ng/mL以及4,4′-
二硝基均二苯脲浓度为2、10、20、50、200和500ng/mL系列对照溶液,供液相色谱-串联质谱法测定。
以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关
系数。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱条件
7.3.1.1 色谱柱:C18(150mm×2.1mm,粒径5μm),或相当者。
7.3.1.2 流动相:甲醇+0.1mol/L乙酸铵溶液(75+25,体积比)。
7.3.1.3 流速:0.2mL/min。
7.3.1.4 柱温:30℃。
7.3.1.5 进样量:20μL。
7.3.2 质谱条件
7.3.2.1 离子源:电喷雾离子源。
7.3.2.2 扫描方式:负离子扫描。
7.3.2.3 检测方式:多反应监测。
7.3.2.4 电离电压:3.0kV。
7.3.2.5 源温:110℃。
7.3.2.6 雾化温度:350℃。
7.3.2.7 锥孔气流速:50L/h。
7.3.2.8 雾化气流速:450L/h。
7.3.2.9 定性、定量离子对和锥孔电压及碰撞能量见表1。
表1 DNC和内标的定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量
药物
定性离子对
m/z
定量离子对
m/z
锥孔电压
碰撞能量
eV
DNC
300.9 >136.9
300.9 >106.9
300.9 >136.9 20
DNC-D8 309.0 >141.0 309.0 >141.0 20 18
7.3.3 测定法
取试样溶液和对照溶液,作单点或多点校准,按内标法,以峰面积比计算。试料溶液及对照溶液中
4,4′-二硝基均二苯脲及4,4′-二硝基均二苯脲-D8 的峰面积比应在仪器检测的线性范围之内。试样溶
液中的离子相对丰度与空白添加标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表2的要求。对照溶液和空白
添加试样溶液中各特征离子质量色谱图见附录A。
表2 试料溶液中离子相对丰度的允许偏差范围 %
相对丰度 允许偏差
>50 ±20
20~50 ±25
10~20 ±30
≤10 ±50
7.4 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
单点校准:
c=
AA′iScSciS
AiSASc′iS
(1)
或标准曲线校准:由
AS
A′iS=
cS
c′iS
+b求得a和b,则
c=
ciS
(A
AiS-
b) (2)
试料中DNC残留量按式(3)计算:
X=
CV
(3)
式中:
c ---试样溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
A ---试样溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的峰面积;
A′iS---对照溶液中4,4′-二硝基均二苯脲-D8 的峰面积;
cS ---对照溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
ciS ---试样溶液中4,4′-二硝基均二苯脲-D8 的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
AiS---试样溶液中4,4′-二硝基均二苯脲-D8 的峰面积;
AS ---对照溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的峰面积;
c′iS ---对照溶液中4,4′-二硝基均二苯脲-D8 的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
X ---供试试料中4,4′-二硝基均二苯脲的残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
V ---溶解残余物所用75%甲醇水溶液的体积,单位为毫升(mL);
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。
9 检测方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法的检测限为0.5μg/kg,定量限为1μg/kg。
9.2 准确度
本方法鸡蛋试料在1μg/kg~10μg/kg添加浓度、鸡肌肉试料在1μg/kg~300μg/kg添加浓度水
平上的回收率为80%~120%。
9.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%。
附 录 A
色 谱 图
a)
b)
c)
说明:
1---DNC特征离子质量色谱图(300.9 >106.9);
2---DNC特征离子质量色谱图(300.9 >136.9);
3---DNC-D8 特征离子质量色谱图(309.0 >141.0);
4---空白组织总离子流色谱图(TIC)。
图A.1 4,4′-二硝基均二苯脲及内标物标准溶液特征离子质量色谱图......
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