| 标准编号 | GB 31613.1-2021 (GB31613.1-2021) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 牛可食性组织中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法 | | 英文名称 | National food safety standard--Determination of amprolium residues in cattle-derived products by liquid chromatographic-tandem mass spectrometry method and high performance liquid chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X22 | | 国际标准分类 | 67.120 | | 字数估计 | 16,126 | | 发布日期 | 2021-09-16 | | 实施日期 | 2022-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | | 范围 | 本文件规定了牛可食性组织中氨丙啉残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本文件适用于牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中氨丙咪残留量的检测。 | GB 31613.1-2021: 食品安全国家标准 牛可食性组织中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法
食品安全国家标准
牛可食性组织中氨丙啉残留量的测定
液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
1 范围
本文件规定了牛可食性组织中氨丙啉残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中氨丙啉残留量的检测。
2规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试料中残留的氨丙啉经磷酸盐缓冲液提取(脂肪样品用乙腈提取),HLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，基质校准外标法定量。
5试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.2乙腈(CH₃CN):色谱纯。
5.1.3 甲酸(HCOOH):色谱纯。
5.1.4磷酸氢二钾(K₂HPO)。
5.1.5磷酸二氢钾(KH₂PO)。
5.2标准品
盐酸氨丙啉(Amoprolium Hydrochloride,Cu₄HiCIN₄·HCl,CAS号：137-88-2),含量≥98.0%。
5.3溶液配制
5.3.1 磷酸盐缓冲液(pH 6.0):取磷酸氢二钾2.0g、磷酸二氢钾8.0g,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。
5.3.20.1%甲酸溶液：取甲酸1mL,用水稀释至1000mL,混匀。
5.3.30.1%甲酸溶液-甲醇：取0.1%甲酸溶液900 mL、甲醇100 mL,混匀。
5.4标准溶液制备
5.4.1 标准储备液(100mg/L):取盐酸氨丙啉标准品适量(约相当于氨丙啉10 mg),精密称定，用甲醇溶解，稀释定容于100mL容量瓶，摇匀，即得。-18℃以下保存，有效期6个月。
5.4.2标准工作液：准确移取标准储备液适量，用0.1%甲酸溶液-甲醇逐级稀释成浓度为5μg/L、20μg/L、50 pg/L、200 μg/L、500μg/L和2000μg/L的系列标准工作溶液。现用现配。
5.5材料
HLB固相萃取小柱：60 mg/3mL,或相当者。
6仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。
6.3氮吹仪。
6.4 固相萃取装置。
6.5 均质机。
6.6 涡旋混合器。
6.7 聚丙烯塑料离心管：50 mL。
6.8离心机：8000 r/min或以上。
7试料的制备与保存
7.1 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空自或供试组织，绞碎，并使均质。
a) 取均质后的供试样品，作为供试试料；
b) 取均质后的空白样品，作为空白试料；
c) 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
7.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测。
8 测定步骤
8.1 提取
8.1.1 牛肌肉、肝脏和肾脏
取试料2g(准确至±0.02g),加磷酸盐缓冲液10.0mL,10000 r/min均质1 min,8000 r/min离心5 min,收集上清液，残渣加磷酸盐缓冲液10.0 mL,重复提取一次，合并上清液，备用。
8.1.2牛脂肪
取试料2g(准确至±0.02g),加乙腈10.0 mL,10000 r/min均质1 min,8000 r/min离心5min,取上清液于50mL塑料离心管中。残渣加乙腈10mL,重复提取一次，合并2次上清液，于50℃水浴中氮吹至干，用磷酸盐缓冲液20.0mL溶解残余物，备用。
8.2 净化
固相萃取柱用甲醇、水各3mL活化。取5.0mL备用液过柱，待液面到达柱床表面时用水3mL淋洗，挤至近干，加甲醇2mL,洗脱，洗脱液在40℃水浴氮气吹干。用0.1%甲酸溶液-甲醇(90:10,V/V)
1.0mL溶解残余物，过0.22μm滤膜，液相色谱-串联质谱仪测定。
8.3基质匹配标准曲线的制备
取空自试样依次按8.1和8.2处理至氮气吹干，加系列浓度标准工作液1.0mL溶解残渣，制成浓度为5μg/L、20μg/L、50μg/L、200 μg/L、500μg/L和2000μg/L的系列基质匹配标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，基质匹配标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
8.4.1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：C₁s色谱柱(150mm×2.1mm,3.5 μm)或相当者；
b) 流动相：0.1%甲酸溶液-甲醇(90:10,V/V);
c) 流速：0.2mL/min;
d) 柱温：30℃;
e)进样量：10μL。
8.4.2质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾(ESI)离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多反应监测(MRM);
d) 毛细管电压：3000 V;
e) RF透镜电压：0.5V;
f) 离子源温度：150℃;
g) 脱溶剂气温度：350℃;
h)锥孔气流速：50 L/h;
i) 脱溶剂气流速：1000 L/h;
j)二级碰撞气：氩气；
k) 定性离子对、定量离子对、碰撞能量和锥孔电压见表1。
8.4.3 测定法
取试料溶液和相应基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，按外标法以色谱峰面积定量。基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器......
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