| 标准编号 | GB 5009.261-2016 (GB5009.261-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定 | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of neurotoxic shellfish poisoning in shellfish | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | B51 | | 国际标准分类 | 67.120.30 | | 字数估计 | 7,770 | | 发布日期 | 2016-12-23 | | 实施日期 | 2017-06-23 | | 旧标准 (被替代) | SN/T 1573-2013 | | 标准依据 | National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局 | | 范围 | 本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法。本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素(NSP)的检测。 | GB 5009.261-2016: 食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定
GB 5009.261-2016 英文名称: Determination of neurotoxic shellfish poisons in shellfish for export -- Mouse biology method
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法。
本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素(NSP)的检测。
5 分析步骤
注:橡胶手套、玻璃制品等用过的器材,以及废弃的提取液应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上,以使毒素分解。
5.1 试样制备
5.1.1 样品采集
每个分析样品至少要取10个以上贝类,并使贝肉达200g以上。
冷冻样品置于保温盒中冷冻送检,或保证其处于低温状态(0℃~10℃)送检。如为带壳样品,应开壳去除水分后冷冻送检。
5.1.2 试样制备
5.1.2.1 生鲜带壳样品
用清水将贝壳外表彻底洗净,切断闭壳肌,开壳,用水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌
和连接在胶合部的组织分开,取出贝肉,切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集200g贝肉
放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min,捡出碎壳等杂物,将贝肉均质,备用。
5.1.2.2 冷冻样品
在室温下,使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品,按5.1.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉,除去贝
肉外部附着的冰片,抹去水分后,室温缓化。收集200g贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min,将贝肉均质,备用。
5.1.2.3 贝类罐头将罐头内容物沥干水分,倒入均质器充分均质,备用。
5.1.2.4 贝肉干制品称取100g干制品放入足量清水中浸泡24h~48h(4℃冷藏),沥干、均质、备用。
5.1.2.5 盐渍品用清水洗涤,流水脱盐,沥干,均质、备用。
5.2 试样提取取100g试样到500mL烧杯中,加入5g氯化钠和1mL浓盐酸。搅拌均匀。边搅拌边加热混合
物至沸腾,文火煮5min,冷却至室温。
将混合物移至500mL离心管中,用50mL乙醚冲洗烧杯,将冲洗液一同移到离心管中。向离心管
中再加入100mL乙醚,盖塞,充分振摇。6000r/min离心15min。
离心后小心倒出醚层(上层)溶液至1000mL分液漏斗中,用乙醚重复三次抽提离心管中的沉淀,
三次抽提用总量为250mL乙醚,转移醚层液体至分液漏斗中。轻轻振荡(不能生成乳浊液),静置分层
后去除水层(下层)及贝肉碎片。
将乙醚层移入500mL的圆底烧瓶中,减压浓缩(旋转蒸发器,35℃±1℃)去除乙醚。
用1%吐温-60生理盐水将浓缩物在刻度试管中稀释到10mL,充分振摇,制成均匀NSP-1%吐温-
60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的10g去壳贝肉的重量,以此悬浮液作为试验原液进行动物实验。
5.3 小白鼠试验
选择体重为19g~21g的健康ICR品系雄性小鼠6只,随机分2组:检测样品组和空白对照组(1%吐温-60生理盐水),3只/组。
分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有提取液溢出,须将该只小鼠丢
弃,并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间,连续观测930min。若小
鼠的中位数死亡时间在2h以内,则要用1%吐温-60生理盐水对待测液进行稀释后重新注射,直到小
鼠的死亡时间在2h~6h内。
6 分析结果的表述
6.1 待测样品校正鼠单位(CMU)的确定
根据待测样品的小鼠死亡时间(见表A.1)查出相应的鼠单位数 MU;根据小鼠的重量(见表A.2)
查出其对应的体重校正系数。同一只小鼠的鼠单位与体重校正系数相乘,即得该只小鼠的CMU。选取
检测样品受试组中3只小鼠CMU的中位数,即为该样品受试组的中位数CMU,以此值进行6.2的计算。
6.2.2 结果表述
在空白对照组小鼠正常的情况下进行如下判断和表述:
若小鼠的死亡时间等于360min,则待测样品的NSP毒力即相当于0.2MU/g。
若实验组中位数死亡时间小于120min,则应对样品提取液进行稀释,再选取3只小鼠进行试验,
直至得到中位数死亡时间为120min~360min为止,根据最后的稀释液实验结果计算样品的鼠单位毒
若实......
|