| 标准编号 | GB 29691-2013 (GB29691-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留量的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of Nicarbazin residues in edible tissues of chicken by High Performance Liquid Chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 9,965 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了鸡可食性组织中尼卡巴嗪标识残留物4, 4"-二硝基均二苯脲残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于鸡肌肉、肝脏和肾脏组织中尼卡巴嗪标识残留物4, 4"-二硝基均二苯脲残留量的测定。 | GB 29691-2013: 食品安全国家标准 鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留量的测定 高效液相色谱法
GB 29691-2013 英文名称: Determination of Nicarbazin residues in edible tissues of chicken by High Performance Liquid Chromatographic method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留量的测定
高效液相色谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留量的测定
高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了鸡可食性组织中尼卡巴嗪标识残留物4,4′-二硝基均二苯脲残留量检测的制样和高
效液相色谱测定方法。
本标准适用于鸡肌肉、肝脏和肾脏组织中尼卡巴嗪标识残留物4,4′-二硝基均二苯脲残留量的
测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的4,4′-二硝基均二苯脲,用乙腈提取,正己烷除脂,C18柱净化,乙腈水溶液洗脱,高效
液相色谱测定,外标法定量。
4 试剂和材料
以下所用试剂,除特别注明者外,均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 4,4′-二硝基均二苯脲对照品:含量≥99%。
4.2 N,N-二甲基甲酰胺。
4.3 乙腈:色谱纯。
4.4 甲醇:色谱纯。
4.5 正己烷:色谱纯。
4.6 正丙醇。
4.7 C18固相萃取柱:500mg/3mL,或相当者。
4.8 洗脱液:取乙腈70mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.9 1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准贮备液:精密称取4,4′-二硝基均二苯脲对照品25mg,于
25mL的容量瓶中,用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的4,4′-二硝基均二
苯脲标准贮备液。-20℃以下保存,有效期6个月。
4.10 100μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准工作液:精密量取1mg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准贮
备液1.0mL,于10mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL的4,4′-二硝基
均二苯脲标准工作液。2℃~4℃以下保存,有效期1周。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 均质机。
5.5 旋转蒸发仪。
5.6 旋涡混合器。
5.7 超声波清洗器。
5.8 离心机。
5.9 鸡心瓶:50mL。
5.10 具塞离心管:10mL、50mL。
5.11 滤膜:有机相,0.45μm。
6 试料制备与保存
6.1 试料的制备
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 提取
称取试料2.0g±0.02g,于50mL离心管中,加乙腈10mL,超声5min,4000r/min离心12min,
取上清液,于50mL鸡心瓶中。残渣中加乙腈10mL,重复提取一次,合并两次上清液,加正丙醇3mL,
60℃旋转蒸近干。加乙腈0.5mL、正己烷1mL,涡旋3min,溶解,移至10mL的具塞离心管中。用乙
腈0.5mL和正己烷1mL重复涡旋溶解一次。合并两次溶液至10mL的具塞离心管中,加入正己烷
2mL,涡旋混合3min,4000r/min离心5min,弃上层正己烷液。再加正己烷2mL,重复提取一次,
4000r/min离心5min,取下层液,备用。
7.2 净化
C18柱用乙腈10mL活化,取备用液过柱,自然流干,收集滤液。用洗脱液4mL洗脱,收集洗脱液,
合并滤液和洗脱液,于60℃旋转蒸发近干,用流动相2.0mL溶解残余物,滤膜过滤,供高效液相色谱
测定。
7.3 标准曲线的制备
精密量取100μg/mL4,4′-二硝基均二苯脲标准工作液适量,用流动相稀释,配制成浓度为31.25、
62.5、125、250、500、1000、2000、4000和8000μg/L的系列标准溶液,供高效液相色谱测定。以测得
峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1 色谱条件
7.4.1.1 色谱柱:C18(250mm×4.6mm,粒径5μm),或相当者。
7.4.1.2 流动相:乙腈+水(58+42,体积比)。
7.4.1.3 流速:1.0mL/min。
7.4.1.4 检测器:紫外检测器。
7.4.1.5 波长:340nm。
7.4.1.6 柱温:30℃。
7.4.1.7 进样量:20μL。
7.4.2 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算。标准溶液及试样溶
液中4,4′-二硝基均二苯脲响应值应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下,标准溶液和空
白试料添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录A。
7.5 空白实验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果的计算与表达
试料中4,4′-二硝基均二苯脲的残留量按式(1)计算:
X=
A×cS×V
AS×m
(1)
式中:
X ---供试试料中4,4′-二硝基均二苯脲的残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
A ---试样溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的峰面积;
cS ---标准溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的浓度,单位为微克每升(μg/L);
V ---溶解残余物的流动相体积,单位为毫升(mL);
AS---标准溶液中4,4′-二硝基均二苯脲的峰面积;
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后三位。
9 检测方法的灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法的检测限为20μg/kg,定量限为100μg/kg。
9.2 准确度
本......
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